仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

仔豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)程子兵1董春霞2石國(guó)界3沙里塔那4馬長(zhǎng)麗1（1.塔城地區(qū)動(dòng)物疾控與診斷中心新疆塔城834700；2.重慶市武隆縣畜牧獸醫(yī)局重慶市武隆縣408500；3.塔城市畜牧獸醫(yī)工作站新疆塔城834700；4.額敏縣獸醫(yī)工作站新疆額敏縣834600）摘要:對(duì)塔城地區(qū)一農(nóng)戶飼養(yǎng)豬群中仔豬發(fā)生的臨床癥狀以水腫病、白痢、黃痢為特征的病例進(jìn)行了樣品采集，后經(jīng)麥康凱、伊紅美藍(lán)分離培養(yǎng)，糖發(fā)酵生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)等結(jié)果顯示均為大腸桿菌，同時(shí)通過藥敏試驗(yàn)篩選出敏感抗生素。關(guān)鍵詞：仔豬；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)Abstract：SpecimenswithdropsyanddysenteryclinicalsymptomswereisolatedfromonehouseholdraisespiggroupinTachengarea.Bybacteriaculture,biochemicaltestandanimaltest,theresultsindicatethebacteriumispathogenicEscherichiaColi.Meanwhile,weascertainsensitiveantibioticstothisEcolibymedicinetest.Keywords:pig;EscherichiaColi;isolateindentify;medicinetest仔豬大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的腸道傳染病，主要表現(xiàn)為仔豬白痢、黃痢和水腫病，其中黃痢多發(fā)生于1周內(nèi)哺乳仔豬，病豬主要表現(xiàn)為排黃色糊狀糞便；白痢多發(fā)于10～30日齡，病豬主要表現(xiàn)為排乳白色或灰白色腥臭糊狀糞便；水腫病多發(fā)于斷奶仔豬，主要有神經(jīng)癥狀、胃壁、腸黏膜等組織水腫，四季均可發(fā)生，發(fā)病率和致死率高低不等，嚴(yán)重者同窩仔豬中發(fā)病率可達(dá)90％以上，致死率可達(dá)100％，幸存者則影響生長(zhǎng)，甚至成為僵豬【l】。由于致病性大腸桿菌的血清型復(fù)雜，在不同豬場(chǎng)、不同季節(jié)、不同批次，不同年齡流行菌株均可能不相同，造成規(guī)?；i場(chǎng)的防控困難，引起較大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。筆者對(duì)塔城地區(qū)農(nóng)戶散養(yǎng)豬群中采集的仔豬白痢、黃痢和仔豬水腫病的病料進(jìn)行了細(xì)菌分離培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗(yàn)?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：1材料與方法1．1材料1.1.1采取農(nóng)民散養(yǎng)戶中臨床癥狀較為典型的5份仔豬白痢、黃痢肛門拭子及仔豬水腫病的小腸黏膜2份。1.1.2培養(yǎng)劑、普通肉湯、血清瓊脂平板由本實(shí)驗(yàn)室自行配制，麥康凱瓊脂（MCK）、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）按參考文獻(xiàn)[3]制備；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面、葡萄糖微量生化反應(yīng)管、乳糖微量生化反應(yīng)管、麥芽糖微量生化反應(yīng)管、甘露醇微量生化反應(yīng)管購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司，10種藥敏試紙購(gòu)自北京天壇生物技術(shù)有限公司。1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12只小白鼠。1.1.4藥敏試驗(yàn)抗生素藥敏紙片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、頭孢噻肟（CTX）、復(fù)合磺胺（SXT）、慶大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、頭孢唑啉（CFZ）、頭孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。1.2方法1.2.1細(xì)菌分離培養(yǎng)與鏡檢將待檢樣品接種于普通肉湯進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，置37℃溫箱培養(yǎng)12～16h觀察結(jié)果；然后將培養(yǎng)物分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，37℃溫箱培養(yǎng)20-241.2.2生化試驗(yàn)生化鑒定挑取經(jīng)純培養(yǎng)的菌落分別接種于三糖鐵瓊脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸櫞酸鹽瓊脂斜面和葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇等發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)24h1.2.3致病性試驗(yàn)將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對(duì)10只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5mL無菌肉湯培養(yǎng)液作為對(duì)照，24～48h死亡或發(fā)病者取肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢。1.2.4藥敏試驗(yàn)采用藥敏紙片擴(kuò)散法[4],37℃培養(yǎng)18～24h2結(jié)果2.1分離培養(yǎng)疑似培養(yǎng)物在麥康凱瓊脂培養(yǎng)20h后均為紅色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂上培養(yǎng)20h后為中心暗藍(lán)黑色并有綠色金屬閃光的菌落；革蘭氏染色鏡檢均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.2生化反應(yīng)從7份樣品中分離的細(xì)菌經(jīng)生化鑒定后，確定均為大腸埃希氏菌，具體結(jié)果見表1：表1：大腸桿菌生化鑒定結(jié)果試驗(yàn)TSTH2SIdoleMRV-P麥芽糖枸櫞酸鹽甘露醇葡萄糖乳糖結(jié)果＋－＋＋－＋－＋＋＋2.3致病性結(jié)果將分離菌的肉湯純培養(yǎng)物對(duì)12只健康小白鼠分別腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠為對(duì)照，24～36h內(nèi)死亡6只,48h后死亡2只,另2只發(fā)病,對(duì)照鼠不發(fā)病。取發(fā)病者肝臟抹片革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果均為革蘭氏陰性中等大小桿菌。2.4藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2大腸桿菌抑菌圈直徑測(cè)量結(jié)果抗生素PGOXASXTCTXGENTOBCFZAKNNORCRO抑菌圈直徑（mm）－－561111121616183小結(jié)與討論3.1鑒定結(jié)果根據(jù)培養(yǎng)特性、形態(tài)、生化試驗(yàn)、致病性試驗(yàn)鑒定結(jié)果表明此細(xì)菌分離株為致病性大腸桿菌。3.2動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果根據(jù)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，顯示分離株毒力較強(qiáng)，為致病性大腸桿菌，可使小鼠發(fā)病率達(dá)100%，致死率達(dá)80%。3.3治療藥敏試驗(yàn)結(jié)果當(dāng)前大多豬場(chǎng)致病性大腸桿菌對(duì)許多藥物具有不同程度的耐藥性，這可能與豬飼料中長(zhǎng)期使用某些抗菌藥物及濫用抗生素有關(guān)，因此，使用藥物治療大腸桿菌病時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選擇敏感藥物，且應(yīng)注意交替使用。從本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離的大腸桿菌對(duì)青霉素（PG）、頭孢噻肟（CTX）、復(fù)合磺胺（SXT）、苯唑青霉素（OXA）等不敏感；對(duì)慶大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、頭孢唑啉（CFZ）等中敏；而對(duì)頭孢三嗪（CRO）、丁胺卡那霉素（AKN）、氟派酸（NOR）高敏。因此，應(yīng)該避免盲目使用抗生素,在治療時(shí)采用廣譜抗菌藥與特效抗生素結(jié)合對(duì)癥治療，才能使病情得以控制，防止產(chǎn)生耐藥性和錯(cuò)過治療時(shí)機(jī)。3.4防治大腸桿菌分布廣泛，也是動(dòng)物腸道內(nèi)的正常寄居菌，當(dāng)腸道內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化時(shí),附著在腸黏膜上并大量繁殖,產(chǎn)生許多對(duì)宿主有害的毒性物質(zhì)，如腸毒素、內(nèi)毒素及其他有害產(chǎn)物引起動(dòng)物發(fā)病。特別是初生仔豬十分易感，常發(fā)生嚴(yán)重腹瀉和敗血癥，嚴(yán)重影響生長(zhǎng)和造成死亡，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的損失。而防控仔豬大腸桿菌病方面，結(jié)合多年的臨床工作經(jīng)驗(yàn)，筆者認(rèn)為應(yīng)該重點(diǎn)考慮以下三點(diǎn)：（1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理應(yīng)從疫苗、藥物預(yù)防、溫度、濕度、飼料配方、環(huán)境衛(wèi)生、消毒、飲水、飼養(yǎng)密度等方面采取綜合的生物安全措施，做到預(yù)防為主。（2）從源頭上采取措施堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，不從疫情不明的豬場(chǎng)引進(jìn)種豬；做好母豬分娩前后的環(huán)境清掃和消毒工作，盡快讓仔豬吸吮到初乳，使仔豬迅速獲得初乳抗體，以增強(qiáng)抵抗力。（3）藥物防治需慎重不要盲目的長(zhǎng)期大劑量使用某種藥物，以免造成耐藥菌株的出現(xiàn)。且由于大腸桿菌易產(chǎn)生耐藥性，臨床用藥時(shí)建議以藥敏試驗(yàn)結(jié)果為依據(jù)，有指導(dǎo)性的、科學(xué)的使用抗生素。這樣不但能夠克服了用藥的盲目性，而且可大大縮短疫病治愈的時(shí)間，節(jié)約生產(chǎn)成本。參考文獻(xiàn)：[1]蔡寶樣．動(dòng)物傳染病診斷[M】．南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出