造血細(xì)胞檢驗(yàn)方法：血象檢查及細(xì)胞化學(xué)染色

第三章造血細(xì)胞檢驗(yàn)方法

第一節(jié)造血細(xì)胞形態(tài)學(xué)第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色第三節(jié)骨髓活體組織檢驗(yàn)（自學(xué)）第四節(jié)血細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)檢驗(yàn)（自學(xué)）第五節(jié)造血祖細(xì)胞培養(yǎng)檢驗(yàn)（自學(xué)）第六節(jié)血細(xì)胞遺傳學(xué)檢驗(yàn)（自學(xué)）第七節(jié)分子血液學(xué)檢驗(yàn)（自學(xué)）下一頁(yè)目的要求第一節(jié)血象及骨髓象檢驗(yàn)正常血細(xì)胞形態(tài)學(xué)

血象檢驗(yàn)骨髓象檢驗(yàn)二、血象檢驗(yàn)血涂片檢驗(yàn)步驟及內(nèi)容血涂片檢驗(yàn)的重要性（一）血涂片檢驗(yàn)步驟及內(nèi)容計(jì)數(shù)與分類

至少100個(gè)有核細(xì)胞，同時(shí)注意各種細(xì)胞的形態(tài)，并要全片觀察血涂片中其他部位（尤其尾部等血膜邊緣部位）計(jì)算結(jié)果

計(jì)算出各階段細(xì)胞的百分比，并填入骨髓報(bào)告單的血涂片欄中血涂片特征描述

一般需要描述涂片中有核細(xì)胞總數(shù)情況，以何種細(xì)胞為主，血細(xì)胞形態(tài)如何，有無(wú)寄生蟲(chóng)及其他明顯異常細(xì)胞等各系細(xì)胞觀察內(nèi)容粒系：NEU數(shù)量及形態(tài)，如有無(wú)原粒、幼粒、棒狀小體、毒性改變等形態(tài)異常淋系：LYC數(shù)量及形態(tài)，有無(wú)原淋、幼淋及異淋等單系：MON數(shù)量及形態(tài)，有無(wú)原單、幼單、棒狀小體等其他有核細(xì)胞：有無(wú)有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞、吞噬細(xì)胞等無(wú)核細(xì)胞：包括紅細(xì)胞、血小板。注意紅細(xì)胞形態(tài)、內(nèi)含物及排列方式；血小板估計(jì)數(shù)量、聚集性及形態(tài)（二）血涂片檢驗(yàn)的重要性骨髓象相似而血象有區(qū)別

如溶貧、缺鐵性貧血和急性失血等骨髓象有區(qū)別而血象相似

如傳染性淋巴細(xì)胞增多癥和慢，但前者骨髓中淋巴細(xì)胞稍增多，而后者骨髓中淋巴細(xì)胞卻明顯增多。骨髓象變化不顯著而血象有顯著異常

如傳單骨髓象有顯著異常而血象變化不顯著

如骨髓瘤、脂質(zhì)代謝障礙性疾病血象中細(xì)胞較骨髓中細(xì)胞成熟

較易辨認(rèn)，輔助白血病細(xì)胞類型的判斷第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色

CytochemicalStains細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門(mén)科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)的原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)作定性、定位、半定量分析的方法。以前稱為組織化學(xué)染色（簡(jiǎn)稱組化）細(xì)胞化學(xué)染色的作用輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟固定：包括蒸汽、液體固定，如甲醛、甲醇、乙醇等顯示：即有色的沉淀反應(yīng)。包括偶氮偶聯(lián)法（酶）、普魯

士藍(lán)反應(yīng)（鐵）、雪夫反應(yīng)（糖類）、聯(lián)苯胺法等復(fù)染：目的是顯示各種細(xì)胞而便于辨認(rèn)。選擇原則：復(fù)染

液與沉淀的顏色有明顯的反差。如藍(lán)色沉淀→中性

紅、核固紅，紅色沉淀→甲基綠、美蘭細(xì)胞化學(xué)染色的種類鐵染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過(guò)氧化物酶染色蘇丹黑染色酯酶染色過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)酸性磷酸酶染色貧血組合：鐵染色NAP染色PAS染色4Fe3++3K4[Fe（CN）6]Fe4[Fe（CN）6]3+12K+骨髓中鐵亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵↓（普魯士藍(lán)）一、鐵染色—原理

（ferritinstain）酸性正常人骨髓中的貯存鐵主要存在于骨髓小粒（細(xì)胞外鐵）和中晚紅細(xì)胞（細(xì)胞內(nèi)鐵）中鐵染色的結(jié)果判斷結(jié)果判斷：陽(yáng)性產(chǎn)物為藍(lán)色沉淀復(fù)染：中性紅或核固紅骨髓鐵：分為細(xì)胞外鐵和細(xì)胞內(nèi)鐵下一頁(yè)細(xì)胞外鐵的結(jié)果判斷（-）無(wú)蘭色顆粒（+）有少量鐵顆粒和鐵小珠（++）有多量鐵顆粒和鐵小珠（+++）有許多鐵顆粒和鐵小珠，有少量鐵小塊（++++）有極多鐵顆粒和鐵小珠，有許多鐵小塊細(xì)胞外鐵（－）細(xì)胞外鐵－顆粒細(xì)胞外鐵－小珠、塊細(xì)胞外鐵－顆粒、小珠、塊細(xì)胞外鐵－陰性、4＋、污染鐵細(xì)胞內(nèi)鐵的結(jié)果判斷Ⅰ型鐵顆粒1～2顆Ⅱ型鐵顆粒3～5顆Ⅲ型鐵顆粒6～10顆或粗顆粒1～4顆Ⅳ型鐵顆粒＞10顆或粗顆粒＞5顆環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞（ringedsideroblast）：鐵顆粒在5顆以上，其中圍繞核周排列1/3以上觀察

100個(gè)

中幼、晚幼紅細(xì)胞，計(jì)算出細(xì)胞內(nèi)鐵陽(yáng)性率鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞吞噬細(xì)胞鐵（彌散、顆粒、小珠、塊狀）吞噬細(xì)胞內(nèi)的鐵鐵染色的參考范圍細(xì)胞外鐵（+）～（++），2/3為（++）細(xì)胞內(nèi)鐵:陽(yáng)性率為12%～44%以Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型鐵染色的臨床意義缺鐵性貧血：外鐵(-)、內(nèi)鐵為0或↓↓鐵粒幼細(xì)胞貧血：外鐵↑↑、內(nèi)鐵↑↑。環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞↑＞15%骨髓增生異常綜合征：RARS其環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞＞15%，細(xì)胞外鐵也常增加其他：溶貧、巨幼貧、再障、多次輸血后和白血病等），外鐵、內(nèi)鐵↑或N；感染、肝硬化、尿毒癥等，外鐵↑而內(nèi)鐵↓二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色－－原理

(neutrophils)alkalinephosphatase，NAP/AKP

觀察100個(gè)

中性成熟粒細(xì)胞，標(biāo)本為新鮮血片磷酸萘酚鈉堿性磷酸酶萘酚重氮鹽PH9.6左右有色沉淀NAP的染色結(jié)果結(jié)果:出現(xiàn)紅色顆粒，僅存在中性成熟粒細(xì)胞中結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)及分級(jí):（-）胞漿淡藍(lán)色，無(wú)紅色顆粒（+）胞漿中有少量紅色顆粒，但不超過(guò)胞漿總面積的1/4（++）胞漿中有較粗的紅色顆粒，占胞漿總面積的1/4～1/2（+++）胞漿中基本上充滿紅色顆粒，但密度較低（++++）胞漿中充滿粗大紅色顆粒而呈深紅色，甚至掩蓋核NAP的積分計(jì)算（-）0分10個(gè)0×10＝0分（+）1分20個(gè)1×20＝20分（++）2分40個(gè)2×40＝80分（+++）3分20個(gè)3×20＝60分（++++）4分10個(gè)4×10＝40分NAP陽(yáng)性率為90%，積分200分陰性陽(yáng)性嗜酸性粒細(xì)胞單核淋巴1+2+3+4+NAP的參考值及臨床意義參考值:積分為30～130分（不需記）臨床意義：NAP↑：感染、再障、淋巴瘤、急淋、MPD等NAP↓：CML、PNH、急粒等類白呈強(qiáng)陽(yáng)性類白CML呈陰性慢粒五、過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)(糖原染色)－－原理

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）

過(guò)碘酸(periodicacid)乙二醇基雙醛基(-CHOH-CHOH)(-CHO-CHO)

有色品紅無(wú)色品紅（shiff）PAS正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)-紅色

粒系：分化好的原粒至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，并隨著細(xì)胞的成熟而逐漸增強(qiáng)，陽(yáng)性呈彌散性、細(xì)顆粒狀；嗜酸性顆粒呈陰性（間質(zhì)陽(yáng)性），嗜堿性顆粒呈陽(yáng)性單系分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，其他陽(yáng)性，絕大多數(shù)陽(yáng)性呈細(xì)顆粒狀淋系：大多數(shù)呈陰性，陽(yáng)性率常＜20％，呈粗顆?；驂K狀巨系均呈陽(yáng)性，呈顆粒狀或塊狀紅系：均呈陰性PAS染色2：小淋巴細(xì)胞呈陽(yáng)性，呈顆粒狀（較粗）PAS染色1：1中性中幼粒細(xì)胞，呈彌散及顆粒狀陽(yáng)性（較弱）；2中性成熟粒細(xì)胞，呈強(qiáng)陽(yáng)性；3幼紅細(xì)胞，呈陰性；4淋巴細(xì)胞，呈陰性巨核細(xì)胞呈陽(yáng)性PAS的臨床意義鑒別紅系良惡性疾病：紅系惡性疾病中紅系可陽(yáng)性（包括紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征），紅系良性基本陰性輔助鑒別急性白血病類型：ALL呈粗顆粒狀或塊狀；急粒呈彌散紅色或細(xì)顆粒狀；急單：呈細(xì)顆粒狀其他細(xì)胞：轉(zhuǎn)移性腺癌、戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽(yáng)性，尼曼-匹克細(xì)胞、Reed-Sternberg細(xì)胞陰性或弱陽(yáng)性PAS染色：1和2為有核紅細(xì)胞，呈陽(yáng)性；其他有核紅細(xì)胞呈陰性PAS染色：原始及幼稚淋巴細(xì)胞均陽(yáng)性，呈粗顆粒狀、、塊狀陽(yáng)性急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色：淋巴瘤細(xì)胞均陽(yáng)性，呈粗顆粒狀、塊狀陽(yáng)性淋巴瘤細(xì)胞白血病PAS染色：急單，細(xì)顆粒狀急單：細(xì)顆粒狀PAS染色：急粒急性粒細(xì)胞白血病PAS染色：M3PAS染色：M3急性早幼粒細(xì)胞白血病尼曼-皮克細(xì)胞呈弱陽(yáng)性尼曼-皮克細(xì)胞通常同時(shí)做酒石酸抑制試驗(yàn)毛細(xì)胞的陽(yáng)性不被酒石酸抑制磷酸AS-BI萘酚ACPAS-BI萘酚六偶氮付品紅紅色沉淀六、酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色acidphosphatasestain,ACPACP染色的正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板均呈陽(yáng)性淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均呈陽(yáng)性

ACP染色的臨床意義毛細(xì)胞白血病:毛細(xì)胞呈陽(yáng)性，