《抗凍蛋白肽粉》

1QB/TXXXX－XXXX抗凍蛋白肽粉本文件規(guī)定了抗凍蛋白肽粉的原輔料、感官、理化、安全的要求，描述了相應(yīng)的試驗(yàn)方法，規(guī)定了生產(chǎn)加工、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存的內(nèi)容。本文件適用于抗凍蛋白肽粉的生產(chǎn)、檢驗(yàn)和銷售。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB4789.35-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)乳酸菌檢驗(yàn)GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB7718食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則GB14881食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范GB/T23527食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)蛋白酶制劑GB31645-2018食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)膠原蛋白肽3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1抗凍活性antifreezeactivity具有抑制冰晶生長(zhǎng)和重結(jié)晶的結(jié)構(gòu)和功能，以嗜熱鏈球菌冷凍存活率表示。3.2抗凍蛋白肽粉antifreezepeptidespowder以富含膠原蛋白的動(dòng)物組織（包括皮、骨、筋、腱、鱗等）為原料，經(jīng)酶解、濃縮、干燥工藝生產(chǎn)的具有抗凍活性（3.1）的膠原蛋白肽粉。4要求4.1原輔料4.1.1原料應(yīng)符合GB31645-2018的3.1規(guī)定。2QB/TXXXX－XXXX4.1.2生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。4.1.2蛋白酶制劑應(yīng)符合GB/T23527的規(guī)定。4.2感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1感官要求4.3理化指標(biāo)應(yīng)符合GB31645-2018中的表2的規(guī)定，同時(shí)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2理化指標(biāo)4.4安全指標(biāo)污染物限量與微生物限量應(yīng)符合GB31645-2018的規(guī)定。5生產(chǎn)加工過程加工操作規(guī)范應(yīng)符合GB14881的規(guī)定。6試驗(yàn)方法6.1感官要求、理化指標(biāo)和安全指標(biāo)按GB31645-2018規(guī)定的方法執(zhí)行。6.2抗凍活性按附錄A規(guī)定的方法檢測(cè)。7檢驗(yàn)規(guī)則7.1組批3QB/TXXXX－XXXX同一天或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批。7.2抽樣從每批樣品中隨機(jī)抽取不少于3個(gè)最小包裝單位樣品，用取樣工具伸入每袋的3/4處取樣，所取試樣不應(yīng)少于100g。將采取的試樣混勻，裝入清潔、干燥、帶磨口玻璃瓶中，瓶上粘貼標(biāo)簽，注明生產(chǎn)班次、產(chǎn)品類別、批號(hào)、取樣日期和地點(diǎn)。微生物檢驗(yàn)按無菌操作取樣。7.3出廠檢驗(yàn)7.3.1每批產(chǎn)品出廠，應(yīng)經(jīng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后出廠。7.3.2出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目包括：感官要求、總氮、水分和灰分。7.4型式檢驗(yàn)7.4.1正常生產(chǎn)時(shí)，每半年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)。有下列情況之一時(shí)，應(yīng)進(jìn)行型式檢驗(yàn)：a)新產(chǎn)品試制鑒定時(shí)；b)原料、設(shè)備、生產(chǎn)工藝有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時(shí)；c)產(chǎn)品停產(chǎn)三個(gè)月以上，恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；d)出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)結(jié)果有較大差異時(shí)；e)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)提出要求時(shí)。7.4.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為本文件第4章規(guī)定的所有項(xiàng)目。7.5判定規(guī)則7.5.1每批產(chǎn)品出廠，應(yīng)經(jīng)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后出廠。7.5.2檢驗(yàn)項(xiàng)目如有1～2項(xiàng)（微生物項(xiàng)目除外）不符合本文件，可從原批中加倍抽樣進(jìn)行檢驗(yàn)，復(fù)驗(yàn)結(jié)果合格則判該批產(chǎn)品合格；復(fù)驗(yàn)結(jié)果如有再次出現(xiàn)不合格項(xiàng)目，則判該批產(chǎn)品為不合格。7.5.3微生物項(xiàng)目如有1項(xiàng)或1項(xiàng)以上不符合本文件，則判該批產(chǎn)品為不合格，不得復(fù)驗(yàn)。7.5.4檢驗(yàn)項(xiàng)目有兩項(xiàng)以上不符合本文件，則判該批產(chǎn)品為不合格，不得復(fù)驗(yàn)。8標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸和貯存8.1標(biāo)簽、標(biāo)志8.1.1預(yù)包裝產(chǎn)品的標(biāo)簽應(yīng)符合GB7718的規(guī)定。8.1.2運(yùn)輸包裝上的標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。8.2包裝所用包裝材料應(yīng)潔凈、無異味，應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。8.3運(yùn)輸4QB/TXXXX－XXXX運(yùn)輸設(shè)備應(yīng)清潔、衛(wèi)生、干燥、無異味。運(yùn)輸產(chǎn)品過程中，避免日曬、雨淋，不應(yīng)與有毒、有害、有異味或影響產(chǎn)品質(zhì)量的物品混裝運(yùn)輸。8.4貯存產(chǎn)品應(yīng)貯存在通風(fēng)干燥清潔的庫(kù)房中。產(chǎn)品堆放應(yīng)有墊板，離地10cm以上，離墻20cm以上。不應(yīng)與有毒、有害、有異味的物品同處貯存。5QB/TXXXX－XXXX附錄A(規(guī)范性)抗凍蛋白肽粉抗凍活性的檢測(cè)方法(平板菌落計(jì)數(shù)法)A.1方法提要嗜熱鏈球菌對(duì)低溫敏感，冷凍過程中冰晶的機(jī)械應(yīng)力會(huì)造成菌體損傷，甚至死亡。抗凍蛋白肽粉具有抑制冰晶生長(zhǎng)和重結(jié)晶的結(jié)構(gòu)和功能，能夠提高凍融后嗜熱鏈球菌的存活率，存活率越高，說明抗凍活性越強(qiáng)。因此，抗凍蛋白肽粉的抗凍活性高低可以通過測(cè)定凍融循環(huán)后嗜熱鏈球菌的存活率高低來定量。A.2設(shè)備除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備如下：A.2.1恒溫培養(yǎng)箱36±1）℃。A.2.2高速離心機(jī)：10000r/min。A.2.3旋渦振蕩器。A.2.4恒溫水浴鍋36±1）℃。A.2.5冰箱：-20℃~4℃。A.2.6天平：感量0.01g。A.2.7電子分析天平：感量0.01g。A.2.8紫外分光光度計(jì)。A.3試劑和材料A.3.1試劑除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水。A.3.1.1MC培養(yǎng)基（ChalmersAgar）：5.0g大豆蛋白胨，3.0g牛肉浸膏，3.0g酵母浸膏，20.0g葡萄糖，20.0g乳糖，10.0g碳酸鈣，0.05g中性紅。A.3.2試劑配制121℃高壓滅菌15min~20min。A.3.2.2MC固體培養(yǎng)基：稱取60.0gMC培養(yǎng)基，20g瓊脂，加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH6.0±0.2，121℃高壓滅菌15min~20min。A.3.2.3無菌生理鹽水：稱取9g的氯化鈉（NaCl），加入1000mL蒸餾水中，溶解，121℃高壓滅菌15min~20min。A.3.3材料A.3.3.1無菌試管：18mm×180mm、15mm×100mm。A.3.3.2無菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、或微量移液器及吸頭。A.3.3.3無菌錐形瓶：50mL、500mL。A.3.3.4凍存管：1.5mL。A.3.3.5微孔濾膜：0.22μm。A.3.3.6嗜熱鏈球菌。6QB/TXXXX－XXXXA.4操作步驟A.4.1菌種活化A.4.1.1市售嗜熱鏈球菌凍干粉參照說明書進(jìn)行活化，制成嗜熱鏈菌溶液（以下簡(jiǎn)稱菌液）。A.4.1.2菌液充分混勻后，以微量移液器吸取100μL菌液置于盛有20mLMC液體培養(yǎng)基的無菌錐形瓶中，在（36±1）℃,培養(yǎng)（24±2）h。重復(fù)上述操作1次。A.4.1.3將上述菌液充分混勻后，以微量移液器吸取100μL菌液置于盛有20mLMC液體培養(yǎng)基的無菌錐形瓶中，在（36±1）℃,培養(yǎng)8h~10h。A.4.1.4將上述菌液充分混勻后，于4℃,5000r/min離心10min，收集菌泥。A.4.1.5將上述菌泥用無菌生理鹽水混勻后，于4℃,5000r/min離心10min，收集菌泥。重復(fù)上述操A.4.1.6將上述菌泥用無菌生理鹽水調(diào)節(jié)菌液至600nm波長(zhǎng)處的吸光值（OpticalDensity,ODOD600）A.4.2抗凍蛋白肽粉溶液制備稱取0.05g抗凍蛋白肽粉于9mL無菌生理鹽水中，用漩渦振蕩器溶解，用0.22μm濾膜過濾除菌。A.4.3樣品勻液制備A.4.3.1以1mL無菌吸管或微量移液器吸取OD600在1.2~1.5的菌液1mL，沿管壁緩慢注于裝有9mL生理鹽水的無菌試管中，振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成體積分?jǐn)?shù)為10%的菌液。A.4.3.2按上述操作順序，做10倍系列稀釋，制成1:105菌液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。A.4.3.3將上述菌液充分混勻后，以微量移液器吸取100μL菌液，注入到盛有900μL抗凍蛋白肽粉溶液的凍存管中，充分混勻，制成樣品勻液，將樣品勻液分成兩份，標(biāo)記為勻液A和勻液B。A.4.4菌種冷凍解凍處理A.4.4.1將上述樣品勻液A置于（-20±2）℃的冰箱冷凍處理（4±2）h后，于（36±1）℃恒溫水浴鍋中解凍（10±2）min。重復(fù)上述操作1次。A.4.4.2將上述解凍后的樣品勻液A置于-18℃及以下的冰箱冷凍（18±2）h，于（36±1）℃恒溫水浴鍋中解凍（10±2）min后進(jìn)行計(jì)數(shù)。A.4.5嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)將A.5.4.2中解凍后的樣品勻液A和A.5.3.3中的樣品勻液B按GB4789.35-2016中6.2.3.3規(guī)定的方法進(jìn)行嗜熱鏈球菌計(jì)數(shù)。A.5結(jié)果計(jì)算和表述樣品勻液中嗜熱鏈球菌的冷凍存活率按公式(A.1)計(jì)算：……