馬鹿人工授精技術(shù)研究

馬鹿人工授精技術(shù)研究

20世紀(jì)60年代，中國(guó)開始研究梅花和馬鹿的人工育種，并比國(guó)外早8年。1960~1969年,用假陰道、按摩、附睪和配后母鹿陰道取精等4種方法獲取精液。1977~1981年試驗(yàn)并采用了“藥物麻醉保定電刺激采精法”、“結(jié)扎輸精管、帶試情布公鹿對(duì)發(fā)情母鹿試情法”和“母鹿半麻醉保定輸精法”,對(duì)96頭公鹿采精192頭·次,成功率84.4%,平均射精量1.45±0.68mL,凍存了50安瓶和2308粒精液,凍后的精子活力為0.37±0.08。輸精鹿的受胎率從33%(1960~1964年,n=9,馬鹿)到53.4%(1980~1984年,n=154,梅花鹿),僅在吉林省特產(chǎn)所、吉林農(nóng)大、雙陽三鹿場(chǎng)、吉林市龍?zhí)渡铰箞?chǎng)和永吉二鹿場(chǎng)開展了較小規(guī)模的試驗(yàn)研究。近幾年來,伴隨著國(guó)內(nèi)外養(yǎng)鹿高效益的熱潮,馬鹿養(yǎng)殖業(yè)又是熱中之熱,農(nóng)業(yè)部于“七五”、“八五”和“九五”期間先后立了7項(xiàng)馬鹿育種和繁育等方面的課題和專題,已獲得“茸鹿雜交優(yōu)勢(shì)的利用”、“天山馬鹿清原品系”、“塔里木馬鹿品種培育”等3項(xiàng)技術(shù)成果。而鹿的人工授精等現(xiàn)代繁殖技術(shù),又是其關(guān)鍵技術(shù),也是清原品系特級(jí)和超特級(jí)種公鹿“高效工程”的關(guān)鍵環(huán)節(jié),它的應(yīng)用,能較充分發(fā)揮出特級(jí)尤其超特級(jí)種公鹿的巨大作用,顯著地提高選育馬鹿及被改良馬鹿的繁殖率、后裔品質(zhì)、茸重性狀的遺傳進(jìn)展和經(jīng)濟(jì)效益。為此,我們先后建立了實(shí)驗(yàn)鹿場(chǎng)和馬鹿—天山馬鹿人工授精技術(shù)推廣站,引鑒國(guó)內(nèi)外畜牧業(yè)有關(guān)高新技術(shù),結(jié)合馬鹿的生物學(xué)特點(diǎn),開展了本項(xiàng)研究,并建立了完全可以大面積推廣應(yīng)用、迅速取得高效益的配套技術(shù)系統(tǒng)工程。1材料和方法1.1測(cè)試鹿1.1.1對(duì)沒有加標(biāo)后的鮮種鹿0號(hào)鹿之子選擇天山馬鹿特級(jí)和清原品系的超特級(jí)種公鹿11頭·次:1997年生產(chǎn)初角和初角再生茸兩茬合計(jì)鮮重10.41kg的96~13號(hào)育成公鹿(36號(hào)鹿之子);1994年生產(chǎn)三杈鮮重6.05kg的36號(hào)頭鋸鹿(0號(hào)鹿之子),生產(chǎn)四杈鮮重21.25kg和19.35kg的1,2號(hào)七鋸鹿,生產(chǎn)17.95kg鮮茸的91號(hào)十五鋸鹿;1995年生產(chǎn)18.0kg的11號(hào)十鋸鹿和生產(chǎn)四杈鮮重11.2kg的36號(hào)二鋸鹿;1996年生產(chǎn)四杈鮮重15.0kg的36號(hào)三鋸鹿和產(chǎn)四杈鮮重24.0kg的0號(hào)七鋸鹿;1997年生產(chǎn)四杈鮮重19.25kg的36號(hào)四鋸鹿和產(chǎn)四杈鮮重24.0kg的0號(hào)八鋸鹿。1.1.2新農(nóng)保險(xiǎn)場(chǎng)所1991~1997年期間,供輸精的主要單位有黑龍江省的哈爾濱特產(chǎn)所、興凱湖農(nóng)場(chǎng)鹿場(chǎng)、松嶺天鹿特產(chǎn)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)、東寧縣養(yǎng)鹿場(chǎng)、樺南縣金沙鹿場(chǎng)、大慶市三環(huán)公司第五牧場(chǎng);吉林省的雙陽二鹿場(chǎng),吉林市龍?zhí)渡铰箞?chǎng)、輝南179處鹿場(chǎng)、和龍八浦江鹿場(chǎng)、撫松縣鹿場(chǎng)、靖宇二鹿場(chǎng);內(nèi)蒙古的烏蘭坎林場(chǎng)、石棚溝林場(chǎng)、南木養(yǎng)鹿場(chǎng)和罕山鹿場(chǎng);遼寧的西豐涼泉參茸場(chǎng)和前所果樹農(nóng)場(chǎng)鹿場(chǎng);河北的南甲山林場(chǎng)(承德縣)和山海關(guān)畜牧場(chǎng);安徽的銅陵鹿場(chǎng)及新疆和山西等8省區(qū)30多個(gè)鹿場(chǎng),累計(jì)3000余頭,其中,1997年為1200余頭·次。1.2假臺(tái)鹿的安裝采精PCJ-2B型動(dòng)物電子采精器的電刺激采精與假臺(tái)鹿的采精方法(1991年)。應(yīng)用假臺(tái)鹿采精時(shí),采精前對(duì)特制陰道以藥用凡士林為潤(rùn)滑劑,注水充氣(應(yīng)有適當(dāng)?shù)膲毫蜐?rùn)滑度),將其安裝在人工制作的假臺(tái)鹿內(nèi)。然后撥公鹿于采精場(chǎng)內(nèi)誘其爬跨,經(jīng)多次調(diào)教馴化,公鹿爬跨并射精。1.3冷冷凍溶液的制備和方法1.3.1檸檬酸、檸檬酸、甘油等添加量的單因素組合配方Ⅰ(Tris):蒸餾水34.41mL,Tris1.21g,果糖0.50g,檸檬酸0.67g,甘油3.20g,卵黃10mL;配方Ⅱ(蔗糖):12%蔗糖液75mL,卵黃5mL,甘油5mL。冷凍稀釋液事先配好,置于冰箱內(nèi)保存,臨使用前,每100mL加入青、鏈霉素各5~10萬單位。1.3.2稀釋液的加入①精液的稀釋、分裝和平衡:在稀釋液與精液等溫條件下,對(duì)精液按1∶5或1∶20的比例一次性稀釋,用國(guó)產(chǎn)0.5mL細(xì)管分裝,系用注射器把稀釋液吸入細(xì)管,細(xì)管上部精液要充滿,底部要有3~5mm空隙,用滅菌的封口粉蘸封細(xì)管底部,放入0~5℃冰箱緩慢降溫,平衡3~4h;②冷凍、解凍抽檢、保存:把平衡好的細(xì)管精液平放在裝滿液氮的5L廣口液氮罐中的20目分樣篩上,網(wǎng)面中央溫度在-120℃左右,冷凍10~12min,然后隨機(jī)取1支樣解凍鏡檢,活力在0.3以上者,裝入消毒好的袋中,標(biāo)記放入液氮容器內(nèi)貯存。1.4母鹿雌激素的識(shí)別1.4.1直接接觸法手通過直腸壁輕輕觸摸卵巢,判定卵泡發(fā)育程度。1.4.2試情公鹿的選擇母馬鹿進(jìn)入發(fā)情盛期接受公鹿爬跨時(shí),正是人工授精的最佳時(shí)期,所采用的試情公鹿為輸精管結(jié)扎或陰莖扭轉(zhuǎn)的公鹿。把試情公鹿放入小圈單獨(dú)飼養(yǎng),每日2次撥入15~30頭母鹿群內(nèi),試情30min左右。1.5卡蘇式金屬輸精槍的制備用特制的帶劑量標(biāo)計(jì)的金屬專用輸精器(系“卡蘇式”金屬輸精槍改制的),通過直腸握頸法輸精,將精液輸過子宮頸口的4~5個(gè)環(huán)狀皺褶,深達(dá)4cm。1.6中小型織物的制備把細(xì)管凍精從液氮罐夾出即放入38~40℃水中,10s中取出即可。適宜快速解凍精液能受溫均勻,解凍效果好,精子復(fù)蘇率高,解凍后精子活力為0.3~0.6,頂體完整率平均為71.43%,每支細(xì)管凍精含有效精子數(shù)不少于1500萬個(gè)。1.7輸精、臥后輸精對(duì)發(fā)情盛期接受爬跨的母鹿,肌注眠乃寧2mL,待3~5min麻醉躺臥后進(jìn)行輸精。每次輸2粒凍精(800~1000萬個(gè)/粒)或1支細(xì)管凍精的精液,日輸2次,間隔6~9h,每次輸完精后,給被輸精母鹿靜注4mL蘇醒靈,待3~5min母鹿蘇醒后站立行走,即輸精順利結(jié)束。1.8母鹿丟失妊娠的診斷將人工輸精40天以后的母鹿,麻醉后應(yīng)用直腸檢查觸摸子宮頸、子宮體和子宮角法進(jìn)行檢查,即能準(zhǔn)確判斷出母鹿是否妊娠。2結(jié)果2.1電刺激采精和假臺(tái)鹿采精的結(jié)果2.1.1充放電密度17東南角采精成功率87.2%,頭·次均射精量為3.36mL(n=102),精子密度為13.8±8.9億/mL,鮮精活力0.7~0.8,頭·次均凍64支(902支/14頭·次),其中,17月齡96-13號(hào)育成公鹿的射精量為2mL,鮮精活力0.9,密度15億/mL。2.1.2精子刺激試驗(yàn)采精的成功率66.7%,射精量平均為1.5mL(n=22)精子的密度為18.6~37億/mL,活力0.8,頭·次均拭制細(xì)管凍精106支,比電刺激采精高65.6%。2.2生產(chǎn)細(xì)管冷凍精的數(shù)量和質(zhì)量2.2.1數(shù)字量1990~1997年累計(jì)生產(chǎn)4000余支,其中96-13號(hào)為47支。2.2.2顆粒凍精情況質(zhì)細(xì)管凍精解凍后精子的活力:17月齡育成公鹿的為0.6,其它成年種公鹿的平均為0.46,比顆粒凍精的0.344分別高74.4%和33.7%,而育成公鹿的比其它成年種公鹿的高30.4%。2.3平均受胎率1991~1996年在7省(自治區(qū))26個(gè)鹿場(chǎng)受胎率達(dá)89.19%(660/740),其中,1996年哈爾濱特產(chǎn)所、烏蘭壩林場(chǎng)、東寧縣養(yǎng)鹿場(chǎng)、金沙鹿場(chǎng)、興凱湖鹿場(chǎng)、撫松鹿場(chǎng)、西豐涼泉參茸場(chǎng)和承德縣南甲山林場(chǎng)等5省(自治區(qū))6個(gè)單位的平均受胎率達(dá)86.6%(271/313);其中,哈爾濱特產(chǎn)所1995~1996年的達(dá)86.8%(33/38),其1992和1995年兩年經(jīng)過“直線培育”和“豐富飼養(yǎng)”的15只16月齡左右的育成母鹿全部發(fā)情和采用細(xì)管凍精人工輸精的受胎率達(dá)100%,1991、1992和1995年3年的達(dá)90%(n=20)。2.4根據(jù)該工藝獲得的勞工晉升的鹿數(shù)量到1997年年末,共獲得人工授精后裔2353只。2.5人工精細(xì)后代的質(zhì)量和產(chǎn)量2.5.1主1公鹿生長(zhǎng)5年生公鹿與24歲產(chǎn)松茸、4歲產(chǎn)松茸、5.幼鹿生長(zhǎng)發(fā)育快,體型體重較大,性成熟和生產(chǎn)成熟提前,其優(yōu)秀者系純種96-13號(hào),產(chǎn)初角茸重10.41kg,相當(dāng)于3~4歲特級(jí)種公鹿的產(chǎn)茸量,而育成母鹿即可發(fā)情配種,翌年正常繁育,繁育年齡提前1年。2.5.2東天fps的繁殖性能人工授精所獲得的改良后裔成年時(shí)產(chǎn)茸性能,主要性狀茸重一般提高60%以上;繁殖性能,主要是繁殖成活率一般達(dá)80%以上,提高20%以上,所獲得的東·天F1個(gè)體的鮮茸最高產(chǎn)量,頭鋸高達(dá)4.4kg(93-72號(hào),1995),東·天·天F2個(gè)體的鮮茸最高產(chǎn)量,頭鋸高達(dá)8.2kg(95-1號(hào),1997)。2.6精密度和輸精情況特級(jí)種公鹿7號(hào)于1991年死亡,其1988年采取的已保存8年之久的冷凍精液,1995年給93-6號(hào)和93-11號(hào)母鹿輸精,1996年獲得了96-17號(hào)和96-7號(hào)兩只母仔鹿。3研究所取得的成績(jī)1)研究結(jié)果表明,電刺激或假臺(tái)鹿采精、直腸觸摸法的發(fā)情和妊娠鑒定、細(xì)管凍精、直腸握頸法和特制金屬專用輸精器輸精等項(xiàng)新技術(shù)是成功和先進(jìn)的,同時(shí),采集天山馬鹿清原品系特級(jí)或超特級(jí)種公鹿的精液輸精,顯著提高了母馬鹿的受胎率(20%以上)和后裔品質(zhì)(增茸60%以上),并在近兩年出現(xiàn)了多只幼鹿和年青鹿的主要經(jīng)濟(jì)性狀的世界之最,不僅表明茸重等性狀的遺傳穩(wěn)定,同時(shí)表明,這些高新技術(shù)是選育品系(種)取得高產(chǎn)、高效低耗的關(guān)鍵技術(shù)和必由之路。2)本研究豐富了超特級(jí)種公馬鹿的基因庫,使其發(fā)揮更大、更廣泛和更長(zhǎng)遠(yuǎn)的作用。3)本項(xiàng)新技術(shù),已與采精種公鹿的“全價(jià)飼養(yǎng)”、輸精母鹿的“短期優(yōu)飼”和幼鹿的“直線培育”及“豐富飼養(yǎng)”等項(xiàng)技術(shù)措施相配套,已收到更佳效果,不僅年青的頭、二產(chǎn)母鹿可輸精,4~16歲特級(jí)種公鹿可以采精,而且16月齡左右的育成母鹿也可輸精,其優(yōu)良后裔在頭鋸和育成時(shí)也完全可以采精,使育種的世代間隔明顯縮短一半,茸重性狀的遺傳進(jìn)展和育種速度大大加快。4)本項(xiàng)研究已成功地通過直腸壁觸摸卵巢法和用溫順、性欲旺盛輸精管結(jié)扎的馴化公