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文檔簡介

實驗八

細菌的藥物敏感性試驗紙片瓊脂擴散法液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法實驗目的熟悉液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法（liquidculturemediumserialdilutiontest）的試驗方法、結(jié)果判定及其意義；學習用液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法判定MIC熟悉用紙片瓊脂擴散法測定細菌對藥物敏感度的方法和結(jié)果判定；熟悉麥氏比濁管的使用方法；一、紙片擴散法抗生素：青霉素、環(huán)丙沙星、復方新諾明、慶大霉素（國標）；待測菌種：E.coli和金黃色葡萄球菌；稀釋濃度：菌液濃度108；用生理鹽水稀釋方法：將菌液涂布于平板，后將平板分割為4個區(qū)域，將待測藥敏紙片放置于中間部分；實驗方法步驟:

用無菌棉簽均勻涂布于平板（涂布三次，每次旋轉(zhuǎn)60°，最后沿平板內(nèi)邊緣涂抹一周）

室溫平衡5min

貼紙片（各紙片中心相距應大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣應大于15mm）

35攝氏度，16－18h觀察結(jié)果注意事項：1.先倒平板，配好的菌液在15min內(nèi)接種完成。2.藥敏紙片間距不小于24mm，于平板邊緣間距不小于15mm。3.菌液涂布完成，室溫放置5min，紙片貼實，倒置放置孵育過夜。4.每次貼不同藥敏紙片時，鑷子燒灼滅菌。實驗方法二、液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法測定MIC

抗生素：Gm慶大霉素，32U

倍比稀釋：2倍稀釋，留最后一孔不加抗生素作為對照；

菌種：E.coli和金黃色葡萄球菌

菌液濃度：5*105（50微升稀釋到10ml培養(yǎng)基中）

菌液使用量：每孔加入100微升稀釋好的菌液試管編號：抗生素：(32μg/ml)MH肉湯抗生素含量菌液(μl)：（1.5×105

/ml)12345678910100μl100μl100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl

32168421不加抗生素100……….

100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、100μl、(棄去)對倍稀釋：(2)方法注意事項：1.菌液從低濃度向高濃度加。2.移液器不耐高溫，不要靠近火焰使用；用完后調(diào)節(jié)回最大量程；3.試驗后洗手；4.注意將桌面收拾干凈，方便做清潔的同學注意事項：移液器不耐高溫，不

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