吡諾克辛鈉滴眼液對大鼠糖尿病誘導(dǎo)性白內(nèi)障的防治作用

吡諾克辛鈉滴眼液對大鼠糖尿病誘導(dǎo)性白內(nèi)障的防治作用

障礙是導(dǎo)致75歲以上人員失敗的主要原因。在美國,每年有1.5億人發(fā)展成為白內(nèi)障。引發(fā)白內(nèi)障的危險因素有糖尿病、青光眼、長期應(yīng)用皮質(zhì)類固醇、紫外線輻射等,其中糖尿病是導(dǎo)致白內(nèi)障形成的主要原因之一,隨著糖尿病的流行,糖尿病白內(nèi)障成為當(dāng)今不可忽視的導(dǎo)致患者視力和生存質(zhì)量下降的重要因素之一。對于糖尿病白內(nèi)障的治療,相關(guān)藥物的研究較多,如醛糖還原酶抑制劑、抗氧化劑、晚期糖基化終產(chǎn)物抑制劑等,但市面上仍缺少一種明確的能預(yù)防糖尿病白內(nèi)障的藥物。吡諾克辛鈉滴眼液,是已上市且廣泛應(yīng)用的防治白內(nèi)障藥物,主要治療早期老年性白內(nèi)障,輕度糖尿病白內(nèi)障或并發(fā)性白內(nèi)障等。目前對于該藥的作用機理的研究局限于一般情況的觀察、給藥后對晶狀體上皮細(xì)胞的影響等。本實驗在吡諾克辛鈉滴眼液研究現(xiàn)況的基礎(chǔ)上,結(jié)合臨床檢測指標(biāo)和藥效學(xué)檢測指標(biāo),進一步研究其對糖尿病白內(nèi)障大鼠的干預(yù)作用,為臨床上使用吡諾克辛鈉滴眼液治療糖尿病白內(nèi)障提供科學(xué)的依據(jù)和指導(dǎo)。1材料和方法1.1實驗大鼠血糖檢測Wistar大鼠30只,體質(zhì)量(200±10)g,雌雄各半,由吉林大學(xué)動物中心提供[合格證號:SCXK-(吉)2011-0004]。實驗前檢測大鼠血糖均處于正常范圍。手持裂隙燈檢查大鼠晶狀體未見異常。1.2復(fù)方托吡卡胺滴眼液、吡諾克辛鈉滴眼液STZ[(Aladdin試劑(上海)有限公司],復(fù)方托吡卡胺滴眼液(長春迪瑞制藥有限公司),吡諾克辛鈉滴眼液(武漢遠(yuǎn)大天天明制藥有限公司)。1.3儀器、血糖段分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司),血糖儀、血糖試紙(北京康達百年生物科技有限公司);高速臺式冷凍離心機(北京時代北利離心機有限公司);酶標(biāo)儀(上海普林休斯頓生物科技發(fā)展有限公司)。1.4枸杞酸-枸杞酸鈉緩沖溶液的制備STZ溶液:精確稱取枸櫞酸2.1g溶于100mL蒸餾水中,枸櫞酸鈉2.94g溶于100mL蒸餾水中,以體積比1∶1.32的比例混合,用pH試紙調(diào)pH值為4.0~4.5,即為枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖溶液。精密稱取STZ1.00g溶于上述緩沖液中即為所需STZ溶液,實驗前新鮮配制。1.5實驗方法1.5.1小組1.5.2血糖檢測模型組和治療組大鼠分別一次性腹腔注射STZ溶液65mg·kg-1,空白組大鼠腹腔注射同等劑量的緩沖溶液。7d后,大鼠尾靜脈針刺取血,測定空腹血糖值>16.7mmol·L-1者納入實驗。模型組大鼠給予空白基質(zhì)滴眼,治療組大鼠給予吡諾克辛鈉滴眼液滴眼,每天2次,連續(xù)12周。1.5.3測試指標(biāo)和方法1.5.3.大鼠體質(zhì)量測定實驗過程中,每日觀察大鼠飲水、飲食量和尿量的變化,每周稱量并記錄大鼠體質(zhì)量;每2周大鼠尾端酒精消毒后針刺取血,滴于血糖試紙上準(zhǔn)確反應(yīng)10s,記錄血糖值,監(jiān)測末梢血糖變化,將血糖<16.7mmol·L-1的大鼠剔除實驗。1.5.3.濁度的測定復(fù)方托吡卡胺滴眼液點眼1次,10min后用手持裂隙燈觀察大鼠晶狀體混濁程度并記錄。分級標(biāo)準(zhǔn)如下:0級透明晶狀體;Ⅰ級輕度混濁,晶狀體周邊出現(xiàn)空泡;Ⅱ級中度混濁,晶狀體周邊空泡向中心擴展,核出現(xiàn)霧狀混濁;Ⅲ級高度混濁,空泡擴展到核區(qū),核區(qū)霧狀混濁加重;Ⅳ級核混濁并發(fā)展為成熟白內(nèi)障。1.5.3.3.血液指標(biāo)1.6anoa分析及組合用SPSS13.0軟件做統(tǒng)計學(xué)處理。組間比較采用重復(fù)測量的ANOVA、多變量ANO-VA分析,組內(nèi)比較采用One-WayANOVA分析、獨立分組TTest檢驗。2結(jié)果2.1兩組大鼠體質(zhì)量比較本實驗過程中,造模前治療組和模型組與空白組大鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05),造模后1周、4周、8周、12周兩組大鼠體質(zhì)量與空白組比較差異明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.01);造模前治療組大鼠體質(zhì)量與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.065);造模后1周、4周、8周、12周治療組與模型組大鼠體質(zhì)量比較差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.126、0.967、0.394、0.449,見表1)。模型組和治療組大鼠飲水、飲食和尿量均較空白組有明顯增加,為空白組的2~3倍。2.2各組大鼠血糖、血壓、時間對比造模前治療組和模型組與空白組大鼠的血糖值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05),造模后各時間點兩組比空白組大鼠血糖值明顯增大(P<0.01);造模前治療組大鼠血糖值與模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.561),造模后第1周、第6周、第12周與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.698、0.255、0.184),第3周和第9周與模型組大鼠比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別0.029、0.030)。此現(xiàn)象可能由個別大鼠血糖值極高或極低所致(見表2)。2.3各組大鼠布氏物理性能的比較至實驗結(jié)束,空白組大鼠晶狀體始終透明,為0級混濁;模型組大鼠晶狀體在造模后第16天發(fā)現(xiàn)有晶狀體混濁大鼠出現(xiàn);治療組在造模后第29天出現(xiàn)大鼠晶狀體混濁。至12周末,治療組與模型組比較,大鼠晶狀體混濁程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);糖尿病白內(nèi)障的發(fā)展過程見圖1。2.4總膽固醇及表現(xiàn)與空白組比較,模型組大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、尿素氮、甘油三脂、血清葡萄糖水平均顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.01),總膽固醇含量亦升高,與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);肌酐含量顯著下降,與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。治療組大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清葡萄糖含量均顯著降低,與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.01);肌酐含量略有升高,尿素氮、甘油三脂、總膽固醇水平降低,但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別為0.563、0.224、0.253、0.695(見表3)。3治療組大鼠的降血糖作用糖尿病白內(nèi)障是一種常見的由代謝性疾病引起的白內(nèi)障。患有此疾病大鼠不僅應(yīng)有糖尿病“三多一少”即飲食、飲水和尿量增多,體質(zhì)量減少的表現(xiàn),還應(yīng)有晶狀體的病變。本研究中,除對大鼠體質(zhì)量、飲水、飲食和尿量的變化詳細(xì)記錄外還對大鼠晶狀體的變化進行實時觀察,并對大鼠血液中一些客觀指標(biāo)進行測定。血糖是檢測大鼠是否為糖尿病大鼠的指標(biāo)之一,血糖的檢測以確定大鼠的血糖水平,同時便于及時剔除不符合條件的大鼠。長期的糖尿病患者除有眼部并發(fā)癥外,肝臟、腎臟功能也會受到影響。因此本實驗通過大鼠血液檢查,主要對糖尿病大鼠的肝、腎功能進行了檢測。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是衡量肝功能受損情況的一項指標(biāo),轉(zhuǎn)氨酶存在于肝細(xì)胞的線粒體中,只要肝臟發(fā)生炎癥、壞死和中毒等,轉(zhuǎn)氨酶在血液中的含量就會升高。本實驗中,模型組大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著升高,表明模型組大鼠肝臟功能受到一定程度的損害,而治療組大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性下降,表明吡諾克辛鈉滴眼液對大鼠肝臟具有一定的保護作用。肌酐與尿素氮是衡量腎功能的一項指標(biāo),當(dāng)腎功能發(fā)生障礙時,代謝廢物不能夠排出體外,以致大量含氮廢物和其他毒性物質(zhì)在體內(nèi)積累,內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)被破壞,肌酐和尿素氮水平將升高。本實驗中,模型組大鼠肌酐、尿素氮水平顯著升高,而治療組大鼠血清中肌酐、尿素氮含量沒有顯著下降,表明吡諾克辛鈉滴眼液對腎臟保護作用輕。甘油三脂和總膽固醇是衡量血液中血脂水平的一項指標(biāo),兩個指標(biāo)都升高對人體的損害屬于隱匿且危險的類型,導(dǎo)致的直接損害就是加速全身動脈硬化,包括眼動脈硬化,導(dǎo)致眼局部缺血使晶狀體營養(yǎng)不足,白內(nèi)障形成。本實驗中,模型組大鼠血清中甘油三脂、總膽固醇含量明顯上升,增加了患白內(nèi)障的風(fēng)險,而治療組大鼠血清中甘油三脂、總膽固醇含量與模型組大鼠雖然沒有顯著差異,但是有下降趨勢,表明該藥具有平衡血脂,抑制白內(nèi)障發(fā)生的作用。另外,本實驗研究發(fā)現(xiàn)該藥滴眼給藥后能明顯降低糖尿病大鼠的血糖。綜上所述,本實驗研究揭示了吡諾克辛鈉滴眼液對糖尿