五味子乙素增強腎線粒體抗氧化狀態(tài)、外文翻譯

PAGE1五味子乙素增強腎線粒體抗氧化狀態(tài)、功能和結(jié)構(gòu)完整，防止慶大霉素致腎毒性的影響PoYeeCHIU,HoiYanLEUNG,andKamMingKO*DepartmentofBiochemistry,TheHongKongUniversityofScienceandTechnology;HongKongSAR,China.ReceivedNovember1,2007;acceptedDecember27,2007;publishedonlineJanuary10,2008五味子乙素（附表二）是dibenzocyclooctadiene衍生物分離出的果實，其五味子率（FS）是最豐富的，中藥臨床和化學(xué)經(jīng)常用于治療病毒性心肌炎和肝炎[1]。最近從我們實驗室的研究已經(jīng)證明五味子乙素在心臟，肝臟和腦等各器官的保護作用對其自由基有損傷[2]。調(diào)查生化機制參與廣義組織所提供的保護五味子乙素表明其能力的提高線粒體抗氧化狀態(tài)，這是細胞存活的一個關(guān)鍵因素[3]。由于五味子乙素的抗氧化應(yīng)激可能，有人提議，它作為一項內(nèi)在和外在普遍的細胞保護劑是對組織造成的損害的氧化劑[4]。雖然具有保護作用的五味子乙素對氧化應(yīng)激損傷已經(jīng)展示了各種組織包括心臟，肝臟和大腦[2]，目前還不清楚是否五味子乙素治療以氧化應(yīng)激損傷的抗性腎組織可產(chǎn)生任何有益的影響。在本研究中，我們調(diào)查五味子乙素的長期治療與對慶大霉素致腎毒性的影響。慶大霉素，這是一種常用的氨基糖甙類抗生素，用于治療嚴重的革蘭陰性細菌感染，已發(fā)現(xiàn)可導(dǎo)致腎毒性副作用[5]。為了闡明生化機制的參與，腎線粒體抗氧化狀態(tài)以及線粒體功能和結(jié)構(gòu)的完整性進行評估的控制以及五味子乙素治療的老鼠，沒有和慶大霉素相互作用。中藥材料XX財政司司長從大陸進口的。這是在香港的商業(yè)交易商（XX有限公司）所提供的。五味子乙是純凈的石油醚提取物，用高效液相色譜法測定的純度高于95％分析純[6]。照顧動物成年雌性Sprague-Daley大鼠（8-10周;200-250克）在22℃下保持12小時黑暗/光周期，并允許自由進食食物和水。實驗議定書經(jīng)香港科技大學(xué)實踐研究委員會批準。藥物治療將動物隨機分組，每組五只動物。在用SCHB處理群組過程中，在第1至第15天的實驗，大鼠每天通過灌胃攝入1或10毫克/千克五味子乙（溶解/不溶于橄欖油）。這個劑量方案被認為可以有效地保護心肌缺血/再灌注損傷的大鼠[4]。未經(jīng)處理的動物只攝入五五味子乙和藥物（如橄欖油）。在第10至15天（即6劑量）每天通過腹腔攝入慶大霉素（西格瑪化工有限公司，圣路易斯，密蘇里州，美國）劑量為100毫克/千克（溶解在1％乙醇的生理鹽水）。未經(jīng)慶大霉素處理的動物給予和藥物。24個小時后，攝入最后劑量的五味子乙和慶大霉素（即16天），采集經(jīng)過苯巴比妥心臟穿刺麻醉的動物的血液樣本。動物由于心切除死亡，兩個腎臟器官用于生化分析。制備組織勻漿和線粒體組分腎組織（約0.6克）勻漿中混合六毫升的冰冷的蔗糖緩沖液（0.25M蔗糖，0.1Na2EDTA，5毫米的鹽酸，pH值7.4），用攪拌器在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)下進行8到10個完整過程。如上所描述的[7]，線粒體顆粒通過800×g在4℃條件下離心30分鐘將組織勻漿制備得到）。線粒體顆粒懸浮在1毫升均勻緩沖區(qū)并構(gòu)成線粒體的組成部分。線粒體抗氧化狀態(tài)線粒體原型谷胱甘肽（GSH）和維生素E（一個目錄），以及活動的錳超氧化物歧化酶（SOD）衡量7、8的水平。線粒體功能和結(jié)構(gòu)完整線粒體ATP發(fā)電能力是梁等人衡量所述的。線粒體ATP發(fā)電能力的價值是計算曲線下面積的圖形繪制產(chǎn)生三磷酸腺苷（nmol/mg蛋白）與時間（0-20分鐘）在任意單位表示下估計的。線粒體丙二醛（MDA）產(chǎn)生釋放細胞色素C和鈣負荷的程度與敏感性的線粒體鈣-誘導(dǎo)線粒體通透性轉(zhuǎn)換測量是一樣的。生化分析腎功能間接測量評估血漿肌酐和尿素氮（BUN）水平使用法包（生物測定系統(tǒng)，海沃德，CA，美國）。蛋白濃度的線粒體組分決心利用電泳蛋白檢測試劑盒。數(shù)據(jù)分析了單向方差分析（方差分析）。事后與迷幻劑進行了多重比較。得出結(jié)論p-值0.05被視為統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果五味子乙素長期治療（1-10毫克/公斤/天15天）造成輕微下跌的血漿肌酐和尿素氮水平的影響（圖1）。慶大霉素治療（100毫克/千克/天6D條，IP）腎毒性表明可顯著升高血漿肌酐（2.3倍）和BUN（3.7倍）的水平。五味子乙治療免受慶大霉素致腎毒性與未處理的五味子乙和慶大霉素中毒控制相比，證明其劑量依賴性降低血漿肌酐（10-30％）和尿素氮（14-32％）的水平。加強五味子乙素治療腎線粒體抗氧化狀態(tài)，是通過一個目錄（7-18％）和錳超氧化物歧化酶（13％）以劑量依賴的方式（表1）所顯示的，可增加額/活性肽（18-29％）。與此相反，慶大霉素通過一個目錄（33％）和錳超氧化物歧化酶（31％）治療引起腎損害線粒體抗氧化的狀態(tài)，就證明了活性肽（44％）水平顯著下跌。所提供的五味子乙素治療對慶大霉素毒性與劑量依賴性的增加額/活動的線粒體谷胱甘肽（11-20％），一個目錄（6-12％）和錳超氧化物歧化酶（5-9％）相比，未處理和慶大霉素中毒控制。所提供的五味子乙素治療對慶大霉素毒性與處理的五味子乙素對慶大霉素中毒控制相比，增加線粒體谷胱甘肽（11-20％），一個目錄（6-12％）和錳超氧化物歧化酶（5-9％）的劑量水平。慶大霉素中毒造成了重大的線粒體ATP發(fā)電能力輕微下降。五味子乙素治療慶大霉素中毒大鼠未處理的五味子乙素和慶大霉素中毒控制相比大大提高了腎線粒ATP發(fā)電能力（8-13％）。五味子乙素治療降低腎線粒體丙二醛生產(chǎn)（7-11％），鈣載入中（11-21％）和細胞色素C釋放（4-8％）的程度，同易感性的線粒體鈣引起線粒體通透性轉(zhuǎn)換（6-9％）不同程度（圖3A條，d）項一樣，所有這些都是間接線粒體完整性結(jié)構(gòu)的措施。慶大霉素治療中斷造成腎線粒體結(jié)構(gòu)完整，就證明了顯著增加丙二醛生產(chǎn)（17％），鈣載入中（35％）和細胞色素C釋放（43％）的程度，同未處理的五味子乙素慶大霉素中毒控制相比同樣增加敏感性鈣-誘導(dǎo)線粒體通透性轉(zhuǎn)換（32％）程度。五味子乙素治療線粒體結(jié)構(gòu)保存完整，慶大霉素中毒大鼠中和慶大霉素中毒控制相比，可指出顯著下跌的價值觀念線粒體參數(shù)有著不同程度（6-17％）。慶大霉素治療造成腎功能的損害，體現(xiàn)在增加血漿中肌酐和尿素氮的水平。慶大霉素腎毒性已被認為是一個復(fù)雜的現(xiàn)象，其特點是嚴重的近端腎小管壞死其次是腎功能衰竭[9]。減少腎小球濾過率，如增加血漿肌酐水平，尿素氮水平顯著腎實質(zhì)損傷的發(fā)生[10]，將同時增加。雖然長期治療五味子乙生產(chǎn)略有下降，但血漿肌酐和尿素氮水平的影響，抑制了慶大霉素誘導(dǎo)增加血漿肌酐和尿素氮水平的方式。所提供的五味子乙素治療對慶大霉素毒性與提高線粒體抗氧化狀態(tài)受慶大霉素中毒大鼠控制。巨大的體實驗證據(jù)表明，活性氧（ROS）中的慶大霉素的腎毒性.5，9可參與發(fā)病機制。在這方面，慶大霉素被發(fā)現(xiàn)，以提高生產(chǎn)的過氧化氫的大鼠腎皮質(zhì)線粒體[11]。我們發(fā)現(xiàn)腎損傷線粒體抗氧化成分慶大霉素中毒支持的作用，活性氧在慶大霉素致腎損害。鑒于維持線粒體抗氧化能力的細胞存活所起的關(guān)鍵作用[3]，五味子乙素對提高腎線粒體抗氧化狀態(tài)的能力，很可能與其對抗慶大霉素的毒性有關(guān)。尋求加強腎線粒體抗氧化狀態(tài)符合我們最近的研究，這一（研究）表明長期治療與五味子乙素同時口服劑量在各種組織中增強線粒體抗氧化能力[4]。所起的有益作用五味子乙素治療腎組織進一步支持該組織不采取具體行動的五味子乙素在提高線粒體抗氧化系統(tǒng)。此外，加強線粒體抗氧化狀態(tài)是改善或保存線粒體功能和結(jié)構(gòu)完整，特別是在慶大霉素醉酒狀態(tài)。維持線粒體功能和結(jié)構(gòu)的完整性是至關(guān)重要的細胞生存和死亡[12]。五味子乙素治療提高腎線粒體ATP發(fā)電能力，并增加抵抗線粒體鈣-致通透性轉(zhuǎn)變已被發(fā)現(xiàn)。刺激線粒體ATP發(fā)電能力的依賴性在慶大霉素中毒腎組織很可能涉及到五味子乙素誘導(dǎo)增強線粒體谷胱甘肽地位，以及嚙齒動物心臟和肝臟組織[13、14]。至于鈣引起線粒體通透性轉(zhuǎn)換，開放線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔極為參與開發(fā)蜂窩功能和細胞死亡[15]。線粒體鈣超載造成的慶大霉素毒性，在本研究中，易于線粒體通透性的轉(zhuǎn)變[16]