MCVRBC脆性靈敏度特異度-廣州醫(yī)科大學(xué)教育技術(shù)中心課件

血液學(xué)指標﹑Hb電泳、RBC脆性

在地貧患者與缺鐵性貧血的診斷價值

醫(yī)學(xué)檢驗系2005屆李藹文

指導(dǎo)老師：孫筱放李少英

廣州市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科研究室

畢業(yè)論文11/27/20231摘要目的

探討紅細胞的MCV，MCH，MCHC，RDW等血液學(xué)指標、紅細胞脆性、HB電泳，對地中海貧血患者及缺鐵性貧血的診斷價值。方法

健康對照組30例;地中海貧血患者100例(其中α地中海貧血患者60例，β地中海貧血患者40例)，缺鐵性貧血30例。全部用血細胞計數(shù)儀儀血常規(guī)測定、紅細胞脆性的檢測、血紅蛋白電泳儀進行血紅蛋白電泳分析、地貧基因檢測、血清鐵蛋白檢測。結(jié)果

病人組血紅蛋白電泳HBA，HBA2，HBF異常，其MCV，紅細胞脆性均降低，與正常對照組比較有顯著差異（P<0.05），MCV，RBC脆性對地貧的靈敏度和特異度分別為為98%，93%及77%，80%。HBA2對α地貧，β地貧靈敏度分別為83.3%,95%。而RDW基本正常,靈敏度為73%，但缺鐵性貧血的RDW升高，靈敏度為70%。結(jié)論1.MCV，血紅蛋白電泳，紅細胞脆性應(yīng)用對地貧有診斷意義，可作為其簡單，方便，快速，較準確的篩查方法；2.對于缺鐵性貧血

，RDW可作為先于血清鐵蛋白的初篩試驗，值得推廣應(yīng)用。2關(guān)鍵詞地中海貧血；MCV；MCH；RDW；紅細胞脆性；血紅蛋白電泳

3英文摘要

[Abstract]ObjectiveTOstudythevalueofmeancorpuscularvolume(MCV),meancorpuscularhemoglobin(MCH),meancorpuscularHemoglobinconcentration(MCHC),redbloodcellvolumedistributionwidth(RDW),redcellosmoticfragilitytest(RCOF)andHemoglobinelectrophoresisforthediagnosisofthalassemiaandtocomeparewithIDA.Methods30samplesofthehealthypeoplewithoutIDAorortheranemia,and60samplesofα-thalassemia,40samplesofβ-thalassemia,30samplesofIDA,weredetectedbyhermoatologyanalyzer,redcellosmoticfragilityandHbelectrophoresis,genes’testofthalassemia.4

ResultBytheHbelectrophoresis,patients’HbA,HbA2,HbFwerechanged,MCV,RCOFwerealsodecending,havingobviousdiffenercecomparedwithhealthypeople(P<0.05),thesensitivityoftestwereasfollow:MCVwas96%,HBA2was83.3%forαthalassemia,95%forβthalassemia.RDWbelongednormalrange,it’ssensitivitywas77%.However.IDA’sRDWascended,andit’ssensitivityforIDAwas70%.ConclusionThetestofMCV,RCOFandHbelectrophoresisincreasesthesensitivityinthediagnosisofthalassemia,beingabletobecomesample,quick,truetestsofbolting,IDAandThalassemiaarediffentfromRDW,andRDWcanbeusedtoasascreeningmethodbeforethemeasurementofserumferritin,suittobeusedwidely.5[Keywords]Thalassemia;MCV;MCH;MCHC;RDW;redcellosmoticfragility;

Hemoglobinelectrophoresis.6正文地中海貧血（簡稱地貧），是我國南方常見的遺傳性溶血性疾病，該病系遺傳的珠蛋白基因缺失或突變，使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈合成缺如或不足所致。廣東省統(tǒng)計，在70338人群中，α-地貧雜合子為7.3%[12],它除了有輕度貧血，或比較容易疲勞外，一般無明顯癥狀，但當(dāng)他們的配偶也為同一種類型的地貧雜合子時，就有可能出現(xiàn)由于基因缺失導(dǎo)致妊娠晚期死胎或新生兒死亡。β-地貧為單基因隱性遺傳病，146994人中β-地貧雜合子為1.83%--3.36%[12]，若父母均為輕型地貧攜帶者時，可育出重型β-地貧患兒。重型β-地貧患兒，長期靠輸血為生，到一定年齡也會死亡。7基因診斷雖能明確診斷，但耗時長，費用高，一般基層單位難以做到。若能用簡單，快速，方便，較準確的方法，在婚前、孕前檢查中篩查出地貧雜合子攜帶者，則盡早對婚育青年進行優(yōu)生指導(dǎo)，制定產(chǎn)前診斷的措施，避免重型地貧患兒的出生。小細胞低色素貧血的分類指標（MCV，MCH，MCHC），RDW，RBC脆性，血紅蛋白電泳這幾種方法對地中海貧血貧血敏感性與特異性不同，因此對它們的測定值進行分析對比，以評價它們在地中海貧血診斷過程的不足及其臨床價值。由于缺鐵性貧血與地貧均屬小細胞貧血，故引入RDW作比較，并且可探討是否可優(yōu)于血清鐵蛋白作為缺鐵性貧血初篩試驗的指標。

8對象與方法一、對象

共160例，其中正常對照30例，為健康體檢者，血常規(guī)及血清鐵蛋白均正常的人群，用基因診斷確診α地中海貧血患者60例，β地中海貧血患者40例，用血清鐵蛋白確診缺鐵性貧血患者30例。9

二、方法與診斷指標1．MCV，MCH，MCHC，RDW測定：取EDTA-K2抗凝靜脈血2ML，采用美國COULTERMICRODIFF型全自動血細胞計數(shù)儀進行測定。每日用該公司提供的室內(nèi)血細胞全血質(zhì)控物進行質(zhì)控。正常參考值MCV82—94fl,MCH26—32pg,MCHC318—345,RDW11.6—14.6%.2.紅細胞脆性試驗：采用中山醫(yī)科大學(xué)遺傳教研室的紅細胞脆性一管定量法試劑，每批檢測均設(shè)正常對照，選取血常規(guī)檢測中MCV，MCH，MCHC均正常的全血標本作正常對照。正常值為溶血百分率>60%.103.血紅蛋白電泳：取EDTA或肝素抗凝全血2ML，采用美國HELENALABORATORIES公司spife3000型全自動電泳儀進行血紅蛋白電泳分析。正常參考值成人男女HBA22.5—3.5%,HbA>95%,HbF<2%,沒有異常血紅蛋白帶出現(xiàn)。4．血清鐵蛋白檢測：取空腹不抗凝血3ML采用固相放免法，正常參考值成人男性15-200微克每升，成人女性12-150微克每升。5．地貧的基因診斷：提取外周血白細胞DNA后，а珠蛋白基因分析采用深圳益生堂生物試劑，應(yīng)用單管四重PCR擴增后再行瓊脂糖電泳檢測。в珠蛋白基因分析采用深圳益生堂生物試劑，用膜反向雜交技術(shù)，采用24條探針，同時檢測中國人群常見的8個位點和9個少見的位點突變（41-42，654，28，71-72，17，31，27/28點突變）。11SpifeAlkalineHemoglobin操作點樣全自動血紅蛋白分析儀固定染色12電泳瓊脂片與掃描定量不同類型電泳區(qū)帶正常電泳掃描圖13β-地貧基因膜雜交結(jié)果判定●●●●●●●41-42N41-42M654N654M-28N-28M71-72N71-72M17N17MBENBEN31N31M43M-32M-29M-30M14-15MCAPIntM27/28MIVS1-1MIVSA-5M14三、數(shù)據(jù)檢測分析：

1.

根據(jù)全國臨床檢驗操作規(guī)程，血液學(xué)指標中的MCV臨界值為82fl，RBC脆性的臨界值為60,因此，表5，6中的MCV陽性數(shù)和敏感數(shù)均為<82fl,陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為?82，RBC脆性陽性數(shù)和敏感數(shù)均為<60,陰性數(shù)和不敏感數(shù)均為?60。

2.

診斷檢測評價指標：靈敏度=a/(a+c)*100%,特異度=d/(b+d)*100%,其中a為檢測方法檢測地貧患者的陽性數(shù)，b為檢測方法正常組的陽性數(shù)，c為檢測方法檢測地貧患者的陰性數(shù)，d檢測方法正常組的陰性數(shù)。3.卡方檢驗公式：X2=（AD-BC）2*（A+B+C+D）/（A+B）（C+D）（A+C）（B+D），若B+C<40時，需對其X2值進行效正，其效正公式為X2=(│B-C│-1)/B+C15

四、統(tǒng)計學(xué)方法采用獨立樣本T檢驗，比較同一種方法正常與異常的均值及有沒有顯著差異。采用X2（卡方）檢驗，比較兩種方法靈敏度是否一致。

16結(jié)果1，

1.各種方法檢測正常人，地貧（α1-地貧α雜合子，靜止型α地貧，HbH病，β地貧），缺鐵的均值與標準差，及各自與正常值比較有無顯著性差異（P>0.05—無顯著性差異，P<0.05—有顯著性差異），見表1，2。2，

2.從表3，4，5可得RDW對缺鐵性貧血的靈敏度為70%,MCV對地貧的診斷靈敏度為98%，特異度為93%，RBC脆性對地貧的靈敏度為77%，準確度為80%，HBA2對α地貧,β地貧的診斷靈敏度分別為83.3%,95%。3.從表6可根據(jù)卡方檢驗P〈0.05,認為MCV與RBC脆性對地貧診斷有差異，MCV靈敏度高于RBC脆性

17

表1各組血液學(xué)指標結(jié)果比較（x±s，P）

MCV

MCH

MCHC

RDW

HBA2

脆性nx±spx±spx±spx±spx±spx±sp正常人3088.1±2.529.4±1.3333±9.412±2.43.1±0.370±4.4

地貧10066.5±10.40.0024.2±170.10316±580.1213.0±2.10.123.8±0.70.0441.7±12.40.00

缺鐵3069.6±7.50.0022..8±2.90.00321±48.50.2215.5±3.00.003.02±0.90.6263±7.60.0718表2不同類型а地貧及в地貧的血液學(xué)指標及比較

MCV(fl)

MCH(pg)

MCHC

HBA2nx±spx±spx±spx±sp正常人3088.1±2.529.4±1.3333±9.43.1±0.3

α1-地貧4474.4±8.20.0024.3±30.00322.2±14.90.012.15±0.690.04α雜合子靜止型α1074.4±8.20.0024.32±3.10.00328.6±21.90.52.68±0.170.06地貧HbH病664±4.70.0020.6±2.80.00321±5.650.001.19±0.490.00

β地貧4064.4±5.90.0021.1±2.10.00328±14.10.195.1±1.30.00

19表3RDW單項檢測地貧與缺鐵的結(jié)果

組別RDW>14.611.6<RDW<14.6合計地中海貧血2377100缺鐵性貧血21930

20表4HBA2單項檢測地貧的結(jié)果

組別<2.52.5-3.5>3.5 合計正常對照組 126 330α-地中海貧血50 10 060β-地中海貧血023840

21表5MCV﹑RBC脆性單項檢測地貧的結(jié)果

MCV

RBC脆性

靈敏度

特異度

組別 總例數(shù)陽性數(shù)陰性數(shù)陽性數(shù)陰性數(shù)MCV脆性MCV脆性地貧組10098（a）2(c)77(a)23(c)正常組302（b）28(d)8(b)24(d)98%77%93%80%

22表6MCV﹑RBC脆性對100例地貧的各自診斷價值

RBC脆性

MCV+-合計х2P+77（A）21(B)98-0(C)2(D)2合計7723100190.00

23討論小細胞低色素貧血是由于珠蛋白合成障礙（血紅蛋白?。┗蛉辫F不足引起血紅蛋白合成障礙（缺鐵性貧血）所致，地貧與缺鐵性貧血均屬小細胞低色素貧血。在我國地貧主要分布于海南，廣東，廣西，湖南，湖北，江西，四川，貴州，云南等省，是現(xiàn)階段我國南方地區(qū)常見的遺傳性疾病之一。地貧是由于珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致珠蛋白肽鏈合成障礙，α或β鏈失衡的遺傳性血紅蛋白病。除HB成分改變外，幼紅細胞利用鐵也發(fā)生障礙，呈小細胞低色素性,地貧MCV，MCH均降低，但RDW多為正常，這與同是小細胞低色素貧血的缺鐵性貧血性不同。另外，由于多余的珠蛋白鏈沉附于胞膜內(nèi)面，使紅細胞變得僵硬，故紅細胞對滲透溶解的抵抗性增加（即脆性降低）。血紅蛋白電泳作進一步分析，若HBA2<2.5%可作α基因分析了解類型和HBA2>3.5%可作β基因分析了解類型。24近年來由于全自動血細胞分析儀的推廣應(yīng)用，國內(nèi)外學(xué)者對MCV及RDW的認識不斷加深，MCV,RDW用于IDA的篩查屢有文章報道[7]，1983年Bassmen[1,2]等報道MCV，RDW對不同病因所致的貧血可進行新的形態(tài)學(xué)分類，該法根據(jù)MCV，RDW二個參數(shù)實驗結(jié)果將貧血分為小細胞均一性，小細胞不均一性等六項[6]。用此分類法分類：地貧屬于小細胞均一性貧血（MCV↓/RDW正常），IDA屬小細胞不均一性貧血（MCV↓/RDW↑）[3]。從表1可看出缺鐵性貧血MCV↓（P<0.05）RDW↑(P<0.05),與正常對照比較有顯著差異，而地貧RDW正常，與正常對照比較沒有顯著差異（P>0.05）。因此地貧可從外周血血液指標與缺鐵性貧血鑒別。而RDW對缺鐵的靈敏度為70%,可作為先于血清鐵蛋白對缺鐵的初篩指標，為病人省下不少的抽血麻煩。25從表1看MCH，MCHC，RDW，對地貧的篩選與正常比較沒有顯著性差異（P>0.05），敏感性不十分理想。而MCV，紅細胞脆性測定值與正常比較有明顯的顯著性差異（P<0.01），HBA2的P值在0.01--0.05之間，也存在一定的差異。因此，結(jié)合MCV，RBC脆性與血紅蛋白電泳的三項檢查可減少漏診，而且MCV對地貧的靈敏度為96%，特異度為93%，（見表5）所以MCV降低是地貧患者的特征之一。且目前國內(nèi)外已較普遍應(yīng)用MCV為首選篩查地貧攜帶者[4,9]，它的結(jié)果在血細胞分析時可一次獲取，符合出篩的指標。

26分析表2結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，а1地貧а雜合子從血液學(xué)檢查MCV，MCH，MCHC結(jié)果看，均有不同程度的降低，且有顯著性差異，靜止型а地貧由于只有一個基因缺失，從外觀上難以發(fā)現(xiàn)，通過MCV，MCH可以看出降低，但MCHC屬于正常范圍下限特異性不高，HBA2不太明顯，與正常人比較沒有顯著性差異。HBH病由于缺失三個基因，貧血嚴重，MCV，MCH，MCHC均明顯降低，HBA2<2.5%,可見快速帶。這提示了基因受損程度與紅細胞之間有對應(yīng)的關(guān)系。同時也表明應(yīng)用血紅蛋白電泳檢測對血紅蛋白H病能進行有效的診斷，但對靜止型а地貧不能進行有效診斷，符合血液研究[10]。在в地貧中，電泳區(qū)帶明顯異常，HbA2>3.5%,MCV，MCH均降低有顯著差異。從表4看出，HBA2對α地貧,β地貧的診斷靈敏度分別為83.3%,95%，β-地貧的診斷價值較高。

27RBC脆性試驗操作簡單且經(jīng)濟，考慮醫(yī)院經(jīng)濟影響，在某些基層單位缺乏血細胞分析儀的情況下不失為一種篩查方法。然而，從表5可看出RBC脆性對地貧的靈敏度為77%，特異度為80%，低于MCV對地貧的靈敏度與特異度，通過表6卡方檢驗可顯著地發(fā)現(xiàn)MCV的診斷價值優(yōu)于RBC脆性（卡方檢驗得P〈0.001〉,且在貧血嚴重的標本由于溶血產(chǎn)生的紅細胞碎片或網(wǎng)織紅細胞增加[8]，或標本不新鮮影響RBC脆性的結(jié)果，且是手工操作，易產(chǎn)生假陰性>60，使一部分地貧攜帶者沒被檢查出來，會導(dǎo)致地貧患兒的出生造成嚴重的后果，因此建議在婚檢中取消RBC脆性。28從上面表1，2可看出過去人們一直把MCV，MCH，MCHC三項指數(shù)作為貧血類型的分類（大細胞貧血，正細胞貧血，小細胞貧血），但實踐證明MCHC的意義不大，不能全面反映紅細胞的病理變化。也有文章報道MCV，血紅蛋白電泳，紅細胞脆性聯(lián)合檢測地貧[11]，但從表3，4，5，6可看出MCV，HBA2各自對地貧的靈敏度頗高，單獨作為對地貧的診斷有一定的價值。而在小細胞低色素貧血中，缺鐵性貧血RDW一般升高，有助于缺鐵的快速篩選及與地貧的比較。血清鐵蛋白是早期缺鐵性貧血實驗診斷的金指標，但再抽血，需要放免儀器或生化儀器，許多基層無法開展。所以用RDW是一個廉價，快速而又靈敏度較高的指標，應(yīng)在基層給予推廣。因此臨床醫(yī)