新生兒溶血病檢測(cè)作規(guī)程

第第頁(yè)新生兒溶血病檢測(cè)操作規(guī)程一、項(xiàng)目名稱、檢驗(yàn)方法名稱1．項(xiàng)目名稱：新生兒溶血病檢測(cè)（包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)、游離試驗(yàn)和放散試驗(yàn)三項(xiàng)）2．檢驗(yàn)方法名稱：柱凝集二、方法學(xué)原理該試劑卡是基于柱凝集的原理而設(shè)計(jì)。正常具有抗原的人紅細(xì)胞將與相應(yīng)的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，BioVue血型診斷試劑卡的微柱中含有玻璃珠介質(zhì)和試劑。加入紅細(xì)胞并將試劑卡離心后，發(fā)生凝集的紅細(xì)胞會(huì)被阻擋在玻璃珠的上面，而未凝集的游離紅細(xì)胞則會(huì)在離心力的作用下通過(guò)玻璃珠之間的間隙到達(dá)微柱的底部。三、試劑卡品牌、代號(hào)、包裝規(guī)格、內(nèi)含物1．試劑卡品牌：美國(guó)強(qiáng)生奧索2．代號(hào)：BioVue－polyCassettes3．包裝規(guī)格： 400卡/箱試劑卡(707300);100卡/箱試劑卡(707350)4．試劑成分： 抗人球蛋白(lgG,C3b/C3d)檢測(cè)卡有6根微柱組成，每一柱中含有緩沖液，其成分為牛血清蛋白，大分子增強(qiáng)劑以及0.1％疊氮鈉，0.01M的EDTA. 成分描述第1～6柱：抗人球蛋白、抗-lgG、-C3d;多特異性抗－lgG(兔)抗－C3b(鼠單克隆)(克隆F7G3)抗－C3d(鼠單克隆)(克隆C4C7)FD＆C1＃藍(lán)色染料FD＆C5＃黃色染料5．試劑的儲(chǔ)存與效期：儲(chǔ)存條件：2～25℃環(huán)境保存。請(qǐng)勿將試劑存放在自動(dòng)除霜的冰箱中，也不要冷凍保存。并且不要放在離熱源（如孵育箱、輻射器、大型設(shè)備、冰箱、冰柜等）很近或陽(yáng)光直射的地方。效期：試劑盒上有記載四、儀器品牌、型號(hào)BioVue專用離心機(jī)；BioVue專用孵育器五、樣本的采集與準(zhǔn)備：在采集標(biāo)本前對(duì)病人/獻(xiàn)血者無(wú)特殊要求。含有或不含有抗凝劑的標(biāo)本均可使用。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)。如果實(shí)驗(yàn)不能立即進(jìn)行，應(yīng)將標(biāo)本置于2－8℃保存。六、試劑準(zhǔn)備：抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)檢測(cè)卡為即用型產(chǎn)品。試劑卡應(yīng)在鋁箔開啟后一小時(shí)內(nèi)使用。試劑卡經(jīng)過(guò)運(yùn)輸顛簸后，需倒置一下，然后重新離心以備用。請(qǐng)勿使用有氣泡的，有斷層的，液面在玻璃珠以下的試劑卡。七、具體操作步驟離心新生兒血漿樣本（3000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘），將血漿全部吸出，用于做游離抗體檢測(cè)；壓積細(xì)胞用于做放散試驗(yàn)；將壓積細(xì)胞打散，然后用生理鹽水將細(xì)胞洗滌三遍，最后用等量的生理鹽水懸浮壓積紅細(xì)胞，制成新生兒紅細(xì)胞懸液（濃度為50%）備用；熱放散液制備：將新生兒紅細(xì)胞懸液置于56℃水浴箱中加熱放散，輕搖1分鐘混勻細(xì)胞后，加蓋置水浴中9分鐘，迅速以3000轉(zhuǎn)/分（即1000g的離心力）離心3分鐘，取上清，即為放散液；直接抗人球蛋白試驗(yàn)：取20ul新生兒壓積紅細(xì)胞，加1ml生理鹽水混勻，制成1.5%的紅細(xì)胞懸液；取AHG卡，在一孔中加入1.5%的紅細(xì)胞懸液20ul；離心5分鐘，判定結(jié)果；注意：DAT陰性，不一定意味著紅細(xì)胞上沒有吸附抗體，放散試驗(yàn)依然要做。游離試驗(yàn)和放散試驗(yàn)：目的：檢測(cè)血漿中的游離抗體和放散液中的抗體；材料：濃度為1.5%的標(biāo)準(zhǔn)A、B、O紅細(xì)胞懸液；AHG卡；取AHG卡一張，依次加入以下物質(zhì)：123456Bliss液50ulBliss液50ulBliss液50ulBliss液50ulBliss液50ulBliss液50ulA細(xì)胞20ulB細(xì)胞20ulO細(xì)胞20ulA細(xì)胞20ulB細(xì)胞20ulO細(xì)胞20ul血漿40ul血漿40ul血漿40ul放散液40ul放散液40ul放散液40ul將卡置于孵育器中37℃孵育10分鐘。離心5分鐘。讀取并記錄反應(yīng)強(qiáng)度。BioVue結(jié)果判讀：陽(yáng)性結(jié)果（＋）：紅細(xì)胞凝集為陽(yáng)性結(jié)果，表明紅細(xì)胞表面存在相應(yīng)的抗原。無(wú)論是否發(fā)生凝集，溶血的存在視為陽(yáng)性結(jié)果陰性結(jié)果（－）：無(wú)溶血及紅細(xì)胞未凝集是陰性結(jié)果，表明紅細(xì)胞表面不存在相應(yīng)抗原溶血會(huì)導(dǎo)致玻璃珠上方呈淺粉色或紅色。部分溶血時(shí)，有可能出現(xiàn)或沒有凝集存在4＋反應(yīng)：紅細(xì)胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一個(gè)環(huán)形帶3＋反應(yīng)：發(fā)生凝集的大部分紅細(xì)胞停留在玻璃珠床的上半部分2＋反應(yīng)：發(fā)生凝集的紅細(xì)胞分布于整個(gè)玻璃珠床，柱的底部有少量的細(xì)胞1＋反應(yīng)：大部分凝集的紅細(xì)胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量的細(xì)胞0.5＋反應(yīng)：大部分凝集的紅細(xì)胞穿過(guò)玻璃珠，在柱的底部形成一個(gè)間斷的（不平整的）紅細(xì)胞聚集帶，聚集帶上方有少量凝集的紅細(xì)胞0陰性：所有紅細(xì)胞均穿過(guò)玻璃珠，在柱的底部形成一個(gè)平整的紅細(xì)胞聚集帶八、操作注意事項(xiàng)1.不適宜的存儲(chǔ)條件可能會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量。注意：每個(gè)試劑盒卡的架子外面都貼有一個(gè)圓形的溫控指示點(diǎn)，如指示點(diǎn)圓圈內(nèi)為藍(lán)色，說(shuō)明試劑卡曾被暴露在可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的溫度環(huán)境中。使用這些試劑卡時(shí)可能出現(xiàn)假陰性的檢測(cè)結(jié)果。請(qǐng)勿使用這樣的試劑卡。2.請(qǐng)勿使用超過(guò)效期的試劑卡。3.卡中液體試劑的冷凍或蒸發(fā)都有可能影響未凝集紅細(xì)胞通過(guò)玻璃珠而到達(dá)微柱的底部。4.請(qǐng)勿使用表面破損的試劑卡或微柱內(nèi)試劑液面低于玻璃珠介質(zhì)或褪色的試劑卡。5.不恰當(dāng)?shù)氖褂脝⒎庋b置或?qū)⒉逵袉⒎庋b置的試劑卡墜落會(huì)在加樣時(shí)引起交叉污染。6.不恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)操作會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果，具體可能的原因如下：未使用本規(guī)程中推薦的紅細(xì)胞濃度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的輔助材料發(fā)生微生物污染。使用了含有某種特殊成份的標(biāo)本（阻礙了紅細(xì)胞自由穿過(guò)微柱中的介質(zhì)）。采