重度宮腔粘連分離術(shù)后薄型子宮內(nèi)膜之干細(xì)胞治療

重度宮腔粘連分離術(shù)后薄型子宮

內(nèi)膜之干細(xì)胞治療

overview在輔助生殖技術(shù)中，薄型子宮內(nèi)膜是指子宮內(nèi)膜厚度不

足以支持胚胎著床及臨床妊娠目前，國(guó)際上對(duì)薄型子宮內(nèi)膜的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚未統(tǒng)一，最

新的一項(xiàng)Meta分析認(rèn)為子宮內(nèi)膜厚度超過(guò)7mm的患者

妊娠率明顯高于不足7mm者（Mazdak

Momeni，2011）重度宮腔粘連是導(dǎo)致薄型子宮內(nèi)膜的重要原因之一臨床對(duì)薄型子宮內(nèi)膜治療的方式較多：藥物、搔刮刺激、

宮腔內(nèi)注射粒細(xì)胞集落刺激因子、電生理刺激

。。。。。。但總體治療效果欠佳！

overview干細(xì)胞具有多向分化和自我更新的潛能具有廣闊的發(fā)展

前景很多研究顯示干細(xì)胞可誘導(dǎo)向子宮內(nèi)膜細(xì)胞定向分化，

促進(jìn)子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)，治療薄型子宮內(nèi)膜，包括：骨髓間質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）子宮內(nèi)膜干細(xì)胞（EDSCs）人胚胎干細(xì)胞（hESCs）人臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞（WJ-MSCs）。。。。。。

overview子宮內(nèi)膜中干細(xì)胞具有高度增殖、分化潛能以及較低的

免疫源性，但是直接獲取子宮內(nèi)膜具有一定的侵入性月經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞(menstrual

blood-derived

mesenchymal

stem

cells,

MenSCs)[1]從經(jīng)血獲得MenSCs不具有侵入性，不會(huì)對(duì)供者造成傷

害,

且來(lái)源廣泛[1][1]1Meng

X,

et

al.,

Endometrial

regenerative

cells:

a

novel

stem

cell

population2007;

5:57overview

每個(gè)月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜快速的修復(fù)與重建與

高度增值和快速血管生成的MenSCs有關(guān)a

ba

超聲下月經(jīng)期子宮內(nèi)膜薄

3.8mm；

b

超聲下排卵期子宮內(nèi)膜厚

11.2mm

overview與BMSC相比，MenSCs具有以下特征：

1）更快的增殖速率；2）不表達(dá)STRO-1；3）表達(dá)胚胎干細(xì)胞多能性標(biāo)記物OCT-4；4）高表達(dá)MMP。能夠分化為三胚層組織，故也稱(chēng)之為子宮內(nèi)膜再生細(xì)胞

（Endometrial

Regenerative

Cells，ERCs)

［1］研究顯示與BMSCs相比，ERCs高表達(dá)血管生成因子，如

PDGF、EGF、VEGF和MMP，所以更適合再生醫(yī)學(xué)[2]。[1]Meng

X,

et

al.,

Endometrial

regenerative

cells:

a

novel

stem

cell

population2007;

5:57

[2]Bockeria

L,

et

al..

Endometrial

regenerative

cells

for

treatment

of

heart

failure:

a

new

stem

cell

enters

the

clinic.

J

Transl

Med

2013.overview在I期臨床實(shí)驗(yàn)中

靜脈和鞘內(nèi)注射EnSCs治療4例多發(fā)性硬化患者未發(fā)現(xiàn)

免疫反應(yīng)和毒副反應(yīng)[1]。

肌肉注射EnSCs治療杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良患者，未發(fā)現(xiàn)毒副

反應(yīng)，并且增強(qiáng)了肌張力和減少呼吸道感染[2]。靜脈注射EnSCs治療充血性心力衰竭的患者，增加了射

血分?jǐn)?shù)，減少利尿鈉肽數(shù)值，降低心衰評(píng)分[3]。美國(guó)Medistem團(tuán)隊(duì)正在致力于II期臨床實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)EnSCs

治療心衰患者的潛能[4]。[1]

Zhong

Z,et

al.2009；

[2]

Ichim

TE,et

al.,2010；[3]

Ichim

TE,

et

al.,2010；

[4]

Bockeria

L

et

al.,2013。我們中心的研究原代培養(yǎng)正常MenSCs24h、72h、7d、14d可見(jiàn)細(xì)胞克隆樣生長(zhǎng)我們中心的研究MenSCs倍增24次沒(méi)有發(fā)生染色體畸變a

MenSCs倍增24次細(xì)胞染色體核型分析示正常；b原代培養(yǎng)和傳第4代凍存前后的細(xì)胞

生長(zhǎng)曲線(xiàn)我們中心的研究MenSCs

標(biāo)記物

OCT4、STRO-1、CD45、HLA-DR的免疫細(xì)胞化學(xué)和流式分析平（A：a、b：誘導(dǎo)前我們中心的研究MenSCs體外誘導(dǎo)分化后RT-PCR及Westernblot檢測(cè)CK、VIMmRNA及蛋白表達(dá)水MenSCs免疫細(xì)胞化學(xué)可染色以；誘c、導(dǎo)分化子宮內(nèi)膜細(xì)胞

d：誘導(dǎo)后免疫細(xì)胞化學(xué)染色；e：免疫細(xì)胞化學(xué)評(píng)分；B：RT-PCR檢測(cè)CK、VIM

mRNA的相對(duì)表達(dá)量C：Wetsern

blot檢測(cè)CK、VIM

蛋白的相對(duì)表達(dá)量）肪組織內(nèi)見(jiàn)散在腺色未見(jiàn)脂肪組織內(nèi)MenSCs體樣結(jié)構(gòu)；B：HE可染

以在NOD/SCID小鼠體內(nèi)

重建子宮內(nèi)膜組織我們中心的研究MenSCs皮下移植后

重建子宮內(nèi)膜組織

的HE及免疫組化分

析。A：HE染色見(jiàn)脂見(jiàn)散在腺體樣結(jié)構(gòu)；

C、D：空白對(duì)照；E：

CK強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；F：

VIM弱表達(dá)；G：

CD31強(qiáng)表達(dá)；H：ER

幾乎不表達(dá)；I：PR

中等強(qiáng)度表達(dá)；J：

使用孕激素處理后

ER強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。

（A×4，B-H×20）我們中心的研究IUA子宮內(nèi)膜干細(xì)胞嚴(yán)重減少?。。∥覀冎行牡难芯縈enSCs治療前4.9mm，治療后12.4mm我們中心的研究患者編號(hào)年齡治療前內(nèi)膜厚度（mm)治療后內(nèi)膜厚度

(mm)1413.672385.4733547.54364.79.95435.112.4平均子宮內(nèi)膜厚

度4.56±0.758.76±2.36p0.014自體MenSCs治療前后子宮內(nèi)膜厚度變化,

p<0.05MenSCs可以促進(jìn)大鼠模型薄型子宮內(nèi)膜

生長(zhǎng)，并恢復(fù)生殖能力我們中心的研究ab

cd

ea

、b

雙側(cè)宮角造IUA模型，

左側(cè)宮角移植干細(xì)胞，右側(cè)宮角未移植干

細(xì)胞，左側(cè)宮角孕見(jiàn)胚囊，右側(cè)宮角萎縮無(wú)胚囊c

左側(cè)宮角造IUA模型移植干細(xì)胞，右側(cè)宮角未做手術(shù)，雙側(cè)胚囊數(shù)相同

d

造模后未移植干細(xì)胞宮腔內(nèi)膜病理；e

造模后移植干細(xì)胞宮腔內(nèi)膜病理未孕Provincial

Hospital）內(nèi)源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞

G-CSF編號(hào)年齡治療前EM厚度(mm)/

形態(tài)治療后EM厚度

（mm)/形態(tài)妊娠結(jié)Anhui局1457A+8.6A未孕(2016.10-2017.8)2328456.9A+11.5A8.5A8.5A+妊娠4265.8A+7.6A+未孕妊娠5448.3A單層3.4（宮腔全層極

少量積液，憩室積液6730397.8A+6.1B8.4A+8.5A妊娠8415.7C8.2B未孕94410.2A9.7A未孕10316.8A+7.1A+未孕11395.5C7.0A+未孕12358.4C7.9A妊娠13395.7A+6.8A妊娠14287.5B8.0A+妊娠15296.9A+6.8A+未孕16318.9A6.9A未孕17389.9C9.7B未孕總?cè)崖?35.3%未孕娠

6/17=<40歲妊娠率=6/12=50%編號(hào)年齡治療前子宮內(nèi)膜厚度/形態(tài)治療后子宮內(nèi)膜厚度/形態(tài)Anhui

Provincial妊娠結(jié)局1457.0

A+8.6

A未孕2286.9

A+8.5

A妊娠4265.8

A+7.6

A+妊娠7396.1

B8.5

A未孕8415.7

C8.2

B未孕10316.8

A+7.1

A+未孕11395.5

C7.0

A+妊娠13395.7

A+6.8

A妊娠15296.9

A+6.8

A+未孕平均EM厚度6.27±0.627.68±0.78p0.00066412<0.01妊娠率總?cè)焉锫剩?/9=44.4%；

<40歲妊娠率：4/7=57.1%G-CSF治療薄型子宮內(nèi)膜后數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)Hospital

G-CSF作用機(jī)制有研究認(rèn)為G-CSF可能是通過(guò)自分泌或旁分泌方式促進(jìn)

間質(zhì)細(xì)胞分化和內(nèi)膜蛻膜化，而不是通過(guò)釋放入外周血

中發(fā)揮作用[1]。Zhao等

[2]

研究發(fā)現(xiàn)，G-CSF能夠誘導(dǎo)損傷部位的干細(xì)

胞定向分化，促進(jìn)薄型子宮內(nèi)膜大鼠模型的子宮內(nèi)膜生

長(zhǎng)。[1]

Tanaka

T，et

al．GynecolEndocrinol，2000,14(6):399-404.

[2]

Zhao

J，et

al.

PLoS

One,2013,8(12):e82375.G-CSF作用機(jī)制

體外實(shí)驗(yàn)表明G-CSF通過(guò)促進(jìn)胚胎種植有關(guān)的標(biāo)志物（G-

CSF受體、整合素α?β3、纖溶酶原激活物尿激酶受體、胸

苷磷酸化酶、CD40及其配體等）mRNA的表達(dá)，重塑子

宮內(nèi)膜血管、調(diào)節(jié)局部免疫和細(xì)胞粘附等機(jī)制影響內(nèi)膜基

因表達(dá)[1]。G-CSF可促進(jìn)早期胚胎發(fā)育和提高胚胎種植潛能，現(xiàn)已有

商業(yè)化含G-CSF的胚胎培養(yǎng)液用于培養(yǎng)人類(lèi)胚胎[2],也為

G-CSF治療薄型子宮內(nèi)膜的安全性提供佐證。[1]

Rahmafi

M，et

a1．PLoSOne，2014，9(9)：e102286．[2]