精液冷凍保存在宮腔內(nèi)人工授精周期中的應(yīng)用

精液冷凍保存在宮腔內(nèi)人工授精周期中的應(yīng)用

宮內(nèi)粘連技術(shù)（iui）作為輔助生殖技術(shù)的重要組成部分，通過該技術(shù)的簡單操作和相對較低的成本，它在治療失眠癥方面發(fā)揮著越來越重要的作用。人類精液冷凍保存起源于1963年,目前該技術(shù)已經(jīng)相對成熟并在臨床和科研上得到廣泛應(yīng)用,在男性生育力保存以及克服男性心理疾患等方面發(fā)揮著重要作用。少弱精子是導(dǎo)致男性不育的主要原因。中藥、IUI是治療少弱精子癥較常用的方法,但中藥單獨(dú)治療周期較長,部分少弱精子癥患者中藥治療后并無明顯改善,而單行IUI則常因精子質(zhì)量問題導(dǎo)致治療失敗。若能將少弱精子癥患者精液多次冷凍保存,富集活力高的精子用于IUI,可能是解決其生殖障礙的有效方法。本文分析了本中心2008年3月至2009年6月152個IUI治療周期,對部分少弱精子癥患者的精液進(jìn)行冷凍保存,精液解凍后結(jié)合新鮮精液行IUI,以探討因少弱精子癥所致不育的有效治療方法。1數(shù)據(jù)和方法1.1少弱精子癥選擇2008年3月至2009年5月來本中心就診患者103對夫婦,均為原發(fā)性不孕,共行152個IUI治療周期;其中精液正常者53個周期,少弱精子癥者99個周期。按精液質(zhì)量情況將152個IUI治療周期分為3組,精液正?；颊邔ζ渑渑夹蠭UI53個周期(組1),少弱精子癥者行IUI52個周期(組2),經(jīng)中藥治療后無明顯改善的少弱精子癥患者,經(jīng)精液冷凍保存后結(jié)合新鮮精液行IUI47個周期(組3)。少弱精子癥的診斷參照WHO《人類精液及精子宮頸粘液相互作用手冊》第四版標(biāo)準(zhǔn)。女方患者陰道B超監(jiān)測有排卵,輸卵管碘油造影檢查至少一側(cè)輸卵管通暢。1.2抗機(jī)構(gòu)1.4模型的重建中藥治療后無效的少弱精子癥患者,當(dāng)精液處理前前向活動精子總數(shù)(a+b)不低于5×106時,患者在簽署精液冷凍保存知情同意書后行精液冷凍保存。1.3不同冷凍條件下精子的解凍待精液液化完全后按1∶3的比例分別將SpermCryoProtecTMⅡ(Nidacon,美國)和新鮮精液加入到2ml的凍存管(Corning,美國)中,混勻后將冷凍管固定于冷凍支架(NALGENE,美國)上,于4℃平衡1h,隨后將冷凍支架置于距離液氮面1cm處熏蒸10～15min,然后迅速投入液氮中保存。IUI時將冷凍管迅速取出后置于37℃水浴鍋中持續(xù)震蕩解凍10min。精液冷凍前、解凍后用精子專用計數(shù)板(Makler板)于顯微鏡下檢測精子活力、密度等指標(biāo)。將新鮮精液或冷凍復(fù)蘇后的精液標(biāo)本分別加至底層為1.5ml的80%PureSperm(Nidacon,美國),上層為1.5ml的40%PureSperm液面上,保持界面的清晰,300×g離心15min(冷凍復(fù)蘇精液離心20min),棄上清。將沉淀懸浮于4ml的PureSpermWash(Nidacon,美國)中,300×g離心10min,留沉淀0.5～0.8ml混勻備用,精液洗滌前后取樣鏡檢。要求患者精液處理后前向活動精子總數(shù)(a+b)達(dá)到10×106以上方可行IUI。1.4血hcg檢測女性患者根據(jù)年齡、卵巢功能和性激素水平不同,一般采用克羅米酚、人絕經(jīng)期促性腺激素(HMG)、來曲唑等不同的促排卵治療方案,持續(xù)監(jiān)測卵泡發(fā)育情況,當(dāng)優(yōu)勢卵泡發(fā)育成熟或檢測到LH峰值時,注射人絨毛膜促性腺激素(hCG)5000～10000IU,于次日下午行IUI治療。女方取截石位,甲硝唑和無菌生理鹽水消毒清洗會陰,暴露宮頸后用1ml的注射器與專用的人工授精管(WALLACE,AIC18,英國)連接,抽吸精子懸液注入宮腔后,抬高臀部,平臥休息30min。IUI后次日B超監(jiān)測卵泡排卵后,中藥口服健黃體并輔以黃體酮肌注20mg/d,14d后檢測女方血hCG值確定有無生化妊娠;35d女方復(fù)查B超,見胎心認(rèn)定為臨床妊娠。1.5妊娠率的統(tǒng)計方差分析采用SPSS17.0對各組間不孕患者年齡、不孕年限、各項精液常規(guī)參數(shù)等數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,對各組間妊娠率進(jìn)行χ2檢驗。P<0.05為差異有顯著性。2兩組前向活動精子總數(shù)的比較各組之間男方年齡、女方年齡及不孕年限均無顯著性差異,見表1。組3處理前精液體積、精子密度、精子活率、a級精子、b級精子、處理后前向活動精子總數(shù)均低于組1,差異有極顯著性(P<0.01);組3精液體積、精子活率、a級精子均低于組2(P<0.01),組3處理后前向活動精子總數(shù)高于組2,但差異不顯著(P>0.05),見表1。組3生化妊娠率最高,組1次之,組2生化妊娠率最低;組1臨床妊娠率最高,組3臨床妊娠率低于組1,高于組2,但各組間妊娠率差異不顯著(P>0.05)。見表2。3妊娠率的總體要求IUI是治療各種原因引起的男性不育的主要方法之一。與體外受精-胚胎移植(IVF-ET)和單精子顯微注射(ICSI)等技術(shù)難度更大、費(fèi)用更高、侵襲性更強(qiáng)的其他輔助生殖技術(shù)相比,IUI更符合正常的生殖生理過程,其治療費(fèi)用、胎兒畸形率和死胎率均比較低,因此當(dāng)男性不育病因治療無效時,通常先嘗試IUI治療,除非患者無可供使用的精子。Francavilla等的研究認(rèn)為,對于少弱精子、畸精癥及抗精子抗體陽性夫婦而言,IUI結(jié)合卵巢微刺激較單純行IUI更為有效。大部分文獻(xiàn)都認(rèn)為,IUI過程中妊娠率隨著活動精子總數(shù)的增加而遞增,處理后的活動精子總數(shù)可以作為事先預(yù)測IUI妊娠結(jié)果的指標(biāo)。一般認(rèn)為,處理后活動精子總數(shù)(PTMS)是判斷男性患者生育力的潛在指標(biāo),要想獲得預(yù)期的IUI妊娠率必須要求PTMS達(dá)到一定的量。對于PTMS閾值目前尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),不同研究者之間的觀點(diǎn)并不統(tǒng)一。多數(shù)文獻(xiàn)認(rèn)為PTMS>10×106時,可以獲得IUI適宜的周期妊娠率。Braschd等認(rèn)為PTMS計數(shù)3×106是IUI受孕的最低閾值,但只有當(dāng)PTMS>20×106時才可以顯著提高妊娠率。Francavilla等則認(rèn)為如果沒有畸形的精子,甚至少于5×106的嚴(yán)重少精患者也不會影響IUI妊娠率。盧少明等建議當(dāng)男性患者PTMS>10×106時,應(yīng)首選IUI治療;當(dāng)PTMS為5～10×106時,因IUI較之其他輔助生殖技術(shù)經(jīng)濟(jì)、易接受等特點(diǎn),也可先試行IUI;但若PTMS<5×106,則應(yīng)直接求助其它更為可靠的輔助生殖技術(shù)。中醫(yī)藥治療少弱精子可以明顯改善患者精子質(zhì)量,有一定療效。何馳華等研究證明,中藥制劑聯(lián)合密度梯度離心制備法治療少弱精子癥較單獨(dú)用中藥治療或單獨(dú)用IUI治療其配偶妊娠率要高。但臨床實踐中表明部分少弱精子癥患者通過中醫(yī)藥治療后精液質(zhì)量并無明顯改善,無法滿足IUI的要求。本文針對少弱精子癥患者進(jìn)行精液冷凍保存,以獲得盡可能多的PTMS,尤其是前向活動精子總數(shù)并應(yīng)用于IUI,同時對各組精液處理前后的各項參數(shù)以及妊娠率進(jìn)行比較,結(jié)果顯示,少弱精子癥患者經(jīng)精液冷凍保存后結(jié)合新鮮精液行IUI,處理后前向活動精子總數(shù)達(dá)到20×106以上,明顯高于未凍存精液的少弱精子癥患者,說明通過精液冷凍保存,可以增加患者PTMS,尤其是前向活動精子總數(shù),滿足開展IUI技術(shù)的要求。組3生化妊娠率最高,但臨床妊娠率低于組1,推測精液冷凍過程中是否會對精子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響,雖然可以使卵子受精并著床,促使滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌hCG,卻無法維持胚胎著床后的繼續(xù)發(fā)育。未凍存精液的少弱精子癥患者臨床妊娠率不足10%。經(jīng)精液冷凍保存后結(jié)合新鮮精液行IUI的少弱精子癥患者臨床妊娠率高于未凍存者,與精液正常患者臨床妊娠率接近,但差異無顯著性(P>0.05)。因此通過精