臨床微生物學檢驗：7-不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

Nonfermenters概念：是一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧的無芽胞革蘭陰性桿菌.一、概述二、銅綠假單胞菌三、嗜麥芽窄食單胞菌、不動桿菌屬、產堿桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬和軍團菌屬一、概述科、屬、種繁多。大多是條件致病菌。感染日益增多。一般不發(fā)酵葡萄糖，即使發(fā)酵，僅產生弱酸,或以氧化形式利用葡萄糖。生化特征相似。初步分群試驗為：O/F試驗、氧化酶和動力觀察（在半固體中不顯，多用懸滴法）。在10+個菌屬中，最常見是假單胞菌屬，在該菌屬中以銅綠假單胞菌多見。常見不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定二、銅綠假單胞菌

Pseudomonasaeruginosa

（一）生物學性狀1、形態(tài)與染色：G-b，一端有單鞭毛，運動活潑。有莢膜、無芽胞，臨床分離菌株有菌毛。2、培養(yǎng)特性：專性需氧，在普通培養(yǎng)基、血平板、MAC、SS上均可生長，最適溫度為35℃，可產生銅綠色水溶性色素與帶熒光的水溶性熒光素，β溶血。生姜味。3、是醫(yī)院感染的常見病源，對多種抗生素耐藥。

4、生化反應：分解糖的能力很弱，僅在O/F培養(yǎng)基氧化利用葡萄糖；氧化酶陽性，大多分解尿素。5、抗原構造與分型：O抗原、H抗原、S抗原(粘液Ag)和菌毛抗原等。

6、抵抗力：對理化因素的耐受性較強，耐干燥、紫外線，但不耐熱，56℃30min可滅活，1﹪石碳酸，5min即殺滅。O抗原可分為外膜蛋白和脂多糖，前者為保護型抗原，免疫性強，有屬的特異性；后者有型的特異性，可有用于分型。（二）臨床意義1、分布廣泛：自然界和人體2、致病物質：粘附素、多糖莢膜、內外毒素和多種侵襲酶。3、臨床感染類型：繼發(fā)感染為主，條件致病菌。也是醫(yī)院感染的主要病原菌。人類非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70-80%。（三）微生物檢查1、標本采集：常見傷口和燒傷感染的膿液、敗血癥的血液2、檢驗程序：膿液，痰液，尿液，血液，糞便血平板，可疑菌落MAC、SS直接涂片G染色涂片G染色生化反應（）3、檢查方法：（1）標本直接檢查

顯微鏡檢：G-b，綠膿色素鑒別?？乖瓩z測：血清學，噬菌體分型。核酸檢測：指紋圖譜，PFGE，芯片，PCR等（2）分離培養(yǎng)

血平板：金屬光澤，特殊氣味，藍綠色素。MAC：微小無光澤半透明。48h后中心棕綠色。SS:微小無色半透明。類似沙門菌。O/F實驗，氧化酶，精氨酸水解、酰胺酶、葡萄糖酸氧化、42℃生長、明膠液化、鞭毛檢測等（3）生化鑒定：4.結果分析應結合臨床，標本檢出率，耐藥性等進行分析。其他假單胞菌也可從患者血，尿，痰液等標本及醫(yī)院環(huán)境中分離出來：熒光假單胞菌，惡臭假單胞菌，斯氏假單胞菌。三、嗜麥芽窄食單胞菌P142Stenotrophmomasmaltophilia（一）分類：為窄食單胞菌屬。近期發(fā)現(xiàn)一個新的菌種。（二）臨床意義：臨床感染率僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌，近年有上升趨勢，主要引起呼吸道、尿道和傷口感染。（三）微生物特性：革蘭陰性短桿菌，一端叢鞭毛，無芽胞，無莢膜。普通培養(yǎng)基上菌落中等大小、光滑濕潤、呈黃色。生化反應較特殊，氧化酶陰性，注意與腸桿菌區(qū)別。（四）微生物鑒定：1、標本采集：據(jù)感染部位采取適當標本，血液標本應先增菌。2、分離培養(yǎng)與鑒定：G-b

1）分離培養(yǎng)：在血平板與普通培養(yǎng)基上生長良好，菌落中等大小、圓形、光滑、濕潤，產生不溶血的黃色色素；2）生化鑒定：氧化酶陰性，液化明膠，水解七葉苷，賴氨酸脫羧酶陽性，氧化分解麥芽糖；3）藥物敏感試驗：含β-內酰胺酶，臨床治療首選磺胺類（TMP/SMZ）、喹諾酮類、環(huán)丙沙星等。對亞胺培南（β-內酰胺酶抑制劑）天然耐藥。四、其他常見非發(fā)酵菌除外假單胞菌屬，臨床常分離到的非發(fā)酵菌還有不動桿菌屬、產堿桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬和軍團菌屬等。（一）不動桿菌屬Acinetobacter是一群不發(fā)酵糖類，氧化酶陰性，無動力的革蘭陰性桿菌，常見菌種有：醋酸鈣不動桿菌、鮑曼不動桿菌等。1、臨床意義：發(fā)病率僅次于假單胞菌屬，為條件致病菌。2、生物學特性：G-b（圖9-6），不易脫色。專性需氧菌，常成雙排列也可鏈狀。3、微生物學鑒定：分離培養(yǎng)（圖9-7）與生化鑒定，注意與腸桿菌科的細菌鑒別（因為氧化酶陰性）。Iso15189認可標準化操作血液，尿液，痰等MAC粉紅色菌落或血瓊脂平板灰白色菌落氧化酶試驗陰性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗不動桿菌科（二）產堿桿菌屬

Alcaligemes

醫(yī)院感染的病原菌之一。為革蘭陰性短桿菌，有動力，專性需氧，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)。氧化酶陽性，不分解任何糖類，除能利用檸檬酸鹽和部分菌株能還原硝酸鹽外，多數(shù)生化反應陰性。正常菌群。臨床分離最常見的是糞產堿桿菌（模式菌）。Iso15189認可標準化操作血液，尿液，痰等MAC無色透明菌落，血瓊脂平板灰白色氧化酶試驗陽性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗產堿桿菌科無動力，產生黃色色素的革蘭陰性桿菌。分布廣泛，常從食品中檢出，引起食物中毒、敗血癥等，是一種條件致病菌。引起新生兒化膿性腦膜炎。1、生物學特性:G-b，無特殊構造，需氧，氧化酶+，觸酶+，磷酸酶+。2、微生物學鑒定：G-b、分離培養(yǎng)、生化（表9-8）。（三）黃桿菌屬FlavobacteriumIso15189認可標準化操作血液，尿液，痰等血瓊脂平板呈黃色菌落氧化酶試驗陽性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗金黃桿菌科（四）莫拉菌屬

Moraxella1.分類：

1994年把莫拉菌屬歸于奈瑟菌科，莫拉菌屬又分為莫拉亞屬和布蘭漢亞屬。醫(yī)學上重要的莫拉菌有9種。今年來，卡他莫拉菌引起的疾病逐年上升。

2.微生物特征：革蘭陰性球桿菌，大多有莢膜，專性需氧，營養(yǎng)要求高，在血平板上生長良好，無色，菌落大，不溶血。氧化酶為陽性，觸酶陽性，不分解糖類，吲哚陰性，H2S陰性。3.臨床意義：是粘膜表面的正常菌群，致病性較低，一般位于呼吸道，較少位于生殖道，偶爾可致全身化膿性感染。

4.微生物鑒定：革蘭陰性球桿菌、分離培養(yǎng)與生化試驗。Iso15189認可標準化操作血液，尿液，痰等血瓊脂平板灰白色菌落，不溶血氧化酶試驗陽性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗報告結果（五）軍團菌屬Legionella1、命名與分類：軍團菌屬是1976在美國費城舉行退伍軍人集會期間爆發(fā)的不明原因的流行病，以發(fā)熱、咳嗽為主的呼吸道感染，與會者149人發(fā)病，其他人員72人發(fā)病，34人死亡。1978年美國CDC及WHO在亞特蘭大正式命名為軍團桿菌。1994年定為軍團菌科，軍團菌屬。時有新種發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有45種，60多個血清型。

2、臨床意義：該菌存在于水和土壤中，常經供水系統(tǒng)、溶洞和霧化吸入而引起肺炎型和非肺炎型感染。肺炎型（重癥）主要由嗜肺軍團菌引起，潛伏期2~10天，除呼吸道癥狀外還有明顯的多器官損害，頭痛、發(fā)熱、伴消化道及神經系統(tǒng)癥狀及體征，致死率高。3、微生物特征：軍團菌屬的細菌為革蘭陰性桿菌，有動力，專性需氧，同時環(huán)境中還需2.5﹪~5.0﹪CO2，最適pH6.4~7.2，最適生長溫度35℃，營養(yǎng)要求苛刻，普通培養(yǎng)基、血平板和巧克力平板均不生長，最適培養(yǎng)基是BCYEa（活性炭-酵母浸液瓊脂培養(yǎng)基），生長緩慢。4、微生物檢驗：1）標本采集：根據(jù)臨床感染部位采取適當合格的標本，病理組織標本和環(huán)境污染標本。

2）檢驗方法：

直接涂片染色鏡檢：革蘭染色意義不大。

分離培養(yǎng)：營養(yǎng)要求苛刻、生長緩慢。需一定濕度，適溫為35~37℃，在BCYEa（活性碳-酵母浸液瓊脂）上3~5天可形成1~2mm有光澤菌落。污染標本可用選擇培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)。

3）免疫學檢