巴戟天多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠氧化應(yīng)激損傷及認(rèn)知行為的影響

巴戟天多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁癥大鼠氧化應(yīng)激損傷及認(rèn)知行為的影響

抑郁是一種常見(jiàn)的心理障礙表現(xiàn)形式，是神經(jīng)系統(tǒng)和心理因素的結(jié)果。其中，邊緣系統(tǒng)和網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的損傷在抑郁的發(fā)病中起著重要作用。在不良的刺激下，體內(nèi)氧化反應(yīng)的激活是神經(jīng)系統(tǒng)功能損傷的機(jī)制之一。巴戟天是一種具有抗逆性作用的中藥。在本研究中，巴戟天糖對(duì)大鼠體內(nèi)氧化反應(yīng)和認(rèn)知障礙的影響進(jìn)行了探討。1材料和方法1.1檢測(cè)試劑和儀器巴戟天根莖(廣東肇慶產(chǎn),經(jīng)中藥專家鑒定為南巴戟天),MDA及SOD檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所),烘干箱(上海精密儀器廠),721型分光光度計(jì)(北京儀器廠),熒光顯微鏡(北京儀器廠),切片機(jī)(北京儀器廠),T迷宮(美國(guó)自然基因科技有限公司供應(yīng))其它試劑為分析純。1.2巴鏢天多糖的提取選取適量巴戟天根莖,烘干箱60℃烘干至恒重,精密稱取100g,研磨成粉末狀,于燒瓶中加蒸餾水浸泡(W∶W=1:25),酒精燈加熱至75℃煎煮4h,注意觀察溶液性狀變化,形成巴戟天浸膏后冷卻,后加入95%乙醇(W∶W=1∶4)提取巴戟天多糖,靜置于冰箱中12h,保存溫度2℃沉淀巴戟天多聚糖成分,離心得巴戟天多聚糖,經(jīng)膜過(guò)濾、去蛋白、冰凍干燥,得巴戟天多糖。1.3動(dòng)物飼養(yǎng)及不規(guī)律給予量24只清潔級(jí)雄性SD大鼠由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,7~8周齡,均重(200±25)g。隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及干預(yù)組,每組8只,模型組及干預(yù)組大鼠分只孤養(yǎng),采用日光燈不規(guī)律時(shí)間間隔光照,不規(guī)律時(shí)間給予飲水及飲食,不規(guī)律給予高溫環(huán)境及冰水游泳,異味刺激及電擊足底,共計(jì)飼養(yǎng)24d,造模結(jié)束。造模開(kāi)始時(shí)干預(yù)組即給予巴戟天多糖干預(yù),每日腹腔注射巴戟天多糖溶液1mL/kg(100mg/mL),模型組及對(duì)照組每日腹腔注射生理鹽水1mL/kg。1.4t迷宮實(shí)驗(yàn)大鼠造模24d后進(jìn)行T迷宮實(shí)驗(yàn)考察大鼠認(rèn)知行為能力,每個(gè)大鼠重復(fù)走迷宮5次,以減少偏向誤差,計(jì)算每只大鼠的錯(cuò)誤平均次數(shù)。1.5樣品的采集和檢測(cè)1.5.1血清中大鼠血清中的聚合酶活性檢測(cè)大鼠T迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后低溫下處死,剪開(kāi)心臟采集血液標(biāo)本4mL,低溫離心機(jī)2000G/min分離得血清,分兩份保存于深低溫冰箱,低溫下摘取腦組織,采用4%低聚甲醛固定,以松果體為界,向頭側(cè)2mm厚度切取3段,石蠟包埋待檢。1.5.2方法及操作注意事項(xiàng)血清MDA及SOD水平檢測(cè)采用比色法,血清標(biāo)本梯度稀釋,標(biāo)本按要求加樣、溫育、清洗、顯色,721型分光光度計(jì)(北京儀器廠)450nm處檢測(cè)樣品吸光度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品MDA及SOD濃度,所有操作嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)及儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。1.5.3熒光顯微鏡觀察取大鼠腦組織標(biāo)本蠟塊,4μm厚度連續(xù)切片,切片常規(guī)脫蠟水化,采用非免疫山羊血清室溫孵育30min,阻斷非特異性抗原,稀釋NSE單克隆一抗,以0.05mol/LPBS沖洗3次,沖洗完畢后加入生物素標(biāo)記的二抗孵育lh,孵育溫度37℃,反應(yīng)結(jié)束后PBS緩沖液沖洗10min,共3次,以緩沖甘油封蓋,熒光顯微鏡觀察,取5個(gè)不重疊視野計(jì)算平均值。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS17.0漢語(yǔ)版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包處理,統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差分析,組間比較采用SLN-q檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1干預(yù)組與模型組血清檢測(cè)結(jié)果比較T迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,干預(yù)組T迷宮錯(cuò)誤次數(shù)低于模型組(q=11.4,P=0.006),高于對(duì)照組(q=19.7,P=0.002),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清檢測(cè)結(jié)果表明,干預(yù)組血清MDA濃度低于模型組(q=7.6,P=0.009),高于對(duì)照組(q=13.5,P=0.005),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。干預(yù)組血清SOD水平高于模型組及對(duì)照組(q=14.9,P=0.004;q=27.5,P=0.001),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。海馬組織鏡檢結(jié)果顯示,干預(yù)組海馬區(qū)神經(jīng)元水平高于模型組(q=8.9,P=0.008),低于對(duì)照組(q=10.6,P=0.008),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3抑郁癥與氧自由基抑郁癥是在多種因素作用下的情感功能障礙,抑郁癥的發(fā)生與腦部情感相關(guān)中樞的結(jié)構(gòu)及功能的損傷或變化密切相關(guān),皮質(zhì)及皮質(zhì)下核團(tuán)和結(jié)構(gòu)中,與情感密切相關(guān)的部位損傷均可能出現(xiàn)抑郁癥狀及性格行為的改變,如額葉、網(wǎng)狀上行結(jié)構(gòu)及海馬結(jié)構(gòu)等,其中海馬結(jié)構(gòu)與情感障礙的關(guān)系密切,海馬結(jié)構(gòu)是哺乳動(dòng)物的情感皮質(zhì)下中樞,動(dòng)物與情感有關(guān)行為如興奮、恐懼、焦慮等均與海馬區(qū)的神經(jīng)元功能及神經(jīng)遞質(zhì)的水平變化密切相關(guān),在海馬結(jié)構(gòu)摧毀后,動(dòng)物甚至出現(xiàn)明顯的強(qiáng)迫性行為以及情感、性格的明顯變化。近年來(lái)的研究顯示,抑郁癥是慢性的心理及生理應(yīng)激過(guò)程,能夠引起體內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能變化,甚至伴有氧化應(yīng)激系統(tǒng)的激活,引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的氧化損傷,包括海馬區(qū)在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)活性氧產(chǎn)物具有較高的敏感性,腦組織代謝旺盛,對(duì)氧自由基引起的損傷較其他組織更為敏感,有研究顯示,在腦部結(jié)構(gòu)及功能損傷過(guò)程中,氧自由基引起的氧化損傷是腦部功能繼發(fā)性損害的主要原因之一。巴戟天是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥,具有還原抗氧化作用及抗抑郁作用,現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明,其中多糖是其發(fā)揮抗氧化作用的主要成分。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,巴戟天多糖能夠有效拮抗MDA等氧自由基對(duì)組織的損傷,在代謝旺盛的組織,表現(xiàn)得尤為明顯,我們對(duì)孤養(yǎng)法及不規(guī)則刺激建立的抑郁癥大鼠模型研究發(fā)現(xiàn),在抑郁癥模型大鼠,其認(rèn)知能力明顯下降,T迷宮實(shí)驗(yàn)的次數(shù)增多,對(duì)其海馬區(qū)神經(jīng)元的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),其海馬區(qū)的神經(jīng)元數(shù)目下降,而血清MDA水平上升,SOD水平下降,說(shuō)明在不規(guī)律刺激造模過(guò)程中能夠引起大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激系統(tǒng)激活,抗氧化能力下降,可能是引發(fā)海馬區(qū)神經(jīng)元損傷繼而引起認(rèn)知行為異常,誘發(fā)抑郁癥狀產(chǎn)生,而給予巴戟天多糖