山東省細(xì)胞免疫抗腫瘤治療業(yè)內(nèi)自律性規(guī)范

山東省細(xì)胞免疫抗腫瘤治療業(yè)內(nèi)自律性規(guī)范（山東省生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)免疫細(xì)胞治療學(xué)組4月23日通過(guò)）為了確保細(xì)胞免疫抗腫瘤治療的健康、有序的發(fā)展，確保醫(yī)療安全，為腫瘤病人提供一種安全、有效的治療辦法，根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒布的《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》和《藥品GMP認(rèn)證檢查評(píng)定原則》的有關(guān)規(guī)定，并考慮到多數(shù)從事細(xì)胞治療單位現(xiàn)有的條件，按照循序漸進(jìn)的原則，使我省細(xì)胞免疫抗腫瘤治療領(lǐng)域各項(xiàng)工作逐步走向規(guī)范，特制訂《山東省細(xì)胞免疫抗腫瘤治療業(yè)內(nèi)自律性規(guī)范》，簡(jiǎn)稱《規(guī)范》。一、合用范疇本《規(guī)范》是山東省細(xì)胞免疫抗腫瘤治療領(lǐng)域業(yè)內(nèi)自律性文獻(xiàn)，合用于山東省從事細(xì)胞免疫抗腫瘤治療、并且承認(rèn)本規(guī)范的醫(yī)療機(jī)構(gòu)和生物技術(shù)公司。細(xì)胞免疫抗腫瘤治療是指應(yīng)用人的自體、同種異體或異種（非人體）的與免疫有關(guān)的體細(xì)胞，經(jīng)體外操作后回輸（或植入）人體的抗腫瘤治療辦法，涉及樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）、抗原致敏的樹(shù)突狀細(xì)胞（APDC）、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（CIK、DCIK、LAK、CD3AK、TAK）、腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞（TIL）、體外致敏的殺傷細(xì)胞（IVS、TCL）等，其它未涉及的細(xì)胞免疫抗腫瘤治療參考執(zhí)行。本規(guī)范設(shè)定兩個(gè)規(guī)定：基本規(guī)定和更高規(guī)定?；疽?guī)定是指我們現(xiàn)在必須含有條件，更高規(guī)定是指此后需要不停改善要達(dá)成的最后條件。二、人員配備規(guī)定1、臨床人員規(guī)定=1\*GB3①細(xì)胞免疫治療臨床科主任（負(fù)責(zé)人）規(guī)定：基本規(guī)定：從事細(xì)胞免疫抗腫瘤治療臨床重要負(fù)責(zé)人須含有副高或以上職稱，工作責(zé)任心強(qiáng)，含有2年以上從事細(xì)胞免疫抗腫瘤治療的臨床工作經(jīng)驗(yàn)、含有較系統(tǒng)的臨床免疫學(xué)知識(shí)，含有解決細(xì)胞免疫治療過(guò)程中可能出現(xiàn)的多個(gè)不良反映的能力和對(duì)應(yīng)的細(xì)胞免疫抗腫瘤治療知識(shí)，能指導(dǎo)下級(jí)醫(yī)師從事免疫細(xì)胞治療工作；細(xì)胞免疫治療臨床負(fù)責(zé)人肩負(fù)著培訓(xùn)其它參加此項(xiàng)目的臨床醫(yī)師的職責(zé)，并及時(shí)與實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人協(xié)商，協(xié)調(diào)病人的治療方案。更高規(guī)定：在含有基本規(guī)定的基礎(chǔ)上，通過(guò)較系統(tǒng)的免疫細(xì)胞治療培訓(xùn)，含有系統(tǒng)的臨床免疫學(xué)知識(shí)，掌握一定的基礎(chǔ)免疫學(xué)知識(shí)，理解實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞制備流程和辦法，掌握細(xì)胞免疫抗腫瘤治療與其它療法聯(lián)合治療方案的制訂原則，含有臨床科研能力。=2\*GB3②細(xì)胞免疫治療臨床醫(yī)師規(guī)定：基本規(guī)定：從事此項(xiàng)目臨床治療的醫(yī)師必須含有本科或本科以上學(xué)歷，須含有基本的免疫治療知識(shí)，通過(guò)各單位組織的基本培訓(xùn)，掌握免疫治療過(guò)程中不良反映的解決辦法和急救辦法。更高規(guī)定：在含有基本規(guī)定的基礎(chǔ)上，臨床免疫治療的醫(yī)師通過(guò)系統(tǒng)專業(yè)培訓(xùn)，含有較為系統(tǒng)的臨床免疫學(xué)知識(shí)，并能解釋免疫治療中出現(xiàn)的臨床現(xiàn)象。2、實(shí)驗(yàn)室人員規(guī)定=1\*GB3①實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員規(guī)定：基本規(guī)定：含有大學(xué)（專）本科或以上學(xué)歷，含有醫(yī)學(xué)或生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)或工作經(jīng)歷，含有一定的基礎(chǔ)免疫學(xué)知識(shí)，經(jīng)免疫細(xì)胞培養(yǎng)培訓(xùn)1個(gè)月以上，能識(shí)別培養(yǎng)細(xì)胞中與否存在微生物污染，會(huì)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。能對(duì)的推行其職責(zé)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。更高規(guī)定：含有醫(yī)學(xué)檢查系大學(xué)（專）本科學(xué)歷，或含有細(xì)胞培養(yǎng)1年以上學(xué)習(xí)經(jīng)歷的碩士學(xué)歷，再經(jīng)3個(gè)月以上免疫細(xì)胞制備培訓(xùn)或?qū)嵙?xí)，或含有不少于50例實(shí)驗(yàn)性免疫細(xì)胞制備經(jīng)驗(yàn)，方可獨(dú)立操作。=2\*GB3②實(shí)驗(yàn)室主任（負(fù)責(zé)人）規(guī)定：基本規(guī)定：含有副高級(jí)或以上職稱、含有較系統(tǒng)的基礎(chǔ)免疫學(xué)知識(shí)，并含有2年以上從事細(xì)胞免疫抗腫瘤治療的實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)驗(yàn)，能夠指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員工作，含有解決在免疫細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的復(fù)雜問(wèn)題，對(duì)本規(guī)范的實(shí)施、實(shí)驗(yàn)室安全和制備的免疫細(xì)胞的質(zhì)量負(fù)責(zé)。承當(dāng)與臨床科室溝通的職責(zé)。更高規(guī)定：在基本規(guī)定的基礎(chǔ)上，含有系統(tǒng)的基礎(chǔ)免疫學(xué)知識(shí)和臨床免疫學(xué)知識(shí)，理解細(xì)胞治療的臨床流程，含有基本的基礎(chǔ)科研能力，有一定的臨床科研知識(shí)。含有有關(guān)疾病的基本的臨床知識(shí)。能及時(shí)掌握國(guó)內(nèi)外最新的細(xì)胞免疫治療的最新動(dòng)態(tài)。=3\*GB3③其別人員規(guī)定：基本規(guī)定：從事質(zhì)量檢查的工作人員以及其它需要進(jìn)入干凈實(shí)驗(yàn)室（GMP實(shí)驗(yàn)室）的工作人員（涉及維修、輔助人員）應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的指導(dǎo)下，按照進(jìn)入干凈實(shí)驗(yàn)室的流程進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)含有一定的微生物學(xué)基礎(chǔ)和干凈作業(yè)等方面的知識(shí)。更高規(guī)定：在基本規(guī)定的基礎(chǔ)上，通過(guò)一定的干凈實(shí)驗(yàn)室工作培訓(xùn)，掌握微生物學(xué)知識(shí)，培訓(xùn)有統(tǒng)計(jì)。=4\*GB3④單位職責(zé)：各單位應(yīng)建有對(duì)各級(jí)員工進(jìn)行本規(guī)范和專業(yè)技術(shù)、崗位操作知識(shí)、安全知識(shí)等方面的培訓(xùn)制度、培訓(xùn)計(jì)劃和培訓(xùn)檔案，并按照有關(guān)規(guī)定定時(shí)檢查，有檢查統(tǒng)計(jì)。三、材料和設(shè)備配備規(guī)定1.試劑和耗材準(zhǔn)入基本規(guī)定：用于臨床治療的細(xì)胞懸液制備所需試劑和器械均必須經(jīng)食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)審批，含有臨床應(yīng)用的許可證，即注射到病人體內(nèi)的配制細(xì)胞懸液所用液體和添加劑必須使用國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)藥品，接觸細(xì)胞懸液的包裝材料必須含有醫(yī)療設(shè)備注冊(cè)證。一次性耗材嚴(yán)禁重復(fù)使用。用于細(xì)胞分離、純化和培養(yǎng)的試劑和耗材以及多個(gè)添加劑，均應(yīng)當(dāng)符合藥品生產(chǎn)公司使用的試劑和耗材的質(zhì)量原則，每批耗材和試劑均需要有出產(chǎn)廠家的質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告，報(bào)告需長(zhǎng)久保存。所使用的試劑和耗材以及它們的質(zhì)檢報(bào)告均要建立登記制度，確保材料來(lái)源的可追溯性。更高規(guī)定：在基本規(guī)定的前提下，全部的試劑和耗材都有食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)頒發(fā)的注冊(cè)證書(shū)。2.耗材和試劑寄存基本規(guī)定：耗材應(yīng)按品種、規(guī)格、批號(hào)分別寄存，庫(kù)房干燥、干凈，物品名稱標(biāo)簽和進(jìn)貨日期標(biāo)記清晰，庫(kù)房寄存的物品必須有外包裝，干凈實(shí)驗(yàn)室寄存的物品不得帶有外包裝，能夠有內(nèi)包裝。對(duì)培養(yǎng)液和試劑等對(duì)溫度、濕度或其它條件有特殊規(guī)定的試劑和材料應(yīng)按規(guī)定條件貯存。庫(kù)房存儲(chǔ)的物品出入統(tǒng)計(jì)清晰，定時(shí)盤(pán)點(diǎn)。更高規(guī)定：庫(kù)房規(guī)定恒溫、自動(dòng)除濕、有空氣凈化系統(tǒng)。3.試劑和耗材使用：基本規(guī)定：培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加成分和能接觸到培養(yǎng)液的用品必須符合國(guó)家藥品監(jiān)督管理局3月20日頒布的《人體細(xì)胞治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》原則。能夠使用異種血清，推薦使用病人自體血清或血漿。更高規(guī)定：商業(yè)來(lái)源的培養(yǎng)基，應(yīng)由廠商提供全部培養(yǎng)基成分資料和質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告。采用無(wú)血清培養(yǎng)液、可添加病人自體血清或自體血漿，盡量避免使用內(nèi)酰胺類抗生素。4、設(shè)備配備規(guī)定基本規(guī)定：多個(gè)細(xì)胞制備設(shè)備均安放在符合GMP原則的干凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，重要涉及：CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、大容量水平離心機(jī)、倒置顯微鏡、加樣槍等以及配套設(shè)備。檢測(cè)設(shè)備可按臨床實(shí)驗(yàn)室環(huán)境安放，檢測(cè)設(shè)備涉及：流式細(xì)胞儀。儲(chǔ)存設(shè)備：細(xì)胞儲(chǔ)存用超低溫冰箱（-80℃），試劑和培養(yǎng)液儲(chǔ)存冰箱等。如果較遠(yuǎn)距離運(yùn)輸（運(yùn)輸時(shí)間半小時(shí)以上），需要用保溫箱（4-15℃更高規(guī)定：除了滿足基本規(guī)定外，細(xì)胞制備設(shè)備中CO2培養(yǎng)箱，推薦使用品有自動(dòng)消毒、帶有空氣過(guò)濾功效的培養(yǎng)箱，操作臺(tái)推薦使用生物安全柜，離心機(jī)推薦使用無(wú)碳刷、大容量恒溫水平離心機(jī)，倒置顯微鏡應(yīng)帶有圖像采集系統(tǒng)。檢測(cè)設(shè)備流式細(xì)胞儀外，可配備ELI-SPOT檢測(cè)設(shè)備，可根據(jù)需要配備部分用于科研設(shè)備。儲(chǔ)存設(shè)備中推薦使用液氮箱，超低溫冰箱（-80℃）和試劑和培養(yǎng)液儲(chǔ)存冰箱應(yīng)帶有溫度自動(dòng)統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)，并且配有備用冰箱。細(xì)胞運(yùn)輸用保溫箱（4-15℃）推薦使用車載冰箱。細(xì)胞凍存降溫應(yīng)配備程控降溫儀。四、細(xì)胞制備環(huán)境規(guī)定1、細(xì)胞采集規(guī)定基本規(guī)定：細(xì)胞采集應(yīng)在細(xì)胞采集室或治療室中進(jìn)行，采集環(huán)境需要按照治療室的規(guī)定按期消毒，并進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。采集的細(xì)胞量要達(dá)成能制備出臨床所需細(xì)胞數(shù)量的規(guī)定，以DC細(xì)胞為主的治療必須使用血細(xì)胞分離機(jī)。病人的體質(zhì)能耐受細(xì)胞采集全過(guò)程。采集室含有急救車和簡(jiǎn)易急救設(shè)備。有左心衰癥狀的病人慎用血細(xì)胞分離機(jī)。更高規(guī)定：如果病人身體狀況允許，應(yīng)使用血細(xì)胞分離機(jī)采集病人外周血中單個(gè)核細(xì)胞。采集數(shù)量：?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞數(shù)不低于1×109,單核細(xì)胞數(shù)不低于2×108。如果病人經(jīng)多次化療或放療，應(yīng)適宜增加細(xì)胞采集數(shù)量。2.細(xì)胞制備環(huán)境規(guī)定：基本規(guī)定：采集的細(xì)胞進(jìn)一步解決需要在達(dá)成國(guó)家GMP原則的干凈實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，設(shè)備和物品擺放、儲(chǔ)存必須符合國(guó)家GMP的規(guī)定。干凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)需配備百級(jí)凈化超凈工作臺(tái)或生物安全柜，細(xì)胞培養(yǎng)的多個(gè)暴露性操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中操作。倡導(dǎo)一種病人的樣本兩人獨(dú)立操作。操作間設(shè)立簡(jiǎn)樸，無(wú)死角。人和物的通道分離。全部使用的物品均不能產(chǎn)生粉塵和纖維脫落，干凈實(shí)驗(yàn)室墻壁無(wú)粉塵。進(jìn)入干凈實(shí)驗(yàn)室的物品盡量保持無(wú)菌。干凈實(shí)驗(yàn)室定時(shí)消毒，空氣過(guò)濾器定時(shí)更換，并進(jìn)行空氣微生物培養(yǎng)，有統(tǒng)計(jì)。細(xì)胞培養(yǎng)箱應(yīng)放置在萬(wàn)級(jí)或萬(wàn)級(jí)以上的凈化級(jí)別環(huán)境中。更高規(guī)定：GMP實(shí)驗(yàn)室廢棄物品通過(guò)專用通道，經(jīng)消毒后離開(kāi)干凈實(shí)驗(yàn)室。人員進(jìn)入和離開(kāi)通道分離。每?jī)芍軝z測(cè)一次空氣微生物。每六個(gè)月檢測(cè)一次實(shí)驗(yàn)室凈化級(jí)別，要保持實(shí)驗(yàn)室干凈度不低于萬(wàn)級(jí)，有統(tǒng)計(jì)。實(shí)驗(yàn)室有攝像監(jiān)控。3.干凈實(shí)驗(yàn)室衣物穿戴規(guī)定基本規(guī)定：干凈實(shí)驗(yàn)室使用的無(wú)菌服制作材料規(guī)定耐高溫、無(wú)脫落纖維或粉塵、不產(chǎn)生靜電。將這種材料制成連體衣，包含帽子、上衣、褲子和襪子4部分為一體。衣服每七天高溫消毒一次。進(jìn)入干凈實(shí)驗(yàn)室衣物穿戴程序依次為：換鞋、消毒手和前臂、戴一次性口罩和帽子、穿無(wú)菌猴服、再次換鞋、戴無(wú)粉塵無(wú)菌手套，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。頭發(fā)需全部包進(jìn)帽子里，不得外露。所用拖鞋每1—2周消毒液浸泡消毒一次。更高規(guī)定：規(guī)定進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室前先洗澡，換實(shí)驗(yàn)室內(nèi)衣，然后，再按照上述流程進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。無(wú)菌猴服使用完畢后放入臭氧消毒柜（或其它消毒柜）中消毒，備下次使用。4.含有感染性樣原來(lái)源的免疫細(xì)胞制備基本規(guī)定：需使用單獨(dú)的凈化區(qū)域。若無(wú)單獨(dú)的凈化區(qū)域，需操作完畢后，徹底消毒，然后再進(jìn)行其它病人治療。更高規(guī)定：感染樣本解決需要有獨(dú)立的干凈實(shí)驗(yàn)室，獨(dú)立的空氣凈化系統(tǒng)，專用生物安全柜，生物安全柜氣體外排，不進(jìn)入循環(huán)。5.干凈實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：基本規(guī)定：每半個(gè)月應(yīng)監(jiān)測(cè)干凈實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)和培養(yǎng)箱的微生物數(shù)，懷疑有污染隨時(shí)檢測(cè)，徹底去除污染后必須檢測(cè)合格后方能使用。更高規(guī)定：各實(shí)驗(yàn)室之間、不同干凈度的區(qū)域之間有空氣壓差檢測(cè)裝置，并有統(tǒng)計(jì)。6.實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)辦法：直徑10cm的培養(yǎng)皿暴露在操作臺(tái)內(nèi)1小時(shí)，不應(yīng)有微生物存在；暴露在細(xì)胞培養(yǎng)箱中和干凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)3五、治療所用細(xì)胞來(lái)源1.如果條件允許，盡量采用病人自體細(xì)胞進(jìn)行免疫治療。不得采用異種細(xì)胞。2.如果采用同種異體細(xì)胞，則需要闡明供體的年紀(jì)、性別，供體必須符合國(guó)家對(duì)獻(xiàn)血員的規(guī)定，并提供測(cè)試的辦法及符合條件的根據(jù)。供體必須通過(guò)檢查證明HBV抗原、抗HCV、抗HIV-1/2、梅毒抗體、細(xì)菌、霉菌均為陰性，必要時(shí)需闡明供體的既往病史、家族史等臨床資料。還必須對(duì)供體做HLA-I類和II類分型檢查，并證明與受體（病人）相匹配，同時(shí)提供檢測(cè)辦法和根據(jù)。應(yīng)注明供者的來(lái)源并加以標(biāo)記。六、細(xì)胞制備的技術(shù)指標(biāo)和質(zhì)量控制1.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控負(fù)責(zé)人規(guī)定：基本規(guī)定：實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量負(fù)責(zé)人應(yīng)負(fù)責(zé)細(xì)胞制備全過(guò)程的質(zhì)量管理和檢查，能獨(dú)立推行其職責(zé)。負(fù)責(zé)對(duì)制備的細(xì)胞樣本進(jìn)行質(zhì)量（如細(xì)胞標(biāo)志物、存活率、殺傷實(shí)驗(yàn)等）、數(shù)量和微生物學(xué)檢查（如細(xì)菌、真菌、支原體和內(nèi)毒素檢查），并按實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)如實(shí)出具檢查報(bào)告。推薦采用第三方檢測(cè)。更高規(guī)定：對(duì)不同時(shí)期的質(zhì)控成果提供客觀的分析報(bào)告，并提出改善意見(jiàn)和建議。2.細(xì)胞培養(yǎng)辦法規(guī)定：基本規(guī)定：建議1份樣本一分為二，兩人用各自的試劑獨(dú)立操作。DC等抗原遞呈細(xì)胞制備須使用自體血清或無(wú)血清培養(yǎng)液，不能使用異種血清（如牛血清等），可使用少量同種異體血清（如人血清、臍血清等）。DC普通要采用自體細(xì)胞制備，盡量避免使用異體細(xì)胞制備DC。CIK、NK等MHC非限制性殺傷細(xì)胞培養(yǎng)，推薦使用自體來(lái)源細(xì)胞制備，培養(yǎng)液可添加異種血清、同種異體血清和自體血清，推薦使用無(wú)血清培養(yǎng)液或添加自體血清的培養(yǎng)液。如果使用同種異體細(xì)胞制備，則每批應(yīng)注明細(xì)胞來(lái)源并加以標(biāo)記、做好配型、注明供者的具體信息。CTL、TIL等MHC限制性殺傷細(xì)胞培養(yǎng)，推薦使用自體來(lái)源細(xì)胞制備，也可采用同種異體細(xì)胞制備（CTL），培養(yǎng)液可添加同種異體血清和自體血清，推薦使用無(wú)血清培養(yǎng)液或添加自體血清的培養(yǎng)液，在抗原遞呈細(xì)胞存在的前提下避免使用異種血清。如果使用同種異體細(xì)胞制備，則每批應(yīng)注明細(xì)胞來(lái)源并加以標(biāo)記、做好配型、注明供者的具體信息。更高規(guī)定：在滿足基本規(guī)定的基礎(chǔ)上，DC等抗原遞呈細(xì)胞培養(yǎng)末期，要監(jiān)測(cè)不成熟細(xì)胞比例，可采用一切可行的辦法，減少不成熟DC的比例。CIK、NK等MHC非限制性殺傷細(xì)胞培養(yǎng)末期，監(jiān)測(cè)Treg細(xì)胞比例，激勵(lì)探索提高細(xì)胞毒性的培養(yǎng)辦法，可采用可行安全的辦法減少Treg的比例。CTL、TIL等MHC限制性殺傷細(xì)胞培養(yǎng)，推薦使用TIL替代CTL治療，CTL培養(yǎng)推薦使用特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞經(jīng)純化后的培養(yǎng)辦法。3.回輸免疫細(xì)胞質(zhì)量原則：基本規(guī)定：全部臨床使用細(xì)胞微生物檢測(cè)指標(biāo)均為陰性；存活率不低于80%（臺(tái)盼藍(lán)拒染率）。DC質(zhì)量原則：CD11c+CD86+雙陽(yáng)性細(xì)胞不低于70%，CD11c+CD83+不低于50%，每個(gè)療程有效DC細(xì)胞不應(yīng)不大于50×106。CIK、NK質(zhì)量原則：CIK細(xì)胞CD3+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞和CD3+CD56+陽(yáng)性細(xì)胞總和不不大于60%，NK細(xì)胞CD3-CD56+細(xì)胞比例不低于50%，每個(gè)療程CIK、NK細(xì)胞總數(shù)不不大于50×108。CTL、TIL質(zhì)量原則：CD3+CD8+細(xì)胞不不大于70%，每個(gè)療程治療細(xì)胞總數(shù)不低于50×108。更高規(guī)定：增加體外檢測(cè)制備的免疫細(xì)胞應(yīng)含有的生物學(xué)功效和生物學(xué)效應(yīng)，例如免疫細(xì)胞含有的某種生物學(xué)功效，分泌某種產(chǎn)物的能力，體現(xiàn)某種標(biāo)志的水平等。細(xì)胞存活率不低于95%（臺(tái)盼藍(lán)拒染率）；DC質(zhì)量原則：CD11c+CD86+雙陽(yáng)性細(xì)胞不低于90%,CD11c+CD83+不低于80%，每個(gè)療程有效DC細(xì)胞不應(yīng)不大于100×106，檢測(cè)其遞呈的腫瘤特異性抗原在DC細(xì)胞膜上的體現(xiàn)率；CIK、NK質(zhì)量原則：CIK細(xì)胞CD3+CD8+雙陽(yáng)性細(xì)胞和CD3+CD56+陽(yáng)性細(xì)胞總和不不大于80%，NK細(xì)胞CD3-CD56+細(xì)胞比例不低于50%，每個(gè)療程CIK、NK細(xì)胞總數(shù)不不大于100×108，CIK和NK細(xì)胞檢測(cè)對(duì)靶細(xì)胞的殺傷率（可采用惡性黑色素瘤細(xì)胞株為靶細(xì)胞），同時(shí)檢測(cè)CD4+CD25+FOXP3+陽(yáng)性細(xì)胞比例（Treg），其比例要不大于5%；CTL、TIL質(zhì)量原則：CD3+CD8+細(xì)胞不不大于90%，每個(gè)療程治療細(xì)胞總數(shù)不低于100×108。檢測(cè)細(xì)胞在特異性腫瘤抗原刺激下，分泌IFN-r的細(xì)胞的比例。4.細(xì)胞制備統(tǒng)計(jì)規(guī)定：基本規(guī)定：多個(gè)免疫細(xì)胞制備過(guò)程都有具體統(tǒng)計(jì)，涉及細(xì)胞采集數(shù)量，獲得單核細(xì)胞數(shù)量、制備辦法、使用的培養(yǎng)液和添加劑的數(shù)量、批號(hào)等有關(guān)信息。自體免疫細(xì)胞制備及鑒定過(guò)程的原始統(tǒng)計(jì)和檢測(cè)報(bào)告，并永久保存?zhèn)洳?。其它有關(guān)操作也要有具體的操作統(tǒng)計(jì)。5、標(biāo)記規(guī)定：全部物品使用或啟封后都要有標(biāo)記，保存的物品、分裝試劑、細(xì)胞、樣本也同樣要有標(biāo)記。標(biāo)記內(nèi)容涉及：物品種類、名稱、日期、添加的因子名稱及數(shù)量和操作人等內(nèi)容。標(biāo)記內(nèi)容清晰、不易脫落。發(fā)送的細(xì)胞要注明病人姓名、性別、年紀(jì)、科別、住院號(hào)、細(xì)胞種類、細(xì)胞數(shù)量、制備時(shí)間和操作者等有關(guān)信息。七.細(xì)胞保存與運(yùn)輸1、細(xì)胞保存與凍存細(xì)胞復(fù)蘇：細(xì)胞如果在制備結(jié)束后2小時(shí)內(nèi)完畢細(xì)胞輸注放置室溫保存即可；如果需要放置2—6小時(shí)，則細(xì)胞必須保存在4-15℃環(huán)境中（冰箱或保溫箱）；如果需要長(zhǎng)久保存，細(xì)胞需要按照一定的濃度加入細(xì)胞凍存液，逐步降溫至適宜的溫度（-20℃—-80℃）。如果保存6個(gè)月以內(nèi)，可放置于-80℃超低溫冰箱中保存。如果需要保存時(shí)間超出6個(gè)月，則必須在液氮中保存。液氮中細(xì)胞保存時(shí)間可達(dá)成。細(xì)胞凍存降溫推薦采用程控降溫儀，也可采用凍存盒和其它可行的降溫辦法。細(xì)胞復(fù)蘇則需快速升溫的辦法，推薦使用恒溫循環(huán)水浴箱，也可使用其它辦法復(fù)蘇細(xì)胞。要盡量避免在細(xì)胞解凍的熔點(diǎn)溫度時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。激勵(lì)對(duì)細(xì)胞放置62、細(xì)胞運(yùn)輸：細(xì)胞從實(shí)驗(yàn)室送至病房途中，細(xì)胞制劑不能露天暴露，推薦使用外包裝袋將細(xì)胞制劑密封后運(yùn)至病房，也可使用其它干凈容器將細(xì)胞制劑運(yùn)輸至病房，普通在2-3h內(nèi)回輸給患者。如果運(yùn)輸需要2—6小時(shí)，則需要將細(xì)胞制劑保存在4-15℃環(huán)境中，推薦使用車載冰箱，如果用保溫箱則需要用冰袋降溫，并且避免細(xì)胞制劑與冰袋直接接觸。八、臨床應(yīng)用1.免疫細(xì)胞治療技術(shù)臨床應(yīng)用和倫理原則：免疫細(xì)胞治療要科學(xué)性原則、不傷害和低傷害原則、知情同意原則、對(duì)病人有利原則、尊重原則。必須通過(guò)使用單位倫理委員會(huì)的論證并同意。在臨床方案制訂中，要避免免疫細(xì)胞與免疫克制劑同時(shí)使用，如果需要配合治療要按照序貫治療的次序避免治療辦法沖突。對(duì)不適合增強(qiáng)免疫力的疾病和體質(zhì)（如接受器官移植者、卡氏評(píng)分不大于40分等），要謹(jǐn)慎使用細(xì)胞免疫治療。特別提示，細(xì)胞免疫治療后的化療、放療等有損機(jī)體免疫力的治療，有可能對(duì)免疫治療的遠(yuǎn)期效果帶來(lái)負(fù)面影響。2、免疫細(xì)胞臨床應(yīng)用方案根據(jù)病人腫瘤的大小、腫瘤分化、分期、腫瘤轉(zhuǎn)移狀況、病人年紀(jì)范疇、手術(shù)狀況、卡氏評(píng)分和病人體質(zhì)等諸多因素，綜合考慮制訂具體治療方案。推薦使用多個(gè)細(xì)胞多靶點(diǎn)、多個(gè)治療辦法聯(lián)合治療方案。需要配合化療等損傷免疫力的治療辦法，推薦在細(xì)胞采集后與細(xì)胞回輸前的間期進(jìn)行；提高免疫力的輔助治療可在細(xì)胞回輸期間同時(shí)進(jìn)行。細(xì)胞采集前可進(jìn)行改善細(xì)胞免疫性狀的前期治療辦法。臨床規(guī)范治療方案，推薦由臨床醫(yī)生與實(shí)驗(yàn)室醫(yī)生協(xié)商制訂，由臨床醫(yī)生組織實(shí)施。如采用異體免疫細(xì)胞治療，則需要親密觀察不良反映，回輸?shù)募?xì)胞數(shù)量應(yīng)當(dāng)按照由少到多的原則，根據(jù)不良反映的輕重制訂下次回輸?shù)募?xì)胞劑量。3.免疫細(xì)胞治療前的準(zhǔn)備工作：基本規(guī)定：免疫細(xì)胞治療前應(yīng)推行告知義務(wù)，病人或病人委托人訂立治療知情同意書(shū)。按照輸血常規(guī)的項(xiàng)目檢測(cè)感染指標(biāo)、腫瘤有關(guān)影像學(xué)檢查、腫瘤標(biāo)志物、肝腎功、血常規(guī)等。如果伴有其它疾病應(yīng)做對(duì)應(yīng)的檢查。有條件的單位應(yīng)做免疫指標(biāo)檢查。更高規(guī)定：全套基因檢測(cè)，循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）檢測(cè)，檢測(cè)腫瘤組織干細(xì)胞，淋巴細(xì)胞CTL-A4、PD-1標(biāo)志檢測(cè)。4、細(xì)胞輸注的途徑、方式、辦法和預(yù)解決：CTL、TIL、CIK、NK等免疫殺傷細(xì)胞，普通采用靜脈輸注治療的方式，也能夠采用局部輸注治療的方式（介入治療）。DC等免疫遞呈細(xì)胞采用以皮下注射為主的治療方式，在皮下注射的同時(shí)，也能夠部分靜脈注射。DC細(xì)胞皮下注射部位：根據(jù)病情，選擇容易使DC細(xì)胞通過(guò)淋巴管達(dá)成腫瘤部位，或腫瘤易轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)部位。CIK、CTL、NK、TIL等殺傷細(xì)胞輸注，必須用輸血器，以避免細(xì)胞團(tuán)阻塞血管。靜脈輸注細(xì)胞治療前30分鐘，可用非那根等抗過(guò)敏藥品防止過(guò)敏反映，可用解熱鎮(zhèn)痛類藥品防止發(fā)熱反映。避免應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類和其它免疫克制劑防止不良反映。5、免疫細(xì)胞治療后檢查項(xiàng)目：復(fù)查基本規(guī)定中的腫瘤有關(guān)項(xiàng)目，更高規(guī)定中除了基因檢測(cè)外的其它項(xiàng)目。九、不良反映的控制和解決方法在不危及生命的前提下，普通發(fā)熱和細(xì)胞注射完畢4小時(shí)后的高熱，推薦使用解熱鎮(zhèn)痛類藥品，避免使用糖皮質(zhì)激素類藥品。如果發(fā)生嚴(yán)重的過(guò)敏反映（如過(guò)敏性休克）或輸注細(xì)胞后短時(shí)間內(nèi)發(fā)生激烈寒戰(zhàn)、或有過(guò)敏性休克的趨勢(shì)，則立刻注射糖皮質(zhì)激素類藥品，終止免疫反映，其它治療按照過(guò)敏性休克解決，并保存細(xì)胞回輸殘液備查。十、細(xì)胞免疫治療臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)和隨訪：基本規(guī)定：病人治療后除了腫瘤有關(guān)指標(biāo)臨床檢測(cè)前后對(duì)比外，臨床指標(biāo)重要觀察病人飲食、卡氏評(píng)分、病人其它隨著疾病病情與否改善，病人體力變化等。建立免疫細(xì)胞治療病人臨床資料數(shù)據(jù)