四逆湯對離體蛙心收縮功能的影響

四逆湯對離體蛙心收縮功能的影響

四逆湯是漢代著名的漢族張仲景教授治療少陰虛寒綜合征的主要方劑。方中君藥附子為補(bǔ)益命門真火第一要藥,能通行十二經(jīng)脈,迅達(dá)內(nèi)外以溫陽逐寒;臣藥干姜溫中散寒;附子干姜相配溫陽散寒力勝。使藥甘草益氣補(bǔ)中,三藥合用,對心、腎、脾陽氣虛衰、陰寒內(nèi)盛之癥效專力宏。本試驗(yàn)通過不同制法及不同劑量的四逆湯對離體蛙心收縮功能影響的觀察,旨在揭示其對心臟的作用規(guī)律,為臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。1材料表面1.1動(dòng)物選用體重在(80～110)g的中華大蟾蜍50只(由安徽科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。1.2生物處理系統(tǒng)計(jì)算機(jī)(聯(lián)想天開2800);R20型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生科技有限公司);SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科貿(mào)有限公司);BL-420E生物信號采集處理系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司);JH-2型張力換能器(中國北京航空醫(yī)學(xué)研究所);TDL80-2B型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)等。1.3材料和試劑附子(生、炒制)、干姜、甘草均購于安徽國泰醫(yī)藥公司,經(jīng)安徽科技學(xué)院中藥實(shí)驗(yàn)室周宗運(yùn)副教授鑒定為正品。任氏液:現(xiàn)配現(xiàn)用。1.4不同時(shí)間的預(yù)處理取附子(生、炒制)、干姜、甘草各150g、100g、120g,加水浸泡30min,煎煮3次,時(shí)間分別為60,40,20min,過濾、離心,合并濃縮定容至370mL,裝瓶密封,消毒備用。1.5乙醇濃縮定容液的制備取上述溶液(生、制附子四逆湯)100mL,加無水乙醇150mL,使含醇量達(dá)60%(體積比),靜置冷藏24h,抽濾,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器回收乙醇后濃縮定容至100mL,裝瓶密封,消毒備用。2方法2.1遠(yuǎn)離心臟的準(zhǔn)備改進(jìn)的斯氏蛙心插管法制備離體蛙心,并保持蛙心套管內(nèi)液面高度的恒定(約1.0mL)。2.2水煎生附子加藥后心肌收縮張力的測定先觀察離體蛙心在正常情況下的自主收縮5min,然后依次加入含生藥0.157,0.313,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00g·L-1的水煎生附子、制附子四逆湯,水煎醇沉生附子、水煎醇沉制附子四逆湯,觀察并記錄每次加藥及沖洗后心肌的收縮張力、舒張張力、振幅及收縮頻率的變化情況。其中收縮振幅為收縮張力和舒張張力之差;張力增值和振幅增值為用藥后收縮張力和振幅減去用藥前收縮張力和振幅。2.3統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,給藥前后收縮張力及振幅的變化,各劑量組間收縮張力及振幅增值比較均采用t檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1給藥前后溫度變化由表1可知,與用藥前比較:在0.157g·L-1濃度時(shí)收縮張力增加及收縮振幅增大(P<0.05);在0.313,0.625g·L-1濃度時(shí)給藥前后變化不明顯;在1.25g·L-1濃度時(shí)蛙心收縮張力減小(P<0.05),在2.50,5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)蛙心收縮張力明顯減小(P<0.01);在0.313,0.625、1.25、2.50,5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)收縮振幅明顯降低(P<0.01);張力及振幅增值比較:與0.157g·L-1濃度比較,各濃度組差異均為極顯著(P<0.01)。3.2給藥濃度對收縮張力及振幅的影響由表2可知,與給藥前比較:在0.157g·L-1濃度時(shí)離體蛙心收縮張力減小(P<0.01);隨著給藥濃度的增加收縮張力及振幅均降低(P<0.01);張力及振幅增值比較:與0.157g·L-1濃度比較,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00g·L-1時(shí)收縮張力明顯減小、振幅明顯降低(P<0.05)。3.3l-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0gl-1、10.0由表3可知,與給藥前比較:在小濃度0.157,0.313g·L-1時(shí)蛙心收縮張力增加及振幅增大(P<0.01);隨著濃度的增加,高濃度5.00,10.00g·L-1時(shí)蛙心收縮張力明顯減小、振幅明顯降低(P<0.01);張力及振幅增值比較:與0.157g·L-1濃度比較,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)收縮力降低(P<0.01),0.625,1.25,2.50濃度時(shí)振幅減小(P<0.05),5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)振幅減小(P<0.01)。3.4l-1濃度對收縮張力及振幅的影響由表4可知,與給藥前比較:在0.157,0.313g·L-1濃度時(shí)收縮張力及振幅變化不明顯;隨著濃度的增加收縮張力及振幅在0.625,1.25,2.50,5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)收縮張力明顯減小、振幅明顯降低(P<0.01);張力及振幅增值比較:與0.157g·L-1濃度比較,2.50,5.00,10.00g·L-1濃度時(shí)收縮力降低、振幅減小(P<0.01)。4化學(xué)成分的變化水煎生附子四逆湯及水煎醇沉生附子四逆湯在低濃度時(shí)離體蛙心收縮張力增加,振幅增大。隨著濃度的增加,在高濃度時(shí)對離體蛙心有明顯的抑制作用;分析其原因,可能與生附子毒性較大有關(guān)。有學(xué)者證明四逆湯中君藥附子所含的烏頭類生物堿既是其強(qiáng)心作用的主要有效成分亦是其毒性成分。水煎醇沉生附子四逆湯在低濃度時(shí)的興奮作用較強(qiáng),這可能與四逆湯中含有多種化學(xué)成分,如烏頭堿,鞣酸等,具有興奮(烏頭堿)和抑制(鞣酸等)心臟的雙重作用。在低濃度時(shí),烏頭堿對心臟的興奮作用占主導(dǎo)地位,故心肌的收縮力增加和振幅增大,但隨著藥物濃度的增加,鞣酸等抑制性物質(zhì)占相對主導(dǎo)地位,離體蛙心表現(xiàn)為抑制作用,而醇沉可除去鞣酸等部分抑制性物質(zhì)。水煎及水煎醇沉制附子四逆湯對離體蛙心的收縮張力及振幅在低濃度時(shí)作用不明顯,隨著濃度的增加,有明顯抑制作用。分析其原因,這可能是附子在炮制過程中由于高溫的作用烏頭堿等興奮蛙心的化學(xué)物質(zhì)受到破壞有關(guān)。各種不同的處理對離體蛙心的收縮頻率均無顯著影響。實(shí)驗(yàn)中保持蛙心套管內(nèi)液面高度的恒定十分重要,心臟負(fù)荷量的大小直接影響心肌的收縮性能。不同制法及不同劑量的四逆湯對離