雙串聯(lián)質(zhì)譜法測定醬油中3,2-丙二醇

雙串聯(lián)質(zhì)譜法測定醬油中3,2-丙二醇

隨著人們對口感需求的顯著增加，近年來油壓機(jī)的發(fā)展趨勢發(fā)生了很大變化。水解植物蛋白被應(yīng)用于醬油工業(yè)提高了產(chǎn)量,降低了成本,但也引入了有害物質(zhì)氯丙醇,它會(huì)引起肝、腎臟、甲狀腺等的癌變、并會(huì)影響生育。盡管我國已實(shí)行最高殘留限量(MRL),但目前沒有與其配套的國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法。本文報(bào)道調(diào)味品中氯丙醇的兩種檢測方法,衍生化氣相色譜/電子捕獲檢測法(GC/ECD)測定醬油中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD);氣相色譜/雙串聯(lián)質(zhì)譜法(GC/MS/MS)同時(shí)測定醬油中1,3-二氯-2-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇和3-氯-1,2-丙二醇。以上兩個(gè)方法快速、準(zhǔn)確、有效,并達(dá)到了國內(nèi)外先進(jìn)水平。1實(shí)驗(yàn)部分1.1gc-ecd檢測方法1.1.1冷卻、冷卻正己烷、無水乙醚、乙酸乙酯(重蒸餾);正己烷-無水乙醚:9+1;七氟丁酰咪唑(東京化成);無水硫酸鈉:650℃灼燒4h,冷卻后存于密封容器中備用;硅藻土:Extrelut;20%氯化鈉溶液;3-氯-1,2-丙二醇貯備液:稱取3-氯-1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品(Merck,≥99%):0.100g于100mL的容量瓶,用乙酸乙酯定容至刻度,搖勻,此溶液含量為1000mg/L。除另有規(guī)定外,所有試劑為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。1.1.2吹氮濃縮器或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀HP6890氣相色譜儀,帶電子捕獲檢測器;吹氮濃縮器或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;混勻器;離心機(jī);玻璃層析柱:20×2.5cmi.d.,帶可調(diào)活塞。1.1.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制(1)試樣制備:稱取5g液體試樣(醬油、酸水解植物蛋白調(diào)味液、其他調(diào)味液等,精確至0.001g)于100mL燒杯中,加入5g硅藻土,充分?jǐn)嚢杈鶆?。裝入已依次充填1cm高的無水硫酸鈉和5g硅藻土的玻璃層析柱中,壓實(shí),再填入1cm高的無水硫酸鈉;稱取5g固體試樣、半固體試樣(醬油粉、酸水解植物蛋白調(diào)味粉、其他調(diào)味粉、調(diào)味醬等,精確至0.001g)試樣于100mL燒杯中,加入5.0mL水,攪拌成漿狀。以下步驟按液體試樣操作。(2)提取:用正己烷-無水乙醚(90+10)80mL淋洗制備好的試樣,淋洗速度約為3mL/min,棄去最初淋洗液。然后用無水乙醚洗脫,洗脫速度約3mL/min。收集150mL洗脫液于250mL圓底燒瓶中,在40℃下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或吹氮濃縮至近干(切勿蒸干),用正己烷移入10mL具塞比色管中,并定容至5mL。(3)衍生:在上述正已烷溶液中加入50μL七氟丁酰咪唑,密封、充分振搖1min,70℃恒溫30min后,冷卻至室溫。加水3mL,密封、充分振蕩1min,靜置20min或離心3min。用移液管將水層吸出后,重復(fù)加水3mL、震蕩、靜置或離心操作。將上層正己烷溶液移入2mL樣品瓶中,加入約300mg無水硫酸鈉,密封、充分振蕩1min,靜置后供氣相色譜分析。(4)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:用正己烷將3-氯-1,2-丙二醇貯備液稀釋配成濃度為0.00、0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00μg/mL的工作液。各取5mL于10mL比色管中按衍生方法操作。(5)色譜測定:HP-PAS-5(30m×0.32mm×0.25μm)色譜柱;柱溫:50℃?→??5℃/min100℃(1min)?→???30℃/min280℃(3min)50℃→5℃/min100℃(1min)→30℃/min280℃(3min);進(jìn)樣口溫度:260℃;檢測器溫度:300℃;進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣體積:1μL;載氣:高純氮,純度大于99.99%,3.0mL/min。將衍生后的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣1μL。以峰面積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度為橫坐標(biāo),繪制工作曲線或計(jì)算回歸方程。待測樣液等體積1μL進(jìn)樣測定。在上述色譜條件下,3-氯-1,2-丙二醇的保留時(shí)間為11min左右。其標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜圖見圖1。1.2氯丙醇的制備1.2.1主要儀器及試劑FinniganGCQ氣質(zhì)聯(lián)用儀;A200S自動(dòng)進(jìn)樣器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。無水硫酸鈉、正己烷、無水乙醚、乙酸乙酯(分析純);三氟乙酸酐(東京化成);1,3-二氯-2-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇和3-氯-1,2-丙二醇(Merck);ExtrelutNT(Merck)。1.2.2分析步驟(1)試樣制備:同前1.1.3。(2)提取:于20×1.5cm玻璃層析柱中依次裝入1cm高的無水硫酸鈉,8gExtrelutNT填料。稱取2.5g樣品于100mL燒杯中,加入5gExtrelutNT填料,攪勻,使之充分吸附,裝入柱中,壓實(shí),再填入1cm高的無水硫酸鈉,用150mL正己烷-乙醚(1+1)淋洗,流速為1mL/min,洗脫液收集于200mL的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中,45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干(切勿蒸干)。(3)衍生:將濃縮液轉(zhuǎn)移至15mL帶塞離心管中,用正己烷定容至1mL,加入50μL三氟乙酸酐,振蕩1min,室溫下放置30min,加入3mL蒸餾水振蕩1min,于3000r/min下離心3min后,取上清液進(jìn)樣分析。(4)標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別準(zhǔn)確稱取氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)品各0.100g,1,3-DCP和2,3-DCP用正己烷配成濃度為1000mg/L的儲(chǔ)備液,3-MCPD用乙酸乙酯配成濃度為1000mg/L的儲(chǔ)備液,用正己烷配成濃度各為0.01、0.05、0.1、0.5、1.0的混合工作液。同以上步驟進(jìn)行衍生.(5)色譜條件:DB5-MS,30cm×0.32mm×0.25μm色譜柱,柱溫:70℃?→??2℃/min100℃(1min)?→???30℃/min280℃(3min)70℃→2℃/min100℃(1min)→30℃/min280℃(3min),進(jìn)樣口溫度:280℃,進(jìn)樣體積:1μL,進(jìn)樣方式:無分流進(jìn)樣,載氣(He):線速度:35cm/s.(6)質(zhì)譜條件:離子源溫度(EI):200℃,傳輸線溫度:275℃,掃描方式:Double-SRM(MS/MS),激發(fā)能量:0.75eV,母離子:175m/z、153m/z,采集范圍:45~175m/z,定量離子:1,3-DCP:175m/z,2,3-DCP、3-MCPD:153m/z。2結(jié)果與討論2.1由于ced法的實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化2.1.1最佳吸附劑的確定用不同吸附劑硅膠、硅藻土和ExtrelutNT篩選實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,選用ExtrelutNT吸附劑最佳,其活性適中、穩(wěn)定,可除去醬油等調(diào)味品中的色素、水分和其它雜質(zhì)。用正己烷、乙醚、正己烷-乙醚(9+1)、乙酸乙酯做洗脫試驗(yàn),從回收率及凈化效果來看,采用30mL正己烷-乙醚(9+1)洗去極性較小的雜質(zhì),再用100mL無水乙醚將3-氯-1,2-丙二醇洗脫下來,洗脫效果最佳。2.1.2gc/ecd法的線性范圍七氟丁酰咪唑是極好的丁?；噭?能在溫和的條件下將3-氯-1,2-丙二醇中的活性基團(tuán)羥基鈍化反應(yīng)生成具較好穩(wěn)定性、良好揮發(fā)性和強(qiáng)電負(fù)性的衍生物,參考文獻(xiàn)中介紹的衍生溫度和時(shí)間(70℃下,反應(yīng)30min),結(jié)果滿意。GC/ECD法在0.005~2.0μg范圍內(nèi)線性良好。3-氯-1,2-丙二醇線性方程為Y=12721.25X+1845.18,r=0.99993。取三種3-氯-1,2-丙二醇含量不同的樣品按本法操作,其回收率為91%~104%,變異系數(shù)為2.27%~7.96%,方法的檢出限為0.01mg/kg。2.2ms模式選擇2.2.1洗脫液的制備選用正己烷-乙醚(1+1)試劑洗脫不用預(yù)淋洗,直接收集洗脫液,方法簡便,效果理想。選用三氟乙酸酐作為衍生化試劑也可達(dá)道理想效果,且價(jià)格便宜、易得。2.2.2-dcp-mcpd的質(zhì)譜表征三種氯丙醇的TFAA衍生化物在上述的分析條件下的保留時(shí)間分別為9.33min,10.11min和10.20min,其總離子色譜圖見圖2。1,3-二氯-2-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇和3-氯-1,2-丙二醇的TFAA衍生物的全掃描后;分別以175m/z為1,3-DCP的母離子、153m/z為2,3-DCP和3-MCPD的母離子,由其產(chǎn)生的二級質(zhì)譜。在0.01~1.0μg范圍內(nèi),測得三者的線性方程和相關(guān)系數(shù)分別為:1,3-DCP:y=59086x