宮頸局部微環(huán)境中il-12、il-4、ifn-濃度變化與宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系

宮頸局部微環(huán)境中il-12、il-4、ifn-濃度變化與宮頸高危型人乳頭瘤病毒感染的關(guān)系

癌癥是女性最常見的生殖腫瘤，其發(fā)病率低于乳腺癌。這是世界上第二次女性死亡。自從Zur等［2］在1976年提出HPV可能是宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵因素,HPV與宮頸癌的關(guān)系就成為了腫瘤研究熱點。目前,研究認為HPV持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生最主要的因素［3］,不同的HPV型感染率也不盡相同,其中HPV16感染率最高,HPV18次之,而在中國特別是廣西地區(qū)HPV58型檢出率明顯增高［4，5］。HR-HPV持續(xù)性感染,造成宮頸微環(huán)境中的免疫炎癥因子,如:IL-12、IL-4、IFN-γ等發(fā)生改變,即輔助性T細胞(helperTcell,Th)1型細胞因子向Th2型改變,特別是在宮頸癌患者Thl型反應(yīng)模式處于弱勢狀態(tài),Th2型反應(yīng)模式處于優(yōu)勢狀態(tài),Thl/Th2平衡失調(diào),Thl/Th2平衡向Th2方向漂移［6］?？梢娺@些免疫因子在腫瘤免疫應(yīng)答中起到了調(diào)節(jié)作用,并且免疫因子的濃度改變,有助于HR-HPV逃避細胞免疫,發(fā)生免疫逃避機制［7］。本研究將采用ELISA對宮頸灌洗液IL-12、IL-4、IFN-γ進行檢測,以探討它們的濃度改變對宮頸病變發(fā)生發(fā)展的影響以及在不同HPV型中變化程度的改變。1患者年齡及測定1.1研究對象收集2012年7月至2013年6月在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤科住院并進行了HPVDNA分型檢測的患者宮頸灌洗液共180例。根據(jù)患者組織病理結(jié)果將宮頸灌洗液分組為:1HPV(-)的非宮頸病變組25例,2HPV(-)的宮頸炎組24例,3HPV16/18/58(+)的實驗組131例。其中試驗組包括31例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN)及100例宮頸癌患者,研究對象的年齡為23~77歲,平均(47.57±0.65)歲。1.2試劑、儀器1ELISA試劑盒(humanIL-12、IL-4、IFN-γELISAkit)購于深圳欣博盛;2酶標檢測儀(型號:MULTISKANMK3,購于美國Thermo公司);3低溫高速離心機(購于美國Thermo公司)。1.3方法1.3.1標本采集1宮頸灌洗液:對入選患者暴露宮頸口,用5mL滅菌生理鹽水沖洗宮頸口及宮頸表面,于后穹隆吸出灌洗液4mL,混勻后分裝入1.5mL無菌EP管中,3000r/min,4℃離心5min。取上清分裝后-80℃保存?zhèn)溆?標本采集均經(jīng)研究對象同意。1.3.2免疫炎癥因子的檢測采用ELISA雙抗夾心法檢測上清中的IL-12、IL-4、IFN-γ因子,按照說明書步驟進行操作,在酶標儀上讀取各個孔相對應(yīng)的OD450值。結(jié)果判讀為:每個標準品和標本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值;以不同濃度的標準品所對應(yīng)的OD450值做縱坐標,以標準品的濃度做橫坐標,用軟件繪制標準曲線,求出相應(yīng)的位置樣本中的細胞因子的含量。2cin及妊娠合并用藥后各免疫因子的變化2.13組患者宮頸灌洗液中免疫炎癥因子水平的測定結(jié)果顯示:3組中IL-12、IL-4、IFN-γ濃度均有差異(P﹤0.05),其中在CIN及癌變組中IL-12、IFN-γ的濃度明顯低于非宮頸病變組及宮頸炎組的含量(P﹤0.05),且非宮頸病變組的濃度低于宮頸炎組的濃度(P﹤0.05);IL-4在CIN及宮頸癌組中的濃度明顯高于非宮頸病變組及宮頸炎組,但非宮頸病變組與宮頸炎組中的濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05)。詳見表1。2.2CIN及癌變組中HPV16/18/58(+)不同型別的患者宮頸灌洗液中細胞因子水平的測定各個免疫因子在試驗組中HPV16(+)組、HPV18(+)組、HPV58(+)組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05),其中IL-4在HPV16(+)組中的濃度明顯高于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05);IL-12、IFN-γ在HPV16(+)組中的濃度明顯低于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05);而各指標在HPV18(+)組、HPV58(+)組中濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。3不同典型的pv感染的機制以及相應(yīng)的免疫因子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤,好發(fā)于子宮頸鱗狀上皮或腺上皮的一種腫瘤［8］。而宮頸癌的病因一直為國內(nèi)外專家所研究的熱點,目前認為HPV的持續(xù)感染是引起宮頸癌及CIN的主要原因［9，10］。人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬,是球形DNA病毒,能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。HPV持續(xù)性的感染宮頸組織后,存在免疫逃避的現(xiàn)象即逃避適應(yīng)性免疫應(yīng)答的清除病毒的作用,從而出現(xiàn)Th1向Th2漂移現(xiàn)象［11］,有利于病毒的感染并幸存下來。有研究顯示,隨著宮頸病變程度的增加,這種漂移越明顯［12］。本研究表明,由于試驗組中均為HPV16/18/58(+)的CIN及宮頸癌患者的宮頸灌洗液,HPV造成Th1/Th2比例失調(diào),在HPV(-)的非宮頸病變組、宮頸炎組中,IL-12、IFN-γ的濃度明顯高于試驗組(P﹤0.05),IL-4的濃度明顯低于試驗組(P﹤0.05)。其原因可能是HPV的持續(xù)感染,影響了宮頸局部的免疫調(diào)節(jié)功能,造成免疫功能下降,以IL-12、IFN-γ為代表的Th1型細胞免疫應(yīng)答向IL-4為代表的Th2型細胞應(yīng)答漂移,IL-4可以促進癌變組織產(chǎn)生IL-10,后者可以降低提成細胞的表達,維持II型淋巴細胞在腫瘤組織中的浸潤,幫助腫瘤細胞的免疫逃避［14］。CIN及宮頸癌組織中可能通過上述機制,進一步促進了腫瘤的進展。Lee等［15］研究發(fā)現(xiàn)HPV感染的不同程度病變的宮頸組織,隨著宮頸病變程度的增加,Th1型細胞因子也隨之出現(xiàn)明顯的下降。在HPV(-)的非病變宮頸組中IL-12、IFN-γ濃度較HPV(-)宮頸炎組中明顯增高(P﹤0.05),IL-4的表達沒有明顯差異(P>0.05),可能由HPV未感染,宮頸炎組中以Th1細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答為主,IL-12、IFN-γ濃度升高,激活巨噬細胞殺滅病原體,起到抗腫瘤作用。3.2不同HPV型的宮頸微環(huán)境中免疫因子的變化全球范圍內(nèi),不同型別的HPV的感染率不同。已經(jīng)證實,HPV16是最常見的致病亞型,約半數(shù)以上的宮頸癌是由其引起［16］。在中國主要以HPV16型為主,居第1位,HPV18居第2位,HPV58和HPV52分別居第3和第4位［17］。本研究顯示:HPV16(+)組中IL-4濃度明顯高于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05),而IL-12、IFN-γ明顯低于HPV18(+)組、HPV58(+)組(P﹤0.05)。這3種細胞因子的濃度變化在HPV18(+)組、HPV58(+)組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。由于HPV16感染的宮頸灌洗液中IL-4濃度明顯升高,IL-12、IFN-γ濃度明顯降低,導(dǎo)致Th1/Th2細胞比例失衡更加明顯,機體抗腫瘤免疫能力下降,促進宮頸癌變的發(fā)生與發(fā)展［18］,這也許是造成HPV16感染率較其他HPV型感染率高原因之一。以往的試驗,大部分檢測的是患者外周血中的免疫因子濃度的變化,本次研究直接檢測宮頸局部微環(huán)境中的免疫因子的變化,更能直觀了解宮頸局部免疫環(huán)境的改變。并且由于HPV感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān),所以對患者進行常規(guī)HPV分型檢測及宮頸灌洗液中Th1/Th2檢測是十分必要的。有報道顯示運用重組IL-12腺病毒作為HPV16疫苗的佐劑,可將腫瘤體積縮小,增加疫苗抗腫瘤的時間［19］。所以我們通過宮頸微環(huán)境中免疫因子濃度差別,對療效的判斷,預(yù)后的估計,以及在HPV疫苗中使用Th1型細胞因子為佐劑的研究,值得在今后的試驗研究中進一步深入了解。1.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用Excel與SPSS16.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理,計量資料采用均值±標準差(ue003±s)表示,應(yīng)用方差分析、SNK-q檢驗對數(shù)據(jù)進行分析,P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.1宮頸不同病變微環(huán)境中免疫因子的變化HPV持續(xù)感染導(dǎo)致Th1向Th2漂移會造成相應(yīng)的細胞免疫因子濃度發(fā)生改變。IL-12、IFN-γ