羊傳染性膿皰的診斷與防治

羊傳染性膿皰的診斷與防治

綿羊感染通常被稱為羊傷口。這是由山羊和山羊口炎病毒引起的共病。世界動物營養(yǎng)組（oie）將該疾病描述為必要的動物病，并將其分類為動物疾病。本病最早文字記載發(fā)現(xiàn)于歐州,1923年Aynaud首次證實本病病原為病毒。1957年Grey將病料接種于細胞中,成功地分離到病原。目前,世界上幾乎所有養(yǎng)羊的國家和地區(qū)都有本病存在。我國自1950年以來,先后在新疆、甘肅、青海、寧夏、四川、云南、內(nèi)蒙古、黑龍江、西藏、陜西等省(區(qū))都有本病流行的報道,養(yǎng)山羊業(yè)帶來一定的損失。1病毒粒子及傳播途徑羊傳染性膿皰是由嗜上皮的口瘡病毒(Orfvi-rus)引起的,該病毒屬于痘病毒科(Poxviridae),副痘病毒屬(Parapoxvirus),電鏡下觀察負染標本中,病毒粒子大小為200～350納米×125～175納米,外有脂類囊膜,內(nèi)有雙股DNA核心。呈橢圓形的線團樣,除橢圓形顆粒外,還有錐形、磚形以及特殊的線團樣球形顆粒該病病毒粒子。粒子表面呈特征性的編織螺旋結構—繩索樣結構相互交叉排列,圍繞病毒粒子的長軸作“8”字型纏繞,但也呈其他纏繞方式。本病幾乎分布于世界所有養(yǎng)羊國家。自然情況下主要侵害綿羊和山羊,山羊較為多發(fā),此外,駱駝、牛、鹿、麝牛、貓、幼犬、猴和人均有易感性。本病常呈群發(fā)性流行,3～6月齡羔羊最易感染,發(fā)病率可高達95.4%,成年羊發(fā)病較少,病羊和帶毒羊是本病的傳染源。病毒可隨病羊的唾液、膿皰和水皰分泌物以及脫落的痂皮排出。其傳播途徑主要是經(jīng)損傷的皮膚或黏膜而感染。健羊與病羊直接接觸,或接觸被病羊污染的飼槽、飼料、飲水、用具、墊草、牧場及廄舍等而感染。本病一年四季均可發(fā)生,但最常發(fā)生于初春或春末夏初、氣候炎熱干旱及牧草枯季節(jié)。羊舍陰暗潮濕、雜亂污穢有助于本病的流行。2臨床癥狀和診斷2.1皮膚型的病理變化羊口瘡自然感染潛伏期3～8d。根據(jù)病變部位不同可分唇型、蹄型、外陰型三種情況。由于其嗜上皮性的特點,唇型臨床常表現(xiàn)為發(fā)病動物的口唇、鼻孔周圍、口腔黏膜等處皮膚和黏膜形成丘疹、水皰、膿皰、潰瘍及疣狀厚痂,主要引起皮膚和黏膜的增生性病變,病羊精神沉郁、被毛粗亂無光澤、不愿采食、吮乳時騷動不安,口內(nèi)不時流出黏液性和泡沫樣唾液。雖然本病致死率低,但由于主要侵害幼齡山羊,會導致羔羊吮乳、采食、呑咽困難,采食受阻,嚴重影響生長發(fā)育,或因饑餓衰竭或繼發(fā)感染等而造成死亡。有報道患病羔羊的病死率可高達93%。蹄型病變常在蹄叉、蹄冠或系部皮膚上形成水泡和膿皰,破裂后形成由膿液覆蓋的潰瘍。病羊跛行,影響放牧。外陰型較少見,表現(xiàn)為陰唇及附近皮膚上有潰瘍,乳房皮膚發(fā)生膿皰爛斑和痂垢;公羊陰鞘腫脹,陰鞘口和陰莖上發(fā)生膿皰和潰瘍。2.2細胞調(diào)清學和pcr檢測根據(jù)流行情況及臨床癥狀,基本可以作出診斷,但要注意與羊痘、藍舌病、潰瘍性皮炎等進行區(qū)別診斷。當診斷困難時可通過實驗室方法進行確診。(1)病原學診斷方法。直接采集病料,在電鏡下進行形態(tài)檢查確診;通過細胞對病毒進行分離培養(yǎng),如接種后48～60h可見細胞變圓、團聚和脫壁等病變,并可觀察到胞漿內(nèi)含有圓形或近似圓形的大小與正常細胞核相近的嗜酸性包涵體即可確診;進行動物接種試驗。(2)血清學診斷。本病可用補體結合反應、瓊脂擴散試驗、免疫熒光技術、反向間接血凝試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等血清學方法進行診斷。(3)分子生物學PCR方法診斷。Beeher、Ya—SUO、Einar等人于2002年分別采用PCR法檢測ORFV,結果表明該方法的靈敏性和特異性均較高。Nitsche等人于2006首次建立了用于副痘病毒檢測的實用PCR檢測方法,用該方法對臨床上分離的41株病毒株進行檢測的結果表明,其靈敏性和特異性均較高,與其他病毒不存在交叉反應性。3和合環(huán)形發(fā)夾結構羊口瘡病毒基因組為線性雙股DNA,長約140kb。G+C含量達到60%。基因組中間是一個長的中心編碼區(qū),兩頭是相同的反向末端重復序列形成的閉合環(huán)狀發(fā)夾結構。羊口瘡病毒可能含有130個基因,其中127個為線性基因。這些基因在基因組中的位置基本確定,一般認為ORFV基因組的兩端包括一些與病毒的毒力、宿主范圍、免疫逃避及免疫調(diào)節(jié)有關的基因,具有病毒種屬特異性。基因組內(nèi)部結構(即保守區(qū)DNA序列)包括一些與病毒在細胞中復制和病毒粒子在細胞漿中裝配成熟有關的基因。目前一些與羊口瘡病毒結構組成、致病性、免疫調(diào)節(jié)相關的基因研究較多,但還不是十分清楚,甚至存在認識上的不同。3.1第二、對orfv蛋白表達的影響10kD融合蛋白對病毒結構的形成具有重要作用。Spehner等人2004年研究表明,缺失編碼10kD蛋白基因的ORFV突變體仍能在其易感細胞上增殖并包裝成具有侵染性的粒子,然而其表面缺乏ORFV特有的螺旋型微管結構,僅存在短且排列紊亂的微管。說明10kD蛋白對其表面結構形成起非常重要的作用。B2L基因編碼主要的免疫囊膜蛋白。B2L基因位于ORFV基因組左末端的BamHI/B片段上,該基因在病毒DNA開始復制后即活躍地開始翻譯,能夠編碼產(chǎn)生42000蛋白,該蛋白可刺激機體產(chǎn)生強烈的抗體反應。不同分離株同源性能達到97%～98%,同假牛痘病毒(pseudocoxpx)牛丘疹水皰病毒的(BPSV)同源性能達到82%～83%,該基因的保守性常用于病毒PCR方法的鑒定。3.2dutpase蛋白編碼病毒主要毒力因子的基因有0VIFNR、dUTPase和VEGF等?；騉VEFNR編碼干擾素抑制蛋白在病毒感染早期復制,能阻止雙鏈RNA依賴激酶(dsRNA-independedkinase)抑制病毒和細胞蛋白合成。與病毒的宿主范圍和致病性有一定的關系。dUTPase由ORFV中長約474bp的基因序列編碼產(chǎn)生,該蛋白以原核融合形式表達,該蛋白酶對病毒毒力有決定作用?；騐EGF編碼的血管生長因子在病毒感染的宿主中能引起包括血管化反應、水腫、表皮角質(zhì)化和結痂等病理變化。在病毒感染體中發(fā)揮重要作用。缺失編碼VEGF基因的重組病毒感染后引起的血管化程度明顯降低,并且在一定程度上減緩病毒的增殖。ORFV感染引起的以血管內(nèi)皮強烈增生和血管高度擴張為特征的傳染性膿皰皮炎與其編碼產(chǎn)生的VEGF有關。3.3vil-10在病毒免疫逃避機制中的作用基因vIL-lO(virusinterleukin10)編碼白介素-10多向性細胞因子。在許多細胞中發(fā)揮免疫雙向調(diào)節(jié)作用。是潛在的抗炎細胞因子,能抑制非特異性的免疫反應,刺激胸腺細胞的增殖,抑制細胞因子的合成。用缺失vIL-lO的突變株感染動物發(fā)現(xiàn),r-干擾素的水平要比原毒株高,因此VIL-10在病毒的免疫逃避機制中發(fā)揮重要的作用。FIL基因位于病毒基因組中部,其編碼產(chǎn)生的39kDa蛋白是病毒表面微管的組成成分之一,并且能誘導宿主產(chǎn)生中和抗體?；騁IF(GM-CSFinhibitoryfactor)編碼粒-巨噬細胞集落刺激因子和IL-2的抑制因子,在體內(nèi)作為免疫調(diào)節(jié)因子,與宿主GM-CSF和IL-2結合,能刺激或抑制其功能。羊口瘡病毒是引起人和動物傳染性接觸性皮炎的病毒,傳播迅速,傳染范圍廣,危害較為嚴重,特別對養(yǎng)羊業(yè)造成的損失尤為嚴重,目前對該病所致疾病的診斷和免疫還沒有完整的特異性方法和良好的疫苗,常用的滅