G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)檢測(cè)侵襲性真菌

G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)檢測(cè)侵襲性真菌侵襲性肺真菌病臨床表現(xiàn)不典型易被基礎(chǔ)疾病所掩蓋，確診通常需要侵入性的組織標(biāo)本，而侵入性的操作過程常因患者的病情所限難以實(shí)施。因此有較高的漏診率。目前國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院都在開展非侵襲性實(shí)驗(yàn)室技術(shù)如G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)，成為真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，以提高真菌感染的陽性率。根據(jù)侵襲性肺真菌病診斷指南，真菌感染的診斷因素包括宿主因素、臨床特征、微生物學(xué)檢查、組織病理學(xué)。確診疾病必須依賴組織病理等有創(chuàng)檢查和操作，培養(yǎng)過程又需要一定時(shí)間，從而無形中增加了漏診率，而新的血清學(xué)診斷方法，包括G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)以及對(duì)于真菌特異DNA的PCR技術(shù)，與臨床征象、微生物培養(yǎng)，尤其是CT掃描一起，為開始搶先治療、監(jiān)測(cè)疾病病程、評(píng)價(jià)治療反應(yīng)提供了更多有參考價(jià)值的資料。其中G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)連續(xù)2次陽性為有意義的檢查結(jié)果。G試驗(yàn)人體的吞噬細(xì)胞吞噬真菌后，能持續(xù)釋放1,3-p-D葡聚糖，使血液及體液中含量增高。通過G試驗(yàn)檢測(cè)1,3-p-D葡聚糖的含量能夠及時(shí)反映真菌感染情況。G試驗(yàn)適用于除隱球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期診斷，雖能測(cè)得包括曲霉和念珠菌在內(nèi)的更多致病性真菌，且初步的臨床研究顯示有較好的敏感性和特異性，假陽性率較低，但它只能提示有無真菌侵襲性感染，并不能確定為何種真菌感染。G試驗(yàn)檢測(cè)一般先于臨床癥狀平均4天，平均早于發(fā)熱5天，是早期檢測(cè)的重要手段。G試驗(yàn)檢測(cè)值<70pg/ml定義為陰性，此時(shí)不建議抗真菌治療，當(dāng)檢測(cè)值在70-95=""pg/ml時(shí)定義為灰區(qū)，此為觀察期，應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)，當(dāng)檢測(cè)值="">95pg/ml定義為陽性，建議結(jié)合臨床癥狀診斷治療。70>*薫1,3-B-D*薫1,3-B-D葡聚糖檢測(cè)（簡稱G試驗(yàn)）原理：1,3-p-D葡聚糖可特異性激活鰲變形細(xì)胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故稱G試驗(yàn)。診斷：侵襲性真菌感染?？稍\斷多種致病真菌感染：念珠菌、曲霉菌、肺孢子菌、鐮刀菌、地霉、組織胞漿菌、毛孢子菌等。不能用于檢測(cè)隱球菌和接合菌感染。檢測(cè)標(biāo)本：血液、尿液、腦脊液、胸腔積液、腹水等標(biāo)本采集：靜脈采血2ml（肝素抗凝）。mannoproteinshitin假陽性的情況PPLbilayermannoproteinshitin假陽性的情況PPLbilayer跖p1s3glucansynthase以下情況可出現(xiàn)假陽性：（1）使用纖維素膜進(jìn)行血透，標(biāo)本或患者暴露于紗布或其他含有葡聚糖的材料；（2）靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；（3）鏈球菌血癥；（4）操作者處理標(biāo)本時(shí)存在污染。另外，使用多糖類抗癌藥物、放化療造成的粘膜損傷導(dǎo)致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進(jìn)入血液等也可能造成假陽性，食用菌類，如蘑菇等食物可以導(dǎo)致假陽性。GM試驗(yàn)GM試驗(yàn)主要針對(duì)于侵襲性曲霉菌感染的早期診斷。半乳甘露聚糖（GM）是曲霉細(xì)胞壁的一種成分，GM從薄弱的菌絲頂端釋放，曲霉菌感染的患者血液內(nèi)存在GM.曲霉菌不入血，主要是侵襲血管壁，沿血管壁進(jìn)行侵襲，進(jìn)入血液。曲霉菌感染部位主要集中在肺部，從而引起肺部侵襲性曲霉，診斷曲霉菌在肺部是定植還是侵襲性生長，關(guān)鍵在于其是否合成GM.如果痰液或肺泡灌洗液標(biāo)本培養(yǎng)到曲霉菌且GM試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽性，即可診斷為曲霉菌侵襲性感染。GM試驗(yàn)?？稍诨颊吲R床癥狀出現(xiàn)前5-8d獲得陽性結(jié)果和影像學(xué)出現(xiàn)異常之前7.2天出現(xiàn)，并可對(duì)血清、腦脊液、肺泡或支氣管灌洗液進(jìn)行檢測(cè)，因而往往可以使診斷提前。GM釋放量與菌量呈正比，可以反映感染的程度，若兩次檢測(cè)陽性即可以診斷侵襲性曲霉菌感染，GM試驗(yàn)也可作為療效判斷的重要指標(biāo)。GM實(shí)驗(yàn)檢測(cè)值<0.65ug/l定義為陰性，此時(shí)不建議抗真菌治療。當(dāng)檢測(cè)值在0.65-0.85二""ug/l時(shí)定義為灰區(qū)，此為觀察期，應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)，當(dāng)檢測(cè)值="">0.85ug/l時(shí)定義為陽性，建議結(jié)合臨床癥狀診斷治療。0.65>所以GM試驗(yàn)是診斷侵襲性曲霉感染的微生物檢查證據(jù)之一，通過檢測(cè)GM值也可以作為治療效果的參考指標(biāo)之一。半乳糖甘露醇聚糖抗原檢測(cè)（簡稱GM試驗(yàn)）原理：是一種微孔板雙抗體夾心法。采用小鼠單克隆抗體EBA-2，檢測(cè)人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。半乳甘露聚糖是一種對(duì)熱穩(wěn)定的水溶性的物質(zhì)，是廣泛存在于曲霉和青霉細(xì)胞壁中的一類多糖。診斷：侵襲性曲霉菌感染（IPA）標(biāo)本采集：（分離膠管或普通管）標(biāo)本采集：血清標(biāo)本假陽性的情況（1）使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；（2）新生兒和兒童；（3）血液透析；（4）自身免疫性肝炎等；（5）食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物和污染的大米等。以下情況可出現(xiàn)假陰性：（1）釋放入血循環(huán)中的曲霉GM（包括甘露聚糖）并不持續(xù)存在而是會(huì)很快清除；（2）以前使用了抗真菌藥物；（3）病情不嚴(yán)重；（4）非粒細(xì)胞缺乏的患者。G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)根據(jù)于書嫻等[2]關(guān)于G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)對(duì)侵襲性真菌病診斷價(jià)值的Meta分析研究，聯(lián)合試驗(yàn)靈敏度可以達(dá)到0．88，特異度可達(dá)到0.81。G試驗(yàn)的敏感性優(yōu)于GM試驗(yàn)，特異性相似。并聯(lián)（一者為陽性結(jié)果為陽性）的敏感性優(yōu)于串聯(lián)（二者均為陽性結(jié)果為陽性），串聯(lián)的特異性優(yōu)于并聯(lián)。單獨(dú)檢測(cè)時(shí)，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)診斷效果相似；聯(lián)合檢測(cè)比單獨(dú)檢測(cè)有較高的診斷效果，且串聯(lián)時(shí)診斷效果最好。并且據(jù)任麗娜等[3]研究中顯示，在臨床抗真菌治療過程中，根據(jù)血清GM含量的變化進(jìn)行療效監(jiān)測(cè)，調(diào)整治療方案及判斷預(yù)后，對(duì)提高疾病的治愈率、降低病死率有重要的參考價(jià)值。參考文獻(xiàn)：于書嫻、崔學(xué)范等，G試驗(yàn)