復(fù)方地芬諾酯對保健食品潤腸通氣功能小鼠的影響

復(fù)方地芬諾酯對保健食品潤腸通氣功能小鼠的影響

在對便秘動物模型的檢驗中，應(yīng)考慮不同的食品特性。目前，具有潤腸排便功能的食品包括藥食源型中藥制劑、維生素類、活血酶制劑和雙因素。由于保健食品中藥制劑含量不能過高,藥效評價中使用的小鼠便秘模型不適合保健食品的功能檢測,我們針對保健食品潤腸通便功能檢測的小鼠便秘模型進(jìn)行了研究,提出了保健食品潤腸通便功能檢驗中建立小鼠便秘模型的一種方法。1材料和方法1.1動物生活復(fù)方地芬諾酯片,為止瀉藥,每片含復(fù)方地芬諾酯2.5mg,由江蘇國營武進(jìn)制藥廠制造(蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字82-2464-1號),人體使用劑量為一日3～4次,每次1～2片,即人體每日推薦使用劑量為0.125～0.333mg/KgBW。由于種屬關(guān)系,按人體每日最大推薦量0.333mg/kgBW計,小鼠每日等效作用量為3.3mg/kgBW。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所實驗動物中心提供的二級昆明種健康雄性小鼠(批準(zhǔn)號為京動字8910M050),體重20～23g。分析天平、動物天平、秒表、手術(shù)剪、眼科鑷、灌胃針及注射器、動物籠具、苦味酸。墨汁的配制:準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100g,加水800mL,煮沸至溶液透明,稱取活性碳(粉狀)50g加至上述溶液中煮沸3次,待溶液涼后加水定容到1000mL。復(fù)方地芬諾酯混懸液的配制:取復(fù)方地芬諾酯片,用研缽研碎后加水配制成所需濃度的復(fù)方地芬諾酯混懸液。1.2方法1.2.1單氟二苯基巴比妥酸的制備1.2.2小鼠主流式墨汁灌胃取小鼠40只,隨機分為4組,每組10只,分別為攝入復(fù)方地芬諾酯10、5和3.3mg/kgBW組和空白對照組,實驗組以相應(yīng)劑量的復(fù)方地芬諾酯灌胃,對照組給水,30min后,各組小鼠均以墨汁灌胃(首粒糞便指示劑),從給墨汁開始記錄小鼠首粒黑便的排出時間和不同時段內(nèi)的排便粒數(shù)。1.2.3兩組患者試驗前和試驗后24h停食改性取小鼠20只,隨機分為2組,每組10只,分別設(shè)為復(fù)方地芬諾酯10mg/kgBW組和空白對照組,試驗前24h停食給水。試驗組以復(fù)方地芬諾酯灌胃,對照組給水,30min后兩組小鼠分別以墨汁灌胃,從給墨汁開始記錄首粒黑便的排出時間、不同時間段的排便粒數(shù)。2.4重復(fù)實驗3結(jié)果與討論3.1復(fù)方地芬諾酯對小鼠糞便重量的影響從表1可以看出,(1)復(fù)方地芬諾酯的給藥量與藥效作用間存在明顯的劑量—反應(yīng)關(guān)系:隨著復(fù)方地芬諾酯用量的增加,小鼠首粒排便時間延長,12h內(nèi)排便粒數(shù)和排便重量減少,其相關(guān)系數(shù)分別為0.9609、-0.9998和-0.9758。(2)當(dāng)復(fù)方地芬諾酯用量為5mg/kgBW時,實驗組小鼠的首粒排便時間與對照組比較出現(xiàn)極顯著性差異(P<0.01),但12h內(nèi)排便粒數(shù)和排便重量無顯著性差異(P>0.05);當(dāng)復(fù)方地芬諾酯用量為10mg/kgBW時,實驗組與對照組小鼠的首粒排便時間比較差異極顯著(P<0.01),12h內(nèi)排便粒數(shù)也出現(xiàn)了顯著性差異(P<0.05),但12h內(nèi)排便重量仍無明顯差異(P>0.05),這說明5mg/kgBW和10mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯的有效藥理作用不能持續(xù)12h。(3)當(dāng)復(fù)方地芬諾酯用量為25mg/kgBW時,實驗組小鼠的首粒排便時間、12h排便粒數(shù)和排便重量與對照組比較均出現(xiàn)極顯著性差異(P<0.01),即25mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯的有效藥理作用能持續(xù)12h。(4)糞便重量與排便粒數(shù)比為不敏感指標(biāo),這主要是因為糞便經(jīng)常與水、尿和飼料混雜在一起,影響實驗結(jié)果。在實驗中發(fā)現(xiàn),當(dāng)復(fù)方地芬諾酯用量為50mg/kgBW時,個別小鼠12h無糞便排出,解剖發(fā)現(xiàn)其膀胱過度充盈,從結(jié)果可以看出,50mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯模型組與對照組首粒排便時間分別是344min和22min,這可能是復(fù)方地芬諾酯過度抑制平滑肌的結(jié)果。通過多次試驗發(fā)現(xiàn),此毒性作用發(fā)生率為10%～20%。由于禁食小鼠食用墊料,使胃腸道內(nèi)有殘留糞便,致使首粒排便時間難以代表便秘模型小鼠的腸蠕動情況,考慮選用適當(dāng)?shù)氖琢＜S便指示物———墨汁。3.2復(fù)配中聚糖酯用量對首粒排氣時間的影響由表2可見,(1)小鼠的首便時間、排便粒數(shù)和排便重量與復(fù)方地芬諾酯用量間存在明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系:當(dāng)復(fù)方地芬諾酯用量為3.3mg/kgBW時,首粒排便時間與對照組比較即出現(xiàn)極顯著性差異(P<0.01),隨著復(fù)方地芬諾酯用量的增加,首粒排便時間在不斷增加。(2)3.3mg/kgBW和5mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯的有效藥理作用時間均不足6h,超過藥效作用后的一段時間內(nèi),排便粒數(shù)將代償性增加以使造模組與對照組的排便粒數(shù)無顯著性差異復(fù)方地芬諾酯組的有效藥理作用時間在以上鑒于以上因素,為了讓保健食品較溫和的作用得以體現(xiàn),我們認(rèn)為25mg/kgBW和50mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯作為造模劑量不適于保健食品功能檢測,選擇10mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯作為造模劑量觀察6h較為適宜。3.31小鼠小鼠中復(fù)方地芬諾酯的量測由表3可見,(1)模型組小鼠首粒排便時間與對照組比較有極顯著性差異(P<0.01)。(2)由圖1可以看出,隨著觀察時間的延長,模型組與對照組小鼠每小時排便粒數(shù)不斷接近。在5～6h間模型組與對照組的排便粒數(shù)基本相等,而在6～7h間模型組小鼠的排便粒數(shù)略高于對照組,在7～12h間對照組與實驗組比較,排便粒數(shù)無顯著性差異。這說明當(dāng)小鼠攝入復(fù)方地芬諾酯6h后,藥物已基本不起作用,故此建議用10mg/kgBW復(fù)方地芬諾酯建立的小鼠便秘模型在檢測保健食品時應(yīng)觀察6h。(3)用墨汁作指示物使首粒排便時間可以明確界定,排除了小鼠腸道內(nèi)殘留糞便的干擾,這也使得對照組小鼠的首粒排便時間較不給墨汁對照組小鼠有明顯的延長。3.4重復(fù)實驗4每次1000公里合成劑實驗動物儀器復(fù)方地芬諾酯對小鼠的乳化后的復(fù)配試驗按保健食品潤腸通便功能檢測推薦方法進(jìn)行。小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,其中1組為對照組,4組為實驗組。實驗前24h停食給水。實驗組復(fù)方地芬諾酯給藥量分別為:50、25、10和5mg/kgBW(分別相當(dāng)于復(fù)方地芬諾酯人體最大推薦使用量的150倍、75倍、30倍、15倍),對照組小鼠用水灌胃。灌胃后動物均單籠飼養(yǎng),正常飲食進(jìn)水。觀察小鼠首粒排便時間、12h內(nèi)排便粒數(shù)和排便重量。根據(jù)1.2.1試驗結(jié)果,鑒于潤腸通便保健食品的作用比較溫和設(shè)計如下試驗：根據(jù)1.2.2的試驗結(jié)果,對攝入復(fù)方地芬諾酯10mg/kgBW組小鼠進(jìn)行了進(jìn)一步試驗。在上述試驗的基礎(chǔ)上對1.2.3試驗進(jìn)行了3次重復(fù)。實驗結(jié)果見表1。實驗結(jié)果見表2。實驗結(jié)果見表3。實驗結(jié)果見表4。通過以上實