細(xì)胞免疫檢測(cè)課件

細(xì)胞免疫檢測(cè)南京中醫(yī)藥大學(xué)西內(nèi)教研室徐慶細(xì)胞免疫檢測(cè)南京中醫(yī)藥大學(xué)西內(nèi)教研室徐1一.細(xì)胞免疫概念由T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)為細(xì)胞免疫。細(xì)胞免疫并不是單獨(dú)由T淋巴細(xì)胞一種細(xì)胞參與，在T細(xì)胞發(fā)揮免疫效應(yīng)的過(guò)程中,依賴于多種免疫細(xì)胞和免疫分子的參與，其中包括B淋巴細(xì)胞、K細(xì)胞、NK細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等。細(xì)胞免疫見(jiàn)于細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)病原體的抗感染作用，遲發(fā)型超敏反應(yīng)，抗腫瘤免疫，同種移植排斥反應(yīng)，移植物抗宿主反應(yīng)，某些自身免疫性疾病。一.細(xì)胞免疫概念由T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)為細(xì)2二.

細(xì)胞免疫測(cè)定的方法：

體內(nèi)試驗(yàn):皮內(nèi)試驗(yàn)方法體外試驗(yàn):免疫功能的測(cè)定淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)二.細(xì)胞免疫測(cè)定的方法：

3

T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)細(xì)胞免疫功能測(cè)定巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)

K與NK細(xì)胞活性檢測(cè)

T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)細(xì)胞表面受體測(cè)定B細(xì)胞膜表面IgG測(cè)定淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)定

細(xì)胞表面分化抗原T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定

B細(xì)胞表面分化抗原測(cè)定

4三.T淋巴細(xì)胞1.分群

CD4+(Th)CD3CD8+(Ts)

Th/Ts三.T淋巴細(xì)胞1.分群5

Th1:分泌IL-2、IFN-γ、TNF-βTh2:分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10CD4+抑制細(xì)胞誘導(dǎo)亞群TI（CD4+CD45RA+）輔助細(xì)胞誘導(dǎo)亞群Th（CD4+CD29+）CD3

殺傷T細(xì)胞亞群Tc（CD8+CD28+）CD8+抑制T細(xì)胞亞群

Ts（CD8+CD28-）

62.功能1)Ti：

抑制細(xì)胞誘導(dǎo)亞群其主要功能是誘導(dǎo)Ts細(xì)胞的產(chǎn)生。2）Th：輔助細(xì)胞誘導(dǎo)亞群輔助B細(xì)胞產(chǎn)生抗體和誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞溶解作用（CML）。2.功能1)Ti：抑制細(xì)胞誘導(dǎo)亞群其主要功能是誘導(dǎo)Ts73）Tc：靜止的CTL以前體細(xì)胞形式存在，在識(shí)別并結(jié)合APC表面抗原多肽-MHC-1類(lèi)分子復(fù)合物后，活化為抗原特異性的CTL效應(yīng)細(xì)胞，發(fā)揮特異性殺傷靶細(xì)胞的功能。4）Ts：細(xì)胞作用的靶細(xì)胞主要是抗原特異性的Th和B細(xì)胞。通過(guò)對(duì)Th和B細(xì)胞的抑制作用，發(fā)揮對(duì)各種免疫功能的負(fù)調(diào)節(jié)作用。Ts細(xì)胞功能低下，使Th細(xì)胞活性相對(duì)增高，而使B細(xì)胞多克隆激活產(chǎn)生大量的自身抗原。3）Tc：靜止的CTL以前體細(xì)胞形式存在，在識(shí)別并結(jié)合APC8Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)和輔助CTL細(xì)胞表達(dá)殺傷功能；Th2細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫，輔助B細(xì)胞產(chǎn)生高滴度抗體和參與速發(fā)型超敏反應(yīng)。Th1細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)和輔助CTL細(xì)93.參考值CD3:0.65～0.75CD3＋CD4＋：0.32～0.42CD3＋CD8＋:0.21～0.32CD4＋CD29＋:0.20～0.32CD4＋CD45RA＋:0.085～0.20CD8＋CD28＋:0.10～0.16CD8＋CD28－:0.054～0.133.參考值10四．Ｂ淋巴細(xì)胞

1．分群：目前對(duì)Ｂ淋巴細(xì)胞亞群的研究，尚不如對(duì)Ｔ淋巴細(xì)胞亞群研究的深入，根據(jù)是否表達(dá)CD5可將Ｂ細(xì)胞分為Ｂ1(CD5+)細(xì)胞和B2(CD5-)細(xì)胞兩個(gè)亞群。B2細(xì)胞即通常參與體液免疫的B細(xì)胞，而B(niǎo)1細(xì)胞在發(fā)生、分布、表型和功能等方面具有不同于B2細(xì)胞的特點(diǎn)。四．Ｂ淋巴細(xì)胞1．分群：112.B細(xì)胞表面特異性抗原：

CD19、CD20、CD22CD19：為全部B細(xì)胞所共有的表面標(biāo)志，B細(xì)胞活化后亦不消失；CD20：表達(dá)于靜止的成熟B細(xì)胞階段，在B細(xì)胞激活后逐漸丟失；CD22：當(dāng)B細(xì)胞活化時(shí)，表達(dá)增強(qiáng)，一旦分化為漿細(xì)胞則表達(dá)下降。2.B細(xì)胞表面特異性抗原：

CD19、CD20、CD212五．臨床意義(一).輔助診斷1.CD3：↑（1）甲亢、淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎（2）傳染性單核細(xì)胞增多癥（3）急性淋巴細(xì)胞型白血?。?）重癥肌無(wú)力(5）SLE活動(dòng)期（6）排斥反應(yīng)

五．臨床意義(一).輔助診斷132.CD3↓：（1）原發(fā)性細(xì)胞免疫缺陷病（如先天無(wú)胸腺癥）（2）某些惡性腫瘤（3）流感、麻疹等病毒感染2.CD3↓：143.CD4/CD8：↓1)．艾滋病（CD4↓↓，）

CD4+細(xì)胞數(shù)>200個(gè)/mm3預(yù)后較好

CD4+細(xì)胞數(shù)<200個(gè)/mm3艾滋病期

CD4+細(xì)胞數(shù)<50個(gè)/mm3艾滋病末期2．SLE(系統(tǒng)性紅斑狼瘡)活動(dòng)期(CD4↓，CD8↑)3.急性乙肝及無(wú)癥狀攜帶者(CD8↑)4．病毒感染期（如麻疹、水痘、猩紅熱等）（CD4↓、CD8↑）5．急性期和復(fù)發(fā)的傳染性單核細(xì)胞增多癥（CD8↑↑）6．腫瘤病人（CD4↓、CD8↑)7．血液病如AA、粒細(xì)胞減少癥（CD4↓、CD8↑）3.CD4/CD8：↓1)．艾滋病（CD4↓↓，）154.CD4/CD8：↑1．類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[CD4↑(CD4+CD29+)]2．重癥肌無(wú)力3．自身溶血性貧血4．移植排斥反應(yīng)4.CD4/CD8：↑1．類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[CD4↑(C165.Th1和Th2細(xì)胞1.)在自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制中起重要作用：

SLE、RA患者Th1和Th2細(xì)胞發(fā)生偏移。RA以Th1占優(yōu)勢(shì)。RA患者關(guān)節(jié)液IFN-γ/IL-4為近4倍，滑膜中IFN-γ/IL-4為4.3倍。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，通過(guò)粘膜耐受下調(diào)Th1或上調(diào)Th2細(xì)胞，均可抑制該病的發(fā)生發(fā)展，從而起到保護(hù)作用。SLE患者有少量細(xì)胞產(chǎn)生Th1細(xì)胞因子，而有大量細(xì)胞產(chǎn)生Th2細(xì)胞因子，提示Th2與SLE的致病作用密切相關(guān)。（但也有研究表明，SLE患者Th1/Th2細(xì)胞比率與正常對(duì)照組無(wú)明顯差別，且并發(fā)Ⅳ型狼瘡腎炎的SLE患者以Th1細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)）。5.Th1和Th2細(xì)胞1.)在自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制中起172.)移植排斥反應(yīng)中的作用：腎移植排斥反應(yīng)產(chǎn)物中的CD4+和CD8+T細(xì)胞克隆比外周血相應(yīng)克隆更多地產(chǎn)生Th1細(xì)胞因子，因此Th1細(xì)胞在排斥反應(yīng)中起重要作用。3)感染性疾病:

Th2細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生IL-4和IL-5誘導(dǎo)強(qiáng)抗體反應(yīng),并引起嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞的聚集和活化,從而抵御細(xì)胞外病原體感染,特別是寄生蟲(chóng)的感染。

2.)移植排斥反應(yīng)中的作用：18(二)腫瘤病人治療效果的判定及預(yù)后免疫功能正常的病人，一般預(yù)后較好，反之預(yù)后差。接受常規(guī)治療的腫瘤病人，若治療引起了免疫抑制，則這種病人的預(yù)后較差，緩解期的白血病病人，其免疫功能突然下降，是白血病復(fù)發(fā)的信號(hào)。(二)腫瘤病人治療效果的判定及預(yù)后免疫功能正常的病19六.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物在白血病免疫學(xué)

分型中的作用

B系細(xì)胞白血病的相關(guān)性標(biāo)記：CD10、CD19、CD20、CD22T系細(xì)胞白血病的相關(guān)性標(biāo)記：CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8六.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物在白血病免疫學(xué)

分型中的作用B系20

B-ALLT-ALLAMLCD22+--CD10+--CD19+--CD3-+-CD5-+-CD7-+-/+CD13--+CD33--+B-ALL21白血病免疫學(xué)分型的意義選擇治療方案及判斷預(yù)后有重要意義。T淋巴細(xì)胞型白血病對(duì)化療不敏感，常復(fù)發(fā)和預(yù)后差。慢性淋巴細(xì)胞白血病多為B淋巴細(xì)胞白血病。白血病免疫學(xué)分型的意義選擇治療方案及判斷預(yù)后有重要意22NK細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義1.檢測(cè)方法：活性測(cè)定和細(xì)胞計(jì)數(shù)2.意義：可作為機(jī)體抗腫瘤和抗病毒感染的指標(biāo)之一。NK細(xì)胞的檢測(cè)及臨床意義1.檢測(cè)方法：活性測(cè)定和細(xì)胞計(jì)數(shù)23NK細(xì)胞的識(shí)別功能與重大疾病的重新解釋

近期發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞的殺傷對(duì)象為MHC-I類(lèi)分子丟失/變異的細(xì)胞，正巧與CTL殺傷靶細(xì)胞需要正常MHC-I類(lèi)分子的存在相反---是NK細(xì)胞研究乃至整個(gè)細(xì)胞免疫學(xué)研究史的里程碑。目前證實(shí)了NK細(xì)胞的識(shí)別抑制現(xiàn)象（由KIR完成），并發(fā)現(xiàn)該KIR的作用受到NK細(xì)胞自身活化受體（KAR）的調(diào)節(jié)。NK細(xì)胞的識(shí)別功能與重大疾病的重新解釋

近期發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞的殺241.腫瘤免疫逃逸的新解腫瘤死亡的主要原因在于復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移。長(zhǎng)期以來(lái)就發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞多發(fā)生HLAI類(lèi)分子的變化而導(dǎo)致CTL細(xì)胞無(wú)法通過(guò)雙識(shí)別而啟動(dòng)殺傷程序。近來(lái)發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞通過(guò)“丟失自我”機(jī)制而啟動(dòng)殺傷腫瘤，但發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在失去或變構(gòu)HLA-A、B、C的同時(shí)可高表達(dá)非常規(guī)性I類(lèi)分子（如HLA-G、HLA-E），傳遞強(qiáng)烈的抑制信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)NK細(xì)胞殺傷的逃逸。1.腫瘤免疫逃逸的新解腫瘤死亡的主要原因252.NK細(xì)胞可引發(fā)自身免疫病

過(guò)去一般認(rèn)為多數(shù)自身免疫性疾病與自身反應(yīng)性T細(xì)胞的產(chǎn)生有關(guān)。隨著NK細(xì)胞識(shí)別機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，尤其是HLAI類(lèi)分子變化與NK細(xì)胞關(guān)系的闡明，少