PCR質量手冊簡要概述

PCR質量手冊簡要概述文獻編號 前言某某省某某醫(yī)院臨床基因擴增檢查實驗室建于12月。實驗室的設立、設備及人員配備均嚴格按照部、省臨床基因診療實驗室規(guī)范化原則結合本身條件而建立。各項管理制度、質量確保體系以及基本操作規(guī)定和原則操作程序均已制訂。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴增檢查實驗室將面對全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診療實驗和有關知識的培訓工作,使被培訓人員掌握臨床基因診療基礎理論知識、實驗室管理和質量確保方法、規(guī)范化操作辦法以及理解基因診療領域的進展。同時還將開展基因(重要是遺傳基因方面)的臨床檢測及科學研究工作,為我省臨床基因診療事業(yè)的發(fā)展做出一份奉獻。質量方針臨床基因擴增檢查實驗室是嚴格按照部、省臨床基因擴增實驗室規(guī)范化原則進行管理與操作,始終遵照:以病人為中心以質量為核心以科學為根據編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版崗位職責1．實驗室負責人崗位職責擬定質量方針,編制質量手冊,并組織人員學習,統(tǒng)一思想。負責實驗室全方面質量,涉及試劑盒的質量檢查;操作的質量檢查;質量控制(室內室間質評)的成果檢查;實驗成果的核對、質檢和簽發(fā)報告;擬定人員培訓計劃;安排日常工作,確保及時發(fā)出質量合格的報告。定時審核和評審質量手冊的運行狀況。對實驗室對內外發(fā)出的報告負責,并以簽名簽字形式表達。2．技術人員崗位職責準時消毒、清潔實驗室,并統(tǒng)計簽字。檢查儀器設備的維護狀況,統(tǒng)計使用狀況并簽字。按質量手冊規(guī)定的原則操作程序(SOP)操作實驗,并填寫報告簽字。按規(guī)定進行實驗的自主質控工作(每次實驗必須有室內質控方法),并做好統(tǒng)計簽字。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版人員培訓及成果人員構成及技術檔案本室有工作人員2人,其中1名中級,1名初級。2．培訓統(tǒng)計及專業(yè)文章發(fā)表狀況編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版實驗室設施環(huán)境及規(guī)章制度1、實驗室分區(qū)管理平面圖:見圖示1。2、實驗室基本設施:分隔和面積:實驗室嚴格按照原則,分隔為三個獨立的工作室:試劑準備室、樣品解決室、基因擴增室。工作流程:從試劑準備→樣品解決→基因擴增,工作人員只能單向流動。進入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套。通風:各室空氣流通性良好。照明:室內有良好的照明度。環(huán)境:干凈、無菌;各室均配有紫外消毒設備。各室的儀器、實驗和文具用品以及清潔物品均屬于各室專用。3、實驗室消毒隔離及污物解決:見實驗室廢棄物解決的原則操作程序。4、實驗室規(guī)章制度:4.1總則4.1.1進入基因診療實驗室的任何工作人員都必須恪守實驗室規(guī)則;非工作人員未經允許不得入內,特別不得為找人而逆向誤入PCR實驗室,以免造成不應有的污染。臨床基因診療實驗室分試劑準備、樣品解決、基因擴增室三個室,各室擁有專用的儀器設備及實驗物品(含加樣器、試管架、吸頭、統(tǒng)計紙、筆、甚至清潔用品等),不得混用,須貼上不同顏色標簽予以區(qū)別;試劑準備室為白色標記、樣品制備室為藍色標記、擴增室為綠色標記。臨床基因診療實驗室工作人員應含有醫(yī)學檢查、微生物學檢查基本知識、大中專以上學歷、并受過PCR實驗的基本知識和技能培訓。4.2.1進入實驗室的工作人員必須恪守實驗室的唯一流向的規(guī)定,嚴禁反向流動。4.2.2進入實驗室,必須更換本室有顏色標記的工作服(含帽和鞋)。勤換洗工作服。4.2.3接受樣品時應檢查樣品與否符合規(guī)定、貼上標簽并做好登記。4.2.4實驗室技術人員必須嚴格按照PCR實驗原則操作程序進行,涉及實驗室擦洗、臺面消毒,離心管、吸頭的無菌滅活準備,儀器使用和廢棄物解決等。4.2.5進入PCR實驗室后區(qū)的物品不許帶進PCR實驗室前區(qū)。4.2.6任何實驗操作涉及儀器使用等狀況均須做好統(tǒng)計。4.2.7檢測成果報告應完整(涉及:檢查項目、靶核酸類型及成果等),并經專業(yè)負責人審核簽字后方可發(fā)出。4.2.8每天實驗開始前,結束后均應按規(guī)定清潔、消毒地面和實驗臺面。4.2.9保持臨床基因診療實驗室內空氣唯一流向和空氣流通。4.2.10定時校準和維修PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器、設備。4.2.11實驗室內不得從事與實驗無關事宜如聊天、飲食、吸煙等;室內禁用電電扇。4.2.12每天下班前解決好廢棄物品,關好水、電和門窗。4.3試劑準備室4.3.1實驗人員進入該室須穿本室專用白色工作服。實驗中須戴手套。4.3.2每天實驗開始前,清潔實驗臺并應打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3取出當天實驗需配制和使用的試劑,其它試劑要立刻收好,放回冰箱內。4.3.4實驗中使用的離心管、吸頭等應通過滅活無菌解決,(應在消毒的使用期內)。4.3.5其它室的用品不得帶入本室。4.3.6每次實驗都有統(tǒng)計;且使用本室專用的、帶有本室標記的統(tǒng)計本、紙筆。4.3.7實驗完畢后要整頓、清潔工作臺面。4.4樣品準備室4.4.1實驗人員進入該室須穿本室專用蘭色工作服。實驗中須戴手套,手套需常更換。4.4.2每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并應打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3樣品的接受,登記,保存和提取按原則操作程序及試劑盒規(guī)定進行。4.4.4使用本室專用的,經滅菌解決的加樣器和帶濾心的吸頭。4.4.5做好實驗統(tǒng)計,并使用本室專用的統(tǒng)計本和筆。4.4.6PCR擴增后區(qū)的物品不得帶入本室。4.4.7實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。4.5基因擴增室4.5.1實驗人員進入該室須穿本室專用綠色工作服．實驗中須戴手套,手套需常更換。4.5.2每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并應打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3使用本室專用的,經滅菌解決的加樣器和帶濾心的吸頭。4.5.4需在此進行操作的,如巢式擴增,第一次擴增的模板必須在本室內從反映管中取出,并加入另一只反映管中,此操作不可返回擴增前區(qū)進行。4.5.5非全封閉操作(即須啟動反映管),應打開排電扇24小時排氣,保持室內負壓狀態(tài)。4.5.6做好實驗統(tǒng)計,且使用本室專用的統(tǒng)計本和筆。4.5.7PCR擴增室的物品不得帶入擴增前區(qū)。4.5.8實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版儀器設備和標準物質儀器設備的配備1.1試劑準備室內配備的設備:紫外燈、普通高速臺式離心機、旋渦振蕩器、一套持續(xù)可調式移液槍和無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、多個規(guī)格的無菌備用的離心管、PCR反映管和玻璃器皿、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.2樣品制備室內配備的設備:紫外燈、臺式高速冷凍離心機、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套持續(xù)可調式移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、多個規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃器皿、實驗臺及本室專用的樣品登記本、文具、紙張;本室專用的藍色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.3基因擴增室內配備的設備:紫外燈、PCR擴增儀、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。儀器設備的使用、維護及校準見儀器使用、維護及校準原則操作程序。儀器設備的統(tǒng)計和標記全部有關基因診療實驗室儀器使用、維護及校準的操作均統(tǒng)計備案。校準后的儀器貼上標記,闡明校準日期和狀態(tài)。原則物質陽性、陰性對照:來源于對應的檢測試劑盒。室內質控物、室間質評物:來源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版校準移液器、擴增儀、離心機等對檢測成果有效性、精確性有影響的檢查設備,投入使用前必須進行校準,并每年校準1次。參加衛(wèi)生部組織的室間質評。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版檢驗方法檢查項目及辦法項目:乙型肝炎病毒DNA定量檢測、丙型肝炎病毒RNA定量檢測辦法:TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測TaqMan熒光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量檢測操作手冊儀器使用、維護及校準原則操作程序樣品采集、保存及運輸原則操作程序實驗過程原則操作程序(涉及:試劑準備、樣品制備、基因擴增和產物檢測SOP)各檢測項目的準操作程序實驗室消毒及污物解決原則操作程序質量確保方法室內質控3．1核酸提取質控在核酸提取中,帶一份弱陽性質控樣本和一份陰性質控樣本(基質與待測樣本相似),分別鑒定核酸提取的有效性和核酸提取過程中與否發(fā)生污染。3．2核酸擴增質控靶核酸為DNA:帶一份弱陽性靶DNA質控和一份陰性質控,以鑒定DNA擴增的有效性;靶核酸為RNA:一份弱陽性cDNA質控、一份弱陽性RNA質控和一份陰性對照以鑒定轉錄和DNA擴增的有效性3．3產物檢測質控一份靶DNA或已稀釋的擴增靶DNA陽性質控、一份陰性質控以及一份試劑空白質控與待測的擴增樣本同時檢測,以鑒定產物檢測中核酸雜交及顯色測定的有效性。室間質控參加由衛(wèi)生部臨床檢查中心組織的全國臨床基因擴增項目的室間質量評價。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版樣品處置1．樣本的標記:標記由三部分構成--標本采集日期、該檢測批次的標本序號和標本類型,三部分間無間隔符號,例如:02080101B分別表達年、月、日、序號和血液標本,序號(01-99),整個標記為8-11位;2．樣本的采集、保存和運輸:見樣品采集、保存及運輸原則操作程序。3．樣本的接受、統(tǒng)計:樣品接受后,立刻貼上本室設計的樣品標記,并在接受標本統(tǒng)計表上按規(guī)定進行登記。無簽、遲送的樣品、樣品量局限性、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品,回絕接受并統(tǒng)計于拒收標本記錄表。4．樣本的解決:見樣品制備原則操作程序編制: 日期: 審批: 日期: 文獻編號 版本 第二版報告涉及下列信息:實驗室名稱檢測項目(如丙型肝炎病毒RNA定量檢測)樣本接受和檢查日期病人的信息(姓名、性別、年紀、門診或住院病區(qū)及床號)檢查辦法(如TaqMan熒光定量PCR檢測法)成果定性××檢測項目檢測陰性或陽性定量××檢測項目檢測