真菌殺蟲劑對茶小綠葉蟬田間藥效試驗

真菌殺蟲劑對茶小綠葉蟬田間藥效試驗

1茶小綠覆蓋的生物化學農藥茶小綠葉蟬是茶園微葉蟬的總稱。其優(yōu)點是假性甲狀腺素和其他吸收性微葉菌，以及假性甲狀腺素和其他偶發(fā)性微葉。茶的綠色蟬通過刺穿茶樹的芽和葉的果汁而失去聯(lián)系，收縮，成群結隊地生長，形成“焦頭和焦邊”。在嚴重的情況下，整個葉子都枯萎了，甚至剝落了。一般來說，影響茶葉的占大多數(shù)是茶葉病蟲害的第10%30%，是茶葉病蟲害的第一位。每年的防治費用約占茶葉病蟲害總監(jiān)督管理費用的40%60%。目前，中國關于茶蟬防治的研究報告很多，主要集中在化學農藥的篩選上。國外也偶爾有關于影響葡萄、甘薯和三葉草、蟬和其他微葉菌的報告，但沒有低于化學寄生蟲的有效防治方法。隨著白綠細菌、假單胞菌和假單胞菌等絲蟲群落寄生蟲的發(fā)現(xiàn)、實驗和應用，中國也從因農村疾病而死的茶綠蟬中分離出上述寄生蟲，表明可以通過真菌昆蟲來控制茶綠蟬的有害程度。在本研究中，將球孢菌絲和假單胞菌絲和假單胞菌絲的懸管海南島在浙江省遂昌茶園進行了第一次實地試驗。通過本地比較，評估了兩種藥物對控制茶綠蟬的潛力。2材料和方法2.1擬青霉菌株pfr116球孢白僵菌SG8702菌株是從麥二叉蚜(Schizaphisgraminum)上分離所得.玫煙色擬青霉菌株Pfr116由美國農業(yè)部害蟲生物防治研究所的T.J.Poprawski博士提供,該菌株原分離自甘薯粉虱(Bemisiaargentifolii).兩菌株在薩氏培養(yǎng)基(SDAY)平板上保存于-76℃冰箱中,并已被證明對蚜蟲具有強致病力.2.2制備成專成添加劑的制備方法將保存的菌種在SDAY平板上活化,恒溫(25℃)光照(12L∶12D)培養(yǎng)至產孢時,取孢子粉至薩氏培養(yǎng)液(不含瓊脂的SDAY)中振蕩培養(yǎng)24h,轉接后繼續(xù)培養(yǎng)48h.然后,將含大量菌絲的菌液接入經浸泡和蒸汽滅菌至適當熟度的大米上,接種量為10%,菌液與大米充分混合后攤于托盤中,在25℃下培養(yǎng)7d(球孢白僵菌)或10d(玫煙色擬青霉),在35℃下風干1d再過機械振動的120目篩而收集孢子粉,其含孢量大于1011g-1.將定量孢子粉加入配方優(yōu)化的可乳化溶劑油中而配制成孢子懸乳劑,含孢量為1010ml-1,此即為純孢子懸乳劑,簡稱純孢劑.在此基礎上,用10%吡蟲啉可濕性粉劑(江蘇常州農藥廠生產,一般每畝次用30g左右)作為增效劑,按3%(W/V)的比例加入純孢子懸乳劑中(即3g·100ml-1),由此獲得混配的孢子懸乳劑,簡稱混配劑.選吡蟲啉作為增效劑,一是因為它是目前被允許在茶園使用的化學殺蟲劑,二是因為它與殺蟲真菌之間極好的生物相容性.2.3礦物油載體oe-生物處理試驗于2002年6月17日至7月15日期間,在麗水市遂昌縣源口選擇代表性茶園(茶小綠葉蟬危害嚴重且分布相對均勻)進行田間藥效試驗,管理條件一致.該茶園為典型山丘茶園,茶垅(寬約1～1.5m)呈梯級分布,坡度約60°,坡底至坡頂高約40m.試驗包括6個處理,即4個菌劑處理、清水對照(CK)及含3%吡蟲啉10%可濕劑的礦物油載體對照(OI);4個菌劑處理分別為球孢白僵菌的純孢劑(OB)和混配劑(OBI),玫煙色擬青霉的純孢劑(OP)和混配劑(OPI).每處理小區(qū)重復3次,每小區(qū)面積約60m2(約60m長的獨壟),小區(qū)之間設1壟空白(不作任何處理)作為保護區(qū).各菌劑用水稀釋500倍噴霧,使噴液的實際孢子濃度為2×107個孢子·ml-1,每小區(qū)噴菌液約5kg,非菌劑處理的噴液量(CK及OI)相同.所有處理按隨機區(qū)組排列,共噴霧2次,第二次噴霧在第一次噴霧后的第12d進行.兩次用菌時間均為晴天傍晚.2.4調查方法及過程茶小綠葉蟬喜陰涼且活動性強,善跳躍,給田間抽樣調查帶來難度.試驗期間,抽樣調查一般在晨露未干前(早上8∶30時以前)該蟲不太活動時進行,陰天則可全天進行.因每小區(qū)實為一壟,故采用對茶樹編號的方法,調查時隨機選取一編號的茶樹作為起始抽樣株,然后每隔2株抽取1株,每小區(qū)共查10株,每株抽查10片嫩葉(取芽下第二片嫩葉),輕輕地翻看(受觸動的芽葉不用于觀察),就地計數(shù)并記載若蟲數(shù)和成蟲數(shù),最后按處理統(tǒng)計每10葉蟲數(shù).首次用菌前調查蟲口基數(shù),然后每隔3或4d調查一次,在第二次用菌2周后作最后一次調查.田間試驗期間的當?shù)貧庀髷?shù)據(jù)從當?shù)貧庀笳精@得.2.5相對防效計算對各處理的茶小綠葉蟬密度(蟲量/10葉),用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件進行方差分析.各處理的相對防效(E)按以下公式計算:E=(1?PCK0×PT1PCK1×PT0)×100E=(1-ΡCΚ0×ΡΤ1ΡCΚ1×ΡΤ0)×100式中,PT0和PT1分別表示處理小區(qū)在處理前后調查的平均10葉蟲量,PCK0和PCK1分別表示清水對照小區(qū)噴霧前后調查的平均10葉蟲量.3結果與分析3.1試驗期間地面天氣變化環(huán)境條件是影響真菌殺蟲劑的重要因素.本研究的田間試驗正值當?shù)馗邷丶竟?jié),從噴菌至觀察結束的25d中,溫度變化范圍為21.2～38.1℃,最低日均溫22.7℃,最高日均溫31.2℃,平均日均溫26.6℃.從降雨情況看,共有14個降雨日,其中4個降雨日的雨量小于1mm,1～5mm的小雨日4d,5～25mm的中雨日3d,25～50mm的大雨日4d,總降雨量達241.2mm.總之,6月中旬至7月中旬正是試驗所在地浙江遂昌的盛夏,溫度偏高,雨水偏多,因而試驗期間天氣變化較大.3.2蟲口密度檢測表1給出田間試驗期間各處理及清水對照中茶小綠葉蟬蟲口密度的調查結果.經兩因子(處理及處理后天數(shù))方差分析,總的蟲口密度在各處理間差異極顯著(df=5,F=7.70,P<0.01),在處理后不同天數(shù)間也差異極顯著(df=7,F=13.08,P<0.01),而重復間差異不顯著(df=2,F=2.16,P=0.12).按抽樣日對各處理下蟲口密度作進一步分析(表1),起始日各處理間的蟲口密度(2.5～4.3頭/10葉)差異不顯著,首次噴菌后第4d各處理的蟲口密度顯著低于清水對照,但此后兩次調查中這種差異不顯著;第二次用菌(首次用菌后的第12d)后連續(xù)3次調查,各處理間均表現(xiàn)顯著差異.從差異的程度看,以兩種真菌的混配劑對蟲口密度的抑制影響最大,而純孢劑的影響在多數(shù)抽樣日未達顯著水平.在首次噴菌后的田間調查中發(fā)現(xiàn),茶樹上低齡若蟲大量增加,說明用菌時田間已存在大量的茶小綠蟬卵,從這些卵孵化出來的若蟲未能被施用的菌劑感染.對試驗觀察期間茶小綠葉蟬若蟲占整個種群的比例(圖1)進行分析表明,不同處理間差異不顯著(df=5,F=0.40,P=0.85),但在不同抽樣日間卻差異極顯著(df=7,F=21.87,P<0.01).事實上,如圖1所示,若蟲比例在試驗的前半個月呈直線上升趨勢,由起始日的78%上升到第15d的99%.可見,這期間一直有新孵化的若蟲加入種群,以致首次用菌的作用被掩蓋.第二次用菌后,雖然若蟲比一直較高,但種群結構相對較穩(wěn)定(新孵若蟲較少),菌劑處理對茶小綠葉蟬種群的抑制作用得以顯現(xiàn)出來(表1).3.3礦物油載體防效測定與清水對照相比,各處理對茶小綠葉蟬的田間相對防效見圖2所示.兩種真菌的孢子懸乳劑500倍稀釋液噴霧都對茶小綠葉蟬產生一定的控制效果,但以混配劑的效果明顯好于純菌劑,其中球孢白僵菌混配劑的最高防效達83.4%,而玫煙色擬青霉的最高防效為71.3%.純菌劑的效果也以球孢白僵菌優(yōu)于玫煙色擬青霉.單用含3%吡蟲啉10%可濕性粉劑的礦物油載體的500倍稀釋液噴霧也獲得相當?shù)姆佬?且防效總是在施用后第一次調查最高,而后大幅下降.將圖2中用菌后歷次調查的防效給予平均和排序,結果是球孢白僵菌混配劑防效最高,達66.8±14.0%;其次是玫煙色擬青霉混配劑防效62.1±12.2%;再其次是含微量吡蟲啉的礦物油50.3±14.3%和球孢白僵菌純菌劑49.5±7.3%;最差是玫煙色擬青霉純菌劑,僅有防效19.0±23.2%.從圖2中每次噴霧后防效的變化可以看到菌劑的實質性作用.首次用菌后,因田間存在大量的蟲卵不斷孵化(圖1),使各菌劑處理的田間防效被稀釋(僅40%左右),尤其玫煙色擬青霉純菌劑甚至在第12d表現(xiàn)為負防效.于是,在第12d調查結束后進行了第二次用菌,由于此時田間蟲卵較少,結果各菌劑的防效明顯提高,尤其是兩種混配菌劑表現(xiàn)了較高(65%以上)且相對穩(wěn)定的控蟲效果.4真菌制劑與真菌化學制劑的協(xié)同作用綜合本次田間試驗結果,不論是純孢劑還是孢子混配劑,球孢白僵菌對茶小綠葉蟬的控制效果均優(yōu)于玫煙色擬青霉.尤其球孢白僵菌與微量吡蟲啉(僅相當于常規(guī)推薦用量的1/10)的混配劑,25d期間噴500倍稀釋液2次,最高防效可達83.4%,平均防效達66.8%,顯然在茶小綠葉蟬的綜合治理和無公害茶葉的生產中具有相當?shù)膽脻摿?同樣的菌劑對蔬菜蚜蟲的田間防效則達到90%以上且較為穩(wěn)定,對溫室粉虱的防效也很理想.本次田間試驗是在環(huán)境條件相當嚴酷的盛夏進行,25d中有19d日最高溫在30℃以上,其中首次用菌后連續(xù)6d日最高溫過30℃,第二次用菌也連續(xù)5d日最高溫過30℃.盛夏高溫季節(jié)一般并不適合真菌殺蟲劑發(fā)揮作用,本試驗是在較為極端的條件下對本實驗室所研制菌劑的一次檢驗.真菌殺蟲劑主要通過侵染體(如孢子)感染致病而控制害蟲,由于致病潛伏期的存在其作用總是較為緩慢.為了彌補這一缺陷,國外近年很注重篩選與殺蟲真菌孢子生物學相容的高效低毒低殘留化學殺蟲劑作為其增效劑,在亞致死劑量或次亞致死劑量下與真菌孢子協(xié)同作用于靶標害蟲,以達到既增強殺蟲真菌制劑作用又大幅減少化學殺蟲劑用量的目的.吡蟲啉是目前常用的高效低毒低殘留化學殺蟲劑之一,我們采用常規(guī)推薦用量的5%～15%與真菌制劑混配(本次試驗中為10%),用于防治蚜蟲、粉虱、茶小綠葉蟬等刺吸式口器害蟲.在已進行的田間防效試驗中,純菌劑或混配劑對茶小綠葉蟬的效果最差,但球孢白僵菌混配劑的防效也基本上達到了實用的水平(圖2).然而,真菌制劑與微量化學殺蟲劑協(xié)同作用的機理目前研究報道甚少,其可能的原理是添加微量化學殺蟲劑雖不足以直接殺蟲,但卻足以弱化害蟲的生理或降低其抵抗力,由此增加了被真菌感染致死的機會.這