西紅花苷和西紅花苷-1在小鼠體內(nèi)抗氧化活性的對(duì)比研究

西紅花苷和西紅花苷-1在小鼠體內(nèi)抗氧化活性的對(duì)比研究

西紅酸和西紅酸是一種特殊的水生胡葵。這是梔子和西紅鴨葉酸的主要成分和藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。西紅花酸(crocetin)為一系列西紅花苷的苷元,西紅花苷-1(crocin-1)為兩個(gè)藥材中含量最高的西紅花苷,占西紅花總苷約70%(Fig1)。文獻(xiàn)報(bào)道西紅花苷及其苷元西紅花酸具有廣泛的藥理活性,如保護(hù)心血管作用,抑制腫瘤細(xì)胞,神經(jīng)保護(hù)作用和肝細(xì)胞保護(hù)作用。近年來的研究證明老化和其他多種疾病的發(fā)生過程都與活性氧有關(guān),而類胡蘿卜素的藥理作用機(jī)制中,抗氧化活性被認(rèn)為具有重要意義。日本學(xué)者Asai等的研究表明,西紅花苷在小鼠腸道內(nèi)被水解成西紅花酸,然后吸收入血,在體內(nèi)又被轉(zhuǎn)化成西紅花酸的葡萄糖醛酸代謝物,并推測(cè)這種體內(nèi)代謝物可能是西紅花酸和西紅花苷在體內(nèi)發(fā)揮療效的活性分子形式。而且使用相同量的西紅花酸和西紅花苷后,觀察到體內(nèi)血藥濃度曲線明顯不同。因此,西紅花苷在體內(nèi)代謝過程是否會(huì)影響其體內(nèi)藥理活性的發(fā)揮,西紅花苷的藥理活性是否不同于西紅花酸,這是一個(gè)值得探討的課題。鑒于本類化合物發(fā)揮藥理療效的重要基礎(chǔ)是其抗氧化活性,本研究采用測(cè)定普通小鼠體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)指標(biāo)的方法,來對(duì)比評(píng)價(jià)西紅花酸和西紅花苷-1體內(nèi)抗氧化活性。1材料和方法1.1抗氧化酶taoc、谷胱甘肽研究試劑西紅花苷1和西紅花酸的分離見課題組前期發(fā)表文獻(xiàn)。超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和總蛋白測(cè)定試劑盒購于南京建成生物工程有限公司。維生素E(Sigma,USA)作為體內(nèi)抗氧化活性測(cè)定的陽性對(duì)照藥。1.2gsh-px和mda含量的測(cè)定SOD的測(cè)定方法參考文獻(xiàn),TAOC的測(cè)定方法參考文獻(xiàn),GSH-Px的測(cè)定方法參見文獻(xiàn),MDA含量測(cè)定參見thiobarbituricacid方法?？偟鞍缀康臏y(cè)定方法參見Bradford等方法。1.3動(dòng)物分組、給藥與測(cè)定昆明種小鼠(5mon,35～40g)購于四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中飼養(yǎng)于溫度恒定在23℃的動(dòng)物房?jī)?nèi),并能自由取食和飲水。所有小鼠隨機(jī)分為6組,每組6只,灌胃給藥。第1組為空白對(duì)照組,每次只給溶劑sodiumCMC(0.3%),第2組為陽性對(duì)照維生素E組(15mg·kg-1·d-1),第3、5、7組為西紅花酸(6.25、12.5、25mg·kg-1·d-1)組;第4、6、8組為西紅花苷(18.7、37.5、75mg·kg-1·d-1)組。連續(xù)給藥6wk。最后1次給藥24h后處死動(dòng)物,收集血漿和5個(gè)器官(心、肝、脾、腎和大腦)用于生化測(cè)定。以上5個(gè)器官的生理鹽水勻漿液(0.1g·ml-1)在低溫離心機(jī)中離心10min(4℃,4000×g),上清液分別用于各項(xiàng)生化測(cè)定,而血漿的SOD和MDA含量測(cè)定也采用相同的方法。1.4統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示。采用ANOVA統(tǒng)計(jì)分析法分析,顯著性檢驗(yàn)采用Students-NewmanKeul檢驗(yàn)法。2結(jié)果2.1各組小鼠臟器相關(guān)活性的比較2顯示西紅花酸和西紅花苷-1都能明顯改變肝臟和腎臟SOD水平。肝臟SOD測(cè)定結(jié)果顯示,后4組都顯示SOD活性上升,5、6兩組的P<0.01,而7、8兩組為P<0.05。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,在中劑量和高劑量組中,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性;腎臟的測(cè)定結(jié)果表明,兩個(gè)成分的活性都隨著劑量的增加而逐漸增強(qiáng),后4組SOD活性明顯強(qiáng)于空白組和維生素E組(P<0.01),而兩個(gè)藥物的低劑量組活性P<0.05。3個(gè)相同劑量的紅花酸與西紅花苷活性差異均沒有顯著性。2.2gsh-px活性西紅花酸和西紅花苷-1只明顯改變肝臟的GSH-Px活性(Fig3),并且只有5、6、7和8組的GSH-Px活性高于空白對(duì)照組和維生素E組(P<0.05)。在兩個(gè)劑量水平上,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性。2.3組差異顯著性比較西紅花酸和西紅花苷改變心臟和腎臟的TAOC值(Fig4),最后4組差異有顯著性(P<0.05)。同樣,在兩個(gè)劑量水平上,西紅花酸與西紅花苷活性差異沒有顯著性。此外,維生素E在這個(gè)模型中顯示出活性(P<0.05),而給藥組與陽性對(duì)照組的活性差異無顯著性。2.4降低mda活性只有第7組和第8組表現(xiàn)出降低血漿MDA含量的抗氧化活性,而第8組降低MDA活性更明顯(P<0.01),強(qiáng)于第7組(P<0.05)。見Fig5。3相同劑量的西牡丹花酸和西牡丹花苷-1對(duì)不同抗氧化活性的影響相對(duì)課題組前期體外抗氧化研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,西紅花酸和西紅花苷-1在體內(nèi)顯示出相對(duì)體外更強(qiáng)的抗氧化活性(與維生素E比較)。在所有抗氧化指標(biāo)中,除了MDA測(cè)定結(jié)果外,相同劑量的西紅花酸和西紅花苷-1都顯示相同的活性,即相同劑量的西紅花酸和西紅花苷抗氧化活性差異無顯著性。西紅花酸和西紅花苷-1都具有一定的體內(nèi)抗氧化能力,西紅花苷-1在體內(nèi)水解后再吸收不會(huì)明顯改變這種成分