家兔肝性腦病實(shí)驗(yàn)報(bào)告

家兔肝性腦病實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)背景本次實(shí)驗(yàn)涉及2個(gè)實(shí)驗(yàn)：家兔急性呼吸衰竭實(shí)驗(yàn)和肝性腦病實(shí)驗(yàn)，通過制作兔的閉合性氣胸及開放性氣胸，復(fù)制呼吸衰竭模型。做氣管內(nèi)插管并連接呼吸傳感設(shè)立，統(tǒng)計(jì)家兔呼吸運(yùn)動(dòng)的變化，以及統(tǒng)計(jì)注射不同劑量的氯化銨對(duì)家兔的影響，結(jié)合組織制片和顯微攝影等技術(shù)，從器官層次到細(xì)胞層次理解肺，肝急性衰竭前后構(gòu)造組織變化的狀況。二、目的和原理1：呼吸衰竭是指由于外呼吸功效的嚴(yán)重障礙，以致動(dòng)脈血氧分壓低于正常范疇，伴有或不伴有二氧化碳分壓增高的病理過程。肺通氣障礙或（和）肺換氣功效障礙都可引發(fā)呼吸衰竭。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制呼吸衰竭病理模型，觀察呼吸和血?dú)獾淖兓⒎治銎錂C(jī)制，學(xué)習(xí)動(dòng)脈采血的辦法，理解血?dú)鉁y(cè)定辦法。2：正常狀況下，血氨的來源與去除保持動(dòng)態(tài)平衡，而氨在肝臟中合成尿素是維持此平衡的核心。通過結(jié)扎大部分肝臟造成急性肝功效不全，然后經(jīng)消化道輸入堿性氯化銨溶液，造成腸道中氨生成增多并吸取入血，引發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血氨快速升高，出現(xiàn)震顫、抽搐、昏迷等類似肝性腦病癥狀，證明氨在肝性腦病發(fā)病機(jī)制中起重要作用。本次實(shí)驗(yàn)的目的是學(xué)習(xí)復(fù)制急性肝功效不全造成急性肝功效不全模型的辦法，理解氨在肝性腦病發(fā)病機(jī)制中的作用，通過制作組織切片理解肝組織損傷的形態(tài)學(xué)變化。三：實(shí)驗(yàn)對(duì)象家兔三只四：手術(shù)器材和藥品兔手術(shù)臺(tái)、實(shí)驗(yàn)手術(shù)器械一套、氣管插管（兩側(cè)管套有橡皮管）、連接靜脈插管的輸液裝置、連接三通的動(dòng)脈插管、注射器（1ml、2ml、10ml、50ml）、軟木塞、濾紙、血?dú)馑釅A分析儀。離心機(jī)、分光光度計(jì)、水浴鍋、電爐、注射器（5ml）、輸液瓶、膠管、螺旋夾、滴管、吸管、離心管、試管、試管夾、試管架、酒精燈、手術(shù)器械一套、輸尿管塑料插管、顯微鏡、玻片。20％烏拉坦、1％肝素生理鹽水溶液、生理鹽水、0.1％腎上腺素，2.5%氯化銨，1%普魯卡。五：實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)肺衰竭實(shí)驗(yàn)測(cè)定辦法：1．取家兔一只，稱重，從耳緣靜脈注射20％烏拉坦溶液5ml/kg。將家兔仰臥固定于兔臺(tái)上。2．沿頸部正中切開皮膚，分離氣管，插入氣管插管。分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，插入充滿肝素生理鹽水的動(dòng)脈插管。分離右側(cè)頸外靜脈，插入靜脈插管，連接輸液裝置，并緩慢輸入生理鹽水（4～5滴/min）。3．用注射器抽出動(dòng)脈插管內(nèi)的死腔液，然后用充有肝素生理鹽水溶液的注射器與動(dòng)脈插管相連，讓血液自動(dòng)流入注射器內(nèi)（切勿進(jìn)入氣泡），取血2ml，快速套上帶軟木塞的針頭，作血?dú)夥治?，同時(shí)觀察家兔的呼吸頻率及深度。4．打開胸腔，觀察家兔的呼吸頻率和深度。5：用止血鉗夾住氣管，處死動(dòng)物，打開胸腔，在氣管分叉處結(jié)扎氣管以避免水腫液流出，取出一部分肺組織。注意事項(xiàng)：1、穿刺胸腔時(shí)，針頭應(yīng)與胸壁垂直，順肋骨上緣插入以免損傷肋間動(dòng)脈，注意不要插得太深或太淺（0.5cm左右）進(jìn)針時(shí)不可用力夠猛以免穿破胸膜臟層。肝衰竭實(shí)驗(yàn)測(cè)定辦法：1：取兔一只，稱重后仰臥固定于兔臺(tái)上，剪去腹部正中兔毛，在上腹部正中用1%普魯卡因作浸潤(rùn)性局麻。2：從胸骨劍突起作上腹部正中切口（長(zhǎng)約5-6cm），打開腹腔后，即可見到肝臟。用手輕輕向下壓肝臟，切斷肝與橫膈之間的鐮狀韌帶。3：將肝臟各葉向上翻，除與胃連接緊密的肝尾葉外，用粗棉線自根部將其它各部結(jié)扎。4：順著胃幽門部找出十二指腸，在其表面作一荷包縫合。用眼科剪剪一小口，插入一導(dǎo)尿管，結(jié)扎固定，然后關(guān)閉腹腔，然后關(guān)閉腹腔，松綁，放于實(shí)驗(yàn)桌上進(jìn)行觀察和實(shí)驗(yàn)。5：觀察家兔的普通狀況，角膜反射及對(duì)刺激的反映。6：每隔5min向十二指腸內(nèi)注入2.5%氯化銨混合液5ml。認(rèn)真觀察動(dòng)物的普通狀況、角膜反射及對(duì)刺激反映的變化。注意有無反映性增高，直至出現(xiàn)痙攣發(fā)作為止。統(tǒng)計(jì)從給藥開始到痙攣抽搐發(fā)作時(shí)間以及用藥總量。7：切下一小塊肝尾葉組織和一小塊之前結(jié)扎的正常肝臟組織，制成組織切片并進(jìn)行觀察。注意事項(xiàng)：勿將藥液漏入腹腔。用生理鹽水紗布覆蓋傷口，避免體熱及水分丟失。手術(shù)操作要輕，因肝臟軟易破。切斷鐮狀韌帶時(shí)要小心勿損傷其后方的下腔靜脈。動(dòng)物行局麻時(shí)，有時(shí)會(huì)掙扎，要與氨引發(fā)的強(qiáng)直性痙攣相區(qū)別。六：實(shí)驗(yàn)成果肺呼吸衰竭呼吸曲線描記1.正常呼吸2.閉合性氣胸呼吸幅度減少3.閉合性氣胸急救后4.開放性氣胸呼吸曲線很快便靠近一條直線病理切片氣胸模型肺組織的組織切片10*10倍肺整體支氣管腔內(nèi)空氣充滿40*10倍支氣管腔支氣管腔增大40*10倍可見肺臟萎縮肝急性衰竭（一）、每隔5min注入5ml的氯化銨混合液，并觀察兔子的普通狀況，角膜反射，刺激反映等，統(tǒng)計(jì)成果以下：次數(shù)時(shí)間普通狀況角膜反射刺激反映10min正常存在（+++）敏捷（+++）25min正常存在（+++）敏捷（+++）310min正常存在（+++）敏捷（+++）415min正常存在（++）敏捷（++）520min從21min開始抽搐，22min出現(xiàn)角弓反張、病理切片肝尾葉10倍肝小葉中央靜脈可見部分肝細(xì)胞呈空泡樣門管區(qū)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)40倍肝尾葉肝細(xì)胞部分肝細(xì)胞受損，肝細(xì)胞腫脹呈球形有些可見炎癥細(xì)胞肝竇內(nèi)淤血門管區(qū)2、正常的肝組織切片七：實(shí)驗(yàn)討論肺呼吸衰竭本實(shí)驗(yàn)以兔子為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別制作兔子閉合性氣胸、開放性氣胸造成急性呼吸衰竭以觀察兔子的呼吸曲線變化。從呼吸曲線能夠看出，對(duì)兔子進(jìn)行閉合性氣胸后，呼吸幅度減少，頻率減慢，直至靠近直線，抽氣急救成功后，呼吸曲線逐步恢復(fù)到靠近原來狀態(tài)；對(duì)兔子進(jìn)行開放性氣胸，可觀察到呼吸曲線很快便靠近一條直線，呼吸衰竭模型制作成功。肝急性衰竭肝性腦?。╤epaticencephalopathy，he）是由嚴(yán)重肝病引發(fā)的，以代謝紊亂為基礎(chǔ)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功效失調(diào)的綜合征。臨床體現(xiàn)為意識(shí)障礙、行為失常和昏迷。能夠從開始的情緒或行為變化、衣著不整和大腦反映遲鈍，發(fā)展至昏迷及深度昏迷。病因大部分肝性腦病是由各型肝硬化（病毒性肝炎肝硬化最多見）和門體分流手術(shù)引發(fā)，涉及如經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體分流術(shù)（tips），如果連輕微肝性腦病也計(jì)算在內(nèi)，則肝硬化發(fā)生肝性腦病者可達(dá)70%.小部分肝性腦病見于重癥病毒性肝炎、中毒性肝炎和藥品性肝病的急性或暴發(fā)性肝功效衰竭階段。其它見于原發(fā)性肝癌、妊娠期急性脂肪肝、嚴(yán)重膽道感染等。引發(fā)肝性腦病的誘因可歸納為三方面：①增加氨等含氮物質(zhì)及其它毒物的來源，如進(jìn)過量的蛋白質(zhì)、消化道大出血、氮質(zhì)血癥、口服銨鹽、尿素、蛋氨酸等。便秘也是不利的因素，使有毒物質(zhì)排出減慢。②低鉀堿中毒時(shí)，nh4+容易變成nh3，造成氨中毒，常由于大量利尿或放腹水引發(fā)。③加重對(duì)肝細(xì)胞的損害，使肝功效進(jìn)一步減退。例如手術(shù)、麻醉、鎮(zhèn)靜劑、某些抗癆藥品、感染和缺氧等。在慢性肝病時(shí)，大概半數(shù)病例可發(fā)現(xiàn)肝性腦病的誘因。發(fā)病機(jī)制肝性腦病的發(fā)病機(jī)制未完全明確。普通認(rèn)為產(chǎn)生肝性腦病的病理生理基礎(chǔ)是肝細(xì)胞功效衰竭和門腔靜脈之間有手術(shù)造成的或自然形成的側(cè)支分流。重要是來自腸道的許多毒性代謝產(chǎn)物，未被肝解毒和去除，經(jīng)側(cè)支進(jìn)入體循環(huán)，透過血腦屏障而至腦部，引發(fā)大腦功效紊亂。血吸蟲病性肝纖維化雖有側(cè)支循環(huán)，但由于肝功效較好，極少發(fā)生肝性腦病。有關(guān)肝性腦病發(fā)病機(jī)制有許多學(xué)說，其中以氨中毒理論的研究最多，最確實(shí)有據(jù)。暴發(fā)性肝功效衰竭所致的肝性腦病與門一體性肝性腦病的發(fā)病機(jī)制不盡相似。氨中毒學(xué)說氨代謝紊亂引發(fā)的氨中毒是肝性腦病，特別是門體分流性腦病的重要發(fā)病機(jī)制。與氨中毒有關(guān)的腦病又稱為氮性腦?。╪itrogenousencephalopathy）。（一）氨的形成和代謝血氨重要來自腸道、腎和骨髓肌生成的氨，但胃腸道是氨進(jìn)入身體的重要門戶。正常人胃腸道每日可產(chǎn)氨4g，大部分是由尿素經(jīng)腸道細(xì)菌的尿素酶分解產(chǎn)生，小部分是食物中的蛋白質(zhì)被腸道細(xì)菌的氨基酸氧化酶分解產(chǎn)生。氨在腸道的吸取重要以非離子型氨（nh3）彌散進(jìn)入腸膜，其吸取率比離子型銨（nh4）高得多。游離的nh3有毒性，且能透過血腦屏障；nh4呈鹽類形式存在，相對(duì)無毒，不能透過血腦屏障。nh3與nh4的互相轉(zhuǎn)化受ph梯度變化的影響。當(dāng)結(jié)腸內(nèi)ph>6時(shí)，nh3大量彌散入血；ph<6時(shí)，則nh3從血液轉(zhuǎn)至腸腔，隨糞排泄。腎產(chǎn)氨是通過谷氨酰胺酶分解谷氨酰胺為氨，亦受腎小管液ph的影響。另外，骨髓肌和心肌在運(yùn)動(dòng)時(shí)也能產(chǎn)氨。機(jī)體去除血氨的重要途徑為：①尿素合成，絕大部分來自腸道的氨在肝中經(jīng)鳥氨酸代謝環(huán)轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩?；②腦、肝、腎等組織在三磷酸腺昔（atp）的供能條件下，運(yùn)用和消耗氨以合成谷氨酸和谷氨酰胺；③腎是排泄氨的重要場(chǎng)合，除排出大量尿素外，在排酸的同時(shí)，也以nh4的形式排除大量的氨；④血氨過高時(shí)可從肺部少量呼出。（二）肝性腦病時(shí)血氨增高的因素血氨增高重要是由于生成過多和（或）代謝去除過少。在肝功效衰竭時(shí)，肝將氨合成為尿素的能力減退，門體分流存在時(shí)，腸道的氨未經(jīng)肝解毒而直接進(jìn)入體循環(huán)，使血氨增高。許多誘發(fā)肝性腦病的因素能影響血氨進(jìn)入腦組織的量，和（或）變化腦組織對(duì)氨的敏感性。診療肝性腦病的臨床體現(xiàn)重要診療根據(jù)為：①嚴(yán)重肝病（或）廣泛門體側(cè)支循環(huán)；②精神紊亂、昏睡或昏迷；③肝性腦病的誘因；④明顯肝功效損害或血氨增高。撲翼（擊）樣震顫和典型的腦電圖變化有重要參考價(jià)值。對(duì)肝硬化患者進(jìn)行數(shù)字連接實(shí)驗(yàn)和心理智能測(cè)驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)輕微肝性腦病。鑒別診療肝性腦病應(yīng)與精神病及可引發(fā)昏迷的其它疾病，如腦血管意外、糖尿病、低血糖、尿毒癥、腦部感染和鎮(zhèn)靜藥過量等相鑒別。進(jìn)一步追問肝病病史，檢查肝脾大小、肝功效、血