豬精液稀釋液保存時(shí)間的測(cè)定

豬精液稀釋液保存時(shí)間的測(cè)定

在本研究中，我們收集了五個(gè)國(guó)外的稀釋粉配方，通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較了稀釋效果，并分析了經(jīng)濟(jì)效益，為農(nóng)場(chǎng)和公職的最佳稀釋效果提供了參考。1材料和方法1.1英系大白豬和法系皮特蘭來(lái)自北京浩邦豬人工授精服務(wù)中心公豬站的20頭種公豬,其中包括19頭英系大白豬,1頭法系皮特蘭,公豬按常規(guī)飼養(yǎng)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理,生長(zhǎng)發(fā)育正常。本研究中,除1頭英系大白豬采集2次鮮精外,其他公豬皆采集1次鮮精。實(shí)驗(yàn)時(shí)間在2004年2月16日至3月4日。1.2稀釋液的準(zhǔn)備收集KIEV,GUELPH,IVTMOD,ZORPVA,BTS等5種國(guó)際稀釋粉配方(見表1),按配方成分及相關(guān)試劑當(dāng)前市場(chǎng)價(jià)格合算每份鮮精的稀釋液成本分別為2.37,2.38,1.38,0.80,1.58,15.80元。按配方準(zhǔn)備所有化學(xué)藥品和生化制劑。嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)配方中的實(shí)驗(yàn)藥品質(zhì)量、生產(chǎn)日期、廠家、藥品級(jí)別進(jìn)行,稀釋粉配置通過(guò)精密天平稱量每一種化學(xué)試劑需求量,配好后的稀釋粉充分溶解穩(wěn)定后進(jìn)行pH值、滲透壓等的測(cè)定,并進(jìn)一步過(guò)濾加熱,使用前加入抗生素(慶大霉素350mg)以備用。以卡蘇BTS中長(zhǎng)效稀釋粉作為對(duì)照組。按照公豬新鮮精液稀釋保存的GTC實(shí)驗(yàn)要求稀釋精液。1.3精子活力測(cè)定按正常采精方法,采集1個(gè)公豬精液,將活力為0.75以上的鮮精經(jīng)過(guò)濾后,立即抽取6個(gè)樣(每個(gè)樣10mL),分別加40mLKIEV,IVTMOD,GUELPH,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液(相當(dāng)于4倍稀釋)、攪拌、標(biāo)記、密封、放入恒溫箱內(nèi),每12h測(cè)定記錄精子密度、活力、畸形率等3個(gè)指標(biāo),直到精子活力下降到0.6以下時(shí)停止,記錄保存時(shí)間。以上步驟重復(fù)21次。1.4測(cè)量數(shù)據(jù)指標(biāo)1.4.1精子的百分率按照精液中做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子占總精子的百分率。在顯微鏡下觀察,鮮精活力要求不低于0.7,檢查活力時(shí)要求載玻片和蓋玻片都應(yīng)37℃下預(yù)熱。1.4.2精子畸形率精子畸形評(píng)定是通過(guò)肉眼600倍鏡下觀察200個(gè)精子中畸形精子占有比例。1.4.3溶液的ph值通過(guò)桑翌科技公司提供的pH6測(cè)定儀測(cè)定。1.4.4精髓密度通過(guò)法國(guó)卡蘇公司提供的精密密度測(cè)定儀測(cè)定。1.5不同稀釋液的酒精保存時(shí)間利用MicrosoftExcel○R軟件的TTEST對(duì)不同稀釋液處理的精液的保存時(shí)間、保存時(shí)間臨界點(diǎn)精子密度、精子畸形率進(jìn)行成對(duì)比較,本文僅對(duì)不同稀釋液的精液保存時(shí)間進(jìn)行分析。2結(jié)果與分析2.1不同來(lái)源血壓液的培養(yǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)中所有稀釋液的總體平均精液保存時(shí)間為28.2h,21頭份鮮精中最好的1/3的平均精液保存時(shí)間為45.6h,中間的1/3的平均精液保存時(shí)間為25.4h,最差的1/3的平均精液保存時(shí)間為13.7h。本實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用KIEV,GUELPH,IVTMOD,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液的精液平均保存時(shí)間(h)分別為28.3±4.58,22.0±3.27,13.7±3.47,24.9±4.69,44.3±6.05及36.3±6.23(表2),其中BTS稀釋液的精液平均保存時(shí)間最長(zhǎng),卡蘇BTS其次。成對(duì)t檢驗(yàn)結(jié)果表明,KIEV稀釋液組精液平均保存時(shí)間與IVTMOD,GUELPH,ZORPVA,及卡蘇BTS組差異不顯著,但極顯著(P<0.01)低于BTS組;GUELPH稀釋液組精液平均平均保存時(shí)間與IVTOMD及ZORPVA組差異不顯著(P>0.05),但極顯著(P<0.01)低于BTS及卡蘇BTS稀釋液組;IVTOMD稀釋液組精液平均保存時(shí)間極顯著(P<0.01)低于ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液組;ZORPVA稀釋液組精液平均保存時(shí)間極顯著(P<0.01)低于BTS及卡蘇BTS稀釋液組;BTS稀釋液組精液平均保存時(shí)間顯著(P<0.05)高于卡蘇BTS組(表2)。2.2稀釋液與鮮精的關(guān)系不同稀釋液的精液保存時(shí)間的相關(guān)系數(shù)可以反映稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應(yīng)。相關(guān)性高,表示稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應(yīng)小,該稀釋液的通用性就強(qiáng);相關(guān)性低,表示稀釋液與鮮精樣本之間的互作效應(yīng)高,該稀釋液的通用性就差,意味著不同鮮精的最佳稀釋液不同,容易導(dǎo)致人工授精生產(chǎn)管理復(fù)雜度的提高。表3列出不同稀釋液的精液保存時(shí)間的相關(guān)性。如果將1種稀釋液與其他5種稀釋液相關(guān)系數(shù)的平均值來(lái)表示本實(shí)驗(yàn)中6種稀釋液的相對(duì)通用性,則KIEV,GUELPH,IVTOMD,ZORPVA,BTS及卡蘇BTS稀釋液的相對(duì)通用性分別為0.388,0.207,0.184,0.435,0.544及0.439。3稀釋液的總體保存時(shí)間本研究對(duì)當(dāng)前國(guó)際上應(yīng)用較多的6種稀釋液進(jìn)行成對(duì)的比較,其中卡蘇BTS稀釋液以卡蘇BTS稀釋粉配制,其他皆按配方自行采購(gòu)原料成分配制而成,成本顯著比卡蘇BTS中長(zhǎng)效稀釋粉低。研究結(jié)果表明,BTS稀釋液的精液平均保存時(shí)間最長(zhǎng)(44.3±6.05)h,顯著優(yōu)于卡蘇BTS中長(zhǎng)效稀釋粉(36.3±6.23)h(P<0.05)。但從所有稀釋液的總體平均精液保存時(shí)間為僅28.2h以及卡蘇BTS中長(zhǎng)效稀釋粉的平均精液保存時(shí)間僅為(36.3±6.23)h說(shuō)明,本實(shí)驗(yàn)中所使用的公豬精液質(zhì)量有待于進(jìn)一步提高。人工授精的實(shí)踐表明,不同的品種、品系、個(gè)體甚至同一公豬在不同生理狀態(tài)下采集的精液可能與稀釋液存在互作效應(yīng),即不同的品種、品系個(gè)體甚至同一公豬在不同生理狀態(tài)下采集的精液的最佳稀釋液可能不同,這會(huì)導(dǎo)致人工授精站的操作管理難度增大。本研究首次將皮爾遜相關(guān)系數(shù)作為反映稀釋液通用性的指標(biāo),BTS稀釋液的精液保存時(shí)間高于卡蘇BTS中長(zhǎng)效稀釋液(44.3和36.