川芎嗪在小鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究

川芎嗪在小鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究

四川苦艾酒林的化學(xué)名字叫四甲基吡啶。根據(jù)藥理學(xué)研究，它具有改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、防止血栓形成、改善腎衰竭和保護腎功能的作用。這是治療缺血性腦中風(fēng)的首選藥物之一。但川芎嗪在腦內(nèi)的分布并不高,為進一步提高川芎嗪對腦血管類疾病的治療,現(xiàn)選用新的劑型-微乳作為其載體。微乳通常是由乳化劑、助乳化劑、油相和水相組成的澄明或帶乳光的液體,是一種新型藥物載體,可作為速釋、緩釋及靶向給藥系統(tǒng),提高藥物的生物利用度。國內(nèi)外文獻未見川芎嗪微乳制劑的研究報道,本實驗制備川芎嗪微乳并以川芎嗪水溶液作為對照,采用高效液相色譜法測定小鼠血、腦、肝中川芎嗪的濃度,分別考察自制川芎嗪微乳在小鼠血、腦、肝中的藥動學(xué)行為,為進一步研究川芎嗪微乳打下基礎(chǔ)。1材料和方法1.1對照品的制備川芎嗪(南京蘇朗醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司,批號080220);鹽酸川芎嗪、阿司匹林內(nèi)標(biāo)物對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號分別為110817-200305、100113-200302);川芎嗪微乳、川芎嗪水溶液(自制);甲醇、乙腈均為色譜純。1.2設(shè)備和鉻條件1.2.1儀器、檢測方法KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);XW—80A微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠);AUY220電子天平(廣州湘儀機電設(shè)備有限公司);TGL—16B型臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠);微量移液器(上海求精生化試劑儀器有限公司);HPLC儀:SummitP680A泵,SummitPDA—100二級管陣列檢測器;Chromeleon色譜工作站(美國Dionex公司)。1.2.2流動相冰醋酸液HypersilODS—C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);甲醇-1.5%冰醋酸溶液(45∶55)為流動相;內(nèi)標(biāo)物為阿司匹林對照品;柱溫:室溫;體積流量:1mL/min;紫外檢測波長:279nm;進樣量:20μL。1.3動物NIH小鼠,雌雄不限,體質(zhì)量(20±2)g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供(動物許可證號:粵監(jiān)證字2007A013)。1.4生物樣品處理1.4.1內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量的提取取血漿于具塞塑料試管中離心,取上清0.2mL,定量加入0.4mL混有內(nèi)標(biāo)物(3μg/mL)的乙腈液提取,渦旋2min,15000r/min離心10min,移取上清液(內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃度為2μg/mL),即得。1.4.2腦勻漿和肝勻漿的制備取小鼠全腦(剝離軟腦膜)及一葉肝臟(每次均在同一位置),用吸水紙蘸凈殘余血跡,分別精密稱質(zhì)量后加5倍量生理鹽水,用玻璃勻漿器勻漿,得腦勻漿和肝勻漿。離心30min后取上清液0.2mL,加0.4mL混有內(nèi)標(biāo)物(3μg/mL)的乙腈,渦旋2min,15000r/min離心30min,取上清液(內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2μg/mL),即得。1.5單次給藥后小鼠腦和肝組織中nh的檢測取小鼠84只,隨機分為川芎嗪微乳組和川芎嗪水溶液組各42只,每組各隨機分為7個小組(每小組6只),每個小組分別對應(yīng)1個時間點。小鼠1次性尾iv給藥(川芎嗪給藥劑量為36mg/kg),分別于給藥后2.5、5、10、20、45、60、90min取血。取血時先用肝素潤濕小燒杯,摘除眼球取血。取血后立刻取出小鼠腦和肝組織樣品。并按照1.4中方法處理樣品,得到供試品溶液,并進行測定,將測得的峰面積以內(nèi)標(biāo)法計算血漿、腦、肝中川芎嗪的質(zhì)量濃度。1.6內(nèi)部分析的建立1.6.1對照品溶液的制備精密稱量12.5mg鹽酸川芎嗪對照品,置于100mL量瓶中,加乙腈溶解,稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液。取空白小鼠血漿、腦勻漿和肝勻漿上清液各2mL,加入鹽酸川芎嗪對照品溶液適量,按1.4項下方法處理,制成0.00625、0.0312、0.156、0.781、3.906、7.813μg/mL的溶液(內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃度為2μg/mL),進樣。以對照品與內(nèi)標(biāo)物峰面積比(Y)為縱坐標(biāo),對照品質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進行線性回歸,川芎嗪在血漿、腦和肝中的回歸方程見表1。結(jié)果表明,生物樣品中川芎嗪質(zhì)量濃度在0.00625～7.813μg/mL與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。1.6.2法律研究本課題組前期研究結(jié)果證明該測定方法穩(wěn)定可行。1.7最佳室模型及非室模型分析采用PKanalyst藥代動力學(xué)處理軟件處理,以AIC(Akaikecriteria)、SIC(Schwartzcriteria)最小準(zhǔn)則,結(jié)合擬合度、相關(guān)系數(shù)等指標(biāo)進行最佳房室模型的判別,同時進行非房室模型分析,并將微乳組與水溶液組在血、腦、肝中的各個藥動學(xué)參數(shù)進行對比。2各組auc的比較小鼠體內(nèi)藥動學(xué)實驗結(jié)果見圖1～3及表2。從尾iv2.5min后,開始取血檢測血漿中川芎嗪的質(zhì)量濃度。此時微乳組的血藥濃度為4.79μg/mL,水溶液組的血藥濃度為4.42μg/mL,最大血藥濃度無顯著差別。隨著給藥時間的延長,血藥濃度逐漸下降,特別是在前20min內(nèi)下降速度最快,但是每個時間點的血藥濃度微乳組均大于水溶液組。從統(tǒng)計距參數(shù)看,微乳組與水溶液組的AUC分別為115.70、72.74min·μg/mL,微乳組大于水溶液組,說明微乳提高了川芎嗪在血中的濃度。與血藥濃度測定結(jié)果不同,腦藥濃度高峰出現(xiàn)在5min,較血中慢,提示藥物從靜脈注射到透過血腦屏障到達(dá)腦部需要一定時間。其中水溶液組的腦藥濃度Cmax為4.14μg/mL,微乳組可達(dá)到7.81μg/mL,較水溶液組明顯增加,并且各個時間點微乳的腦藥濃度均大于水溶液組,從曲線下面積看,微乳組的AUC為259.51min·μg/mL,水溶液組的AUC為130.19min·μg/mL,微乳組較水溶液組顯著增加,說明微乳組可以顯著提高川芎嗪在腦部的分布,增加腦藥量。肝藥濃度微乳組經(jīng)時變化與腦藥濃度類似,藥物濃度峰出現(xiàn)在5min,水溶液組肝藥濃度在2.5min,水溶液達(dá)峰時間較微乳組快,說明微乳在肝中有一定的緩釋作用。比較肝藥峰濃度,微乳組為10.66μg/mL,水溶液只有6.33μg/mL,并且微乳組的AUC大于水溶液組,提示微乳亦改變了川芎嗪藥物在肝中的藥動學(xué),增加了肝中的分布。3川浚嗪微乳的腦靶向性研究黃志力等通過對川芎嗪靜注后大鼠組織中藥物濃度經(jīng)時變化的觀察,川芎嗪的肝臟攝取率最高,其他依次為心臟、脾、腦、睪丸、肺、腎、肌肉、血漿,其主要分布于血流豐富的大循環(huán)和組織,腦內(nèi)的分布不高。而本實驗川芎嗪微乳與水溶液的比較證明了:微乳可以改變川芎嗪在血、腦、肝的藥動學(xué)行為,分布均有所增加,并且腦藥分布提高明顯。微乳增加了川芎嗪在血漿、腦、肝內(nèi)濃集的傾向,血漿中藥物濃度增加說明周圍組織中藥物濃度會相對減少,此時腦藥濃度的顯著提高可能是由于微乳中的油相組分增強了藥物與腦組織的親和性,同時微乳屬于納米微粒載藥體系,可使微乳攜帶包裹于內(nèi)相(油相)的藥物迅速通過血腦屏障,提高藥物在腦內(nèi)的分布。由以上結(jié)果預(yù)測,川芎嗪微乳具有腦靶向性。川芎嗪常用于腦血管類疾病的治療,但腦內(nèi)的分布并不高,所以今后對川芎嗪微乳腦靶向性研究具有十分重要的意義。實驗過程中,由于小鼠的個體差異以及繁瑣的樣品前處理過程,實驗數(shù)據(jù)難免產(chǎn)生誤差。而與傳統(tǒng)的樣品采集和處理技術(shù)相比,微透析則較有優(yōu)勢:①微透析對取樣部位的傷害很小,幾乎不影響組織中的生理過程,得到的樣品更能反映物質(zhì)進入人體后的實際變化;②不改變組織