熱喘平口服液對實驗性哮喘豚鼠平喘的影響

熱喘平口服液對實驗性哮喘豚鼠平喘的影響

選擇并提取臨床治療兒童早期的熱哮喘好療效的處方，并對豚鼠實驗進行研究，以闡明熱哮喘平口服的哮喘機制。1實驗材料和方法1.1實驗材料1.1.1動物50只清潔級封閉群幼齡雄性豚鼠體質(zhì)量250～300g,購自西安交通大學(xué)實驗動物中心,合格證號(2010)第17號。1.1.2中藥小劑量組2222222222222222222222222222222222222222222222222222222221的藥物分組卵白蛋白;熱喘平口服液由炙麻黃、黃芩、瓜蔞、桃仁、葶藶子、生甘草組成,用藥比例按2∶2∶2∶2∶2∶1(中藥小劑量組每毫升含生藥0.5g、中藥大劑量組每毫升含生藥1g),由陜西中醫(yī)學(xué)院藥物研究所提供;20%烏拉坦;IFN-γ試劑盒(批號20100411)、IL-4試劑盒(批號20100315)均購自西安永屹生物技術(shù)有限公司。1.1.3儀器402型超聲霧化器、高速冷凍離心機、自動酶標儀、電子秤、數(shù)顯恒溫水浴箱、豚鼠固定臺、注射器、灌胃針、燒杯、微量移液器等。1.2實驗方法1.2.1各組實驗動物分組取50只清潔級封閉群體質(zhì)量250～300g幼齡雄性豚鼠,隨機分成5組,每組10只,即模型組、中藥小劑量組、中藥大劑量組、地塞米松組、正常對照組。1.2.2各組大鼠單次給藥和大鼠灌胃造模采用文獻方法并加以改進。在實驗第1d,以卵白蛋白致敏和攻擊復(fù)制哮喘模型。對模型組、中藥大劑量組、中藥小劑量組、地塞米松組豚鼠分別采用腹腔注射10%卵白蛋白1mL致敏,正常對照組以生理鹽水1mL腹腔注射。自注射第15d起將模型組、中藥小劑量組、中藥大劑量組、地塞米松組豚鼠逐個置于霧化儀動物箱中,噴入1%卵白蛋白溶液超聲霧化15～20s(與文獻報道不一致),激發(fā)致哮喘發(fā)作,出現(xiàn)煩躁不安、呼吸急促、點頭、身體顫抖及伏地現(xiàn)象,提示造模成功。每天2次,連續(xù)5d。正常對照組每日2次以生理鹽水霧化代替卵白蛋白激發(fā)。第20d起予中藥小劑量組、中藥大劑量組、地塞米松組豚鼠灌胃給藥,每次3mL,每日2次[中藥小劑量組10g/(kg·d)相當于生藥3g/d、中藥大劑量組20g/(kg·d)相當于生藥6g/d、地塞米松組3.5mg/(kg·d)即給地塞米松片混懸液1mg/d]。正常對照組和模型組每日2次均用3mL生理鹽水灌胃。各組共灌胃7d。正常對照組以生理鹽水代替。各組除施加以上藥物因素處理外,其日常飼養(yǎng)方法均相同,可以自由進食常規(guī)豚鼠飼料和水。1.2.3皮膚消毒和回吸率測定末次給藥后2h,稱體質(zhì)量,用20%烏拉坦6mL/kg腹腔注射,麻醉成功后,常規(guī)消毒,沿頸正中線剪開皮膚,鈍性分離,游離氣管,打開胸腔,分離左右支氣管,結(jié)扎右支氣管,在第二、三軟骨環(huán)間剪一小口,將5號頭皮針剪去針頭以注射管插進0.5～1.0cm,以0號手術(shù)線結(jié)扎固定,連接注射器,用37℃生理鹽水反復(fù)灌洗3次,每次10mL,回吸率平均在80%,收集肺泡灌洗液后待測,最后斷頭處死豚鼠。1.3設(shè)計模型的建立實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,成組設(shè)計用t檢驗,多個樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。所有數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理。2各組大鼠血清中ifn-、il-4、fn-的比較從實驗結(jié)果看,模型組與正常對照組相比IFN-γ顯著降低(P<0.01),IL-4顯著升高(P<0.01),說明造模成功。與模型組相比,中藥大劑量組、中藥小劑量組、地塞米松組IFN-γ顯著升高(P<0.05或P<0.01),IL-4降低(P<0.05或P<0.01)說明地塞米松和熱喘平口服液對哮喘豚鼠均有顯著療效。與地塞米松組相比,中藥大劑量組IFN-γ及IL-4含量均無顯著差異(P>0.05),說明大劑量熱喘平口服液與地塞米松療效相當。見表1。3熱感冒作用機制因感受外邪,肺失宣肅,肺氣不利,引動伏痰,痰氣交阻,痰隨氣升,氣因痰阻,相互搏結(jié),阻塞氣道,肺管因而狹窄,使氣機升降不利,痰瘀互結(jié)肺中而發(fā)哮喘。小兒為“純陽之體”,感受外邪易從熱化,所以臨床以實熱證居多。熱喘平口服液由炙麻黃、黃芩、瓜蔞、桃仁、葶藶子、生甘草組成。方中炙麻黃辛、苦,發(fā)汗解表,宣肺平喘而消除氣道炎癥、暢通氣道,為君藥。黃芩苦、寒,燥濕解毒,善清肺熱;瓜蔞甘、寒,清熱、化痰、止咳,與黃芩共為臣藥。葶藶子辛、苦,瀉肺平喘,行水消腫,促進氣道分泌物排出;桃仁苦、甘,活血化瘀,止咳平喘,與葶藶子合用使氣滯血瘀消除,肺氣暢利,二者共為佐藥。此外葶藶子降氣平喘,而麻黃宣肺平喘,一宣一降,促使肺氣通暢。甘草補脾益氣,祛痰止咳,清熱解毒,調(diào)和諸藥,為使藥。全方清熱化痰,活血祛瘀,降氣平喘?，F(xiàn)代藥理研究表明,麻黃所含的麻黃堿、偽麻黃堿及麻黃揮發(fā)油是其平喘的有效成分。黃芩有較好的抑制變態(tài)反應(yīng)作用,其所含黃芩素對支氣管過敏性收縮及過敏性氣喘均有緩解作用,并與麻黃堿有協(xié)同作用。瓜蔞有提高耐缺氧能力、抗菌、祛痰等多種作用。葶藶子有止咳平喘、抗菌作用。桃仁有平喘、鎮(zhèn)咳作用。甘草有明顯的鎮(zhèn)咳祛痰、抗炎、抗過敏作用,能保護發(fā)炎的咽喉和氣管黏膜,防治哮喘。哮喘的本質(zhì)是氣道慢性炎癥,其中Th1/Th2失衡起著重要作用。IFN-γ對Th1/Th2細胞有平衡作用,對氣道嗜酸性粒細胞浸潤具有抑制作用,可降低血漿IgE水平,降低氣道高反應(yīng)性,對抗原呈遞細胞具有調(diào)節(jié)作用,在氣道重塑中可抑制人的支氣管上皮細胞增殖。IL-4是Th2細胞分泌的特征性細胞因子,在細胞因子網(wǎng)絡(luò)中居于中心地位。IL-4可以提高B淋巴細胞和單核/巨噬細胞CD23的表達及合成,可促進B細胞的分泌、調(diào)控IgE的合成、活化巨噬細胞分泌炎性因子參與氣道炎癥的形成。實驗結(jié)果顯示,熱喘平口服液