實驗五、無菌操作及接種技術

實驗七

無菌操作及接種技術

一、微生物接種技術一）、實驗目的

學習微生物接種工具的使用，掌握無菌操作方法，建立有菌概念。二）、實驗原理無菌技術：指在微生物實驗工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關措施。接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程。三）實驗用品

四）實驗步驟：1、接種工具的介紹接種環(huán)、接種鉤、接種針、接種圈、接種鋤、玻璃涂棒、其他接種工具2、超凈工作臺超凈工作臺是為實驗室工作提供無菌操作環(huán)境的設施，以保護實驗免受外部環(huán)境的影響，同時為外部環(huán)境提供某些程度的保護以防污染并保護操作者。原理：超凈工作臺的潔凈環(huán)境是在特定的空間內(nèi)，潔凈空氣(進濾空氣)按設定的方向流動而形成的。以氣流方向來分，現(xiàn)有的超凈工作臺可分為垂直式，由內(nèi)向外式以及側(cè)向式。垂直流超凈工作臺水平流超凈工作臺垂直流超凈工作臺超凈臺的使用與維護風速保持在0.32-0.48米/秒使用前打開紫外燈照射40~60min開啟超凈工作臺工作電源，關閉紫外燈，并用75%的酒精或0.5%過氧乙酸噴灑擦拭消毒工作臺面。使用中，有機玻璃罩受到污染，嚴禁用酒精棉球擦拭，請用含水棉布檫拭；請保持超凈臺整潔、干燥，不要堆積雜物；使用完畢，關閉煤氣開關或酒精燈；使用完畢后，用消毒液擦拭工作臺面，關閉工作電源，重新開啟紫外燈照射15min.定期做無菌試驗，以測定凈化臺是否符合無菌要求。2、無菌操作要點1）、要求建立“有菌概念”。2）、接種時要有一個潔凈的環(huán)境，整個操作過程必須在火焰旁進行。3）接種環(huán)，棉塞一定要拿在手上，不能隨便亂丟。3、微生物接種技術1）、斜面接種技術從斜面菌種將菌移接至另一斜面培養(yǎng)基的方法，叫做斜面接種。接種方法：A、接種前用酒精棉球擦凈桌面；B、將試管貼上標簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等，然后用酒精棉球擦手消毒；C、點燃酒精燈以后，在火焰旁將每一支試管內(nèi)的棉塞稍微轉(zhuǎn)一下，使其松動，以便在接種時易拔出，并將試管放在試管架上，放在接種臺的右前方；D、將菌種和斜面培養(yǎng)基的兩支試管，用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于兩試管之間的部分，斜向上，并使他們呈水平位置，也可將試管橫放在左手掌中央，用四個手指托住試管，大拇指壓在試管上，斜面向上；E、右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)的部分燒紅滅菌，環(huán)以上凡在接種可能進入試管內(nèi)的部分，均應通過火焰灼燒。（見圖4）圖4接種環(huán)滅菌以下操作，需要使管口靠近火旁F、用右手小指、無名指和手掌拔掉棉塞；G、以火焰灼燒管口，灼燒時應不斷轉(zhuǎn)動試管口，使試管口沾染的少量菌得以燒死；H、將燒過的接種環(huán)伸入菌種試管內(nèi)，先將環(huán)接觸沒有長菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻，以免燒死被接種的菌體，然后輕輕接觸菌體，取出少許，慢慢將接種環(huán)抽出試管（圖5），注意盡量不要使環(huán)的部分碰釘子到管壁，取出后不可使環(huán)通過火焰；圖5從一個試管移種到另一試管I、迅速將接種環(huán)在火焰旁伸進另一試管，在斜面培養(yǎng)基上從底部劃線到頂部，但不要把培養(yǎng)基劃破，也不要使菌種沾染管壁；J、取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將棉塞塞上，不要用試管去迎棉塞，以免試管在運到時灌入不潔的空氣，