Hela細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

HeLa細(xì)胞的傳代培育

教學(xué)目標(biāo)1.理解細(xì)胞傳代培育的概念和原理2.能依據(jù)操作規(guī)程進(jìn)展細(xì)胞傳代培育的操作

細(xì)胞傳代培育的概念概念：指細(xì)胞從一個(gè)培育瓶以1:2或其他比率轉(zhuǎn)移，接種到另外的培育瓶中的培育，也叫做繼代培育。HeLa細(xì)胞是一種貼壁生長的細(xì)胞，在進(jìn)展傳代時(shí)通常是承受胰蛋白酶消化，把細(xì)胞分散成單細(xì)胞再傳代。

培育細(xì)胞一代生長過程試驗(yàn)前預(yù)備

1、材料：HeLa細(xì)胞2、試劑：0.25％胰蛋白酶、1640培育基〔含10％小牛血清〕、PBS試驗(yàn)前預(yù)備超凈工作臺(tái)CO2培育箱倒置顯微鏡3.儀器設(shè)備離心機(jī)恒溫水浴鍋3.儀器設(shè)備試驗(yàn)前預(yù)備培育瓶，移液管，酒精燈，酒精棉球，試管架，記號(hào)筆等。3.儀器設(shè)備試驗(yàn)前預(yù)備〔1〕細(xì)胞培育用的器材和試劑滅菌；〔2〕超凈工作臺(tái)預(yù)備〔75%酒精擦拭臺(tái)面，紫外燈照射30min〕；〔3〕試劑預(yù)熱〔37℃水浴鍋〕；〔4〕操作人員預(yù)備〔75%酒精擦拭雙手等〕。4.試驗(yàn)前預(yù)備工作試驗(yàn)前預(yù)備細(xì)胞生存環(huán)境：無菌、無毒細(xì)胞傳代操作1、倒去培育瓶中的舊培育液，參與2-3mL預(yù)熱的PBS液，輕輕振蕩漂洗細(xì)胞，以除去懸浮在細(xì)胞外表的碎片。吸除培育液細(xì)胞傳代操作

2、胰蛋白酶消化：參與適量0.25％胰蛋白酶消化液，37℃消化，留意消化液的量以蓋住細(xì)胞最好。

加消化液細(xì)胞傳代操作

3、蓋緊瓶蓋，放在倒置鏡下觀看細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞漸漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將消化液棄去，參與適量預(yù)熱后的培育液終止消化?！惨话阆瘯r(shí)間約為2-3分鐘〕。

消化前細(xì)胞消化后細(xì)胞〔適度狀態(tài)〕吸除消化液細(xì)胞傳代操作

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液。吹打成細(xì)胞懸液分裝細(xì)胞傳代操作

5、以1：2或1：3進(jìn)展分裝，補(bǔ)充新穎培育基，并在培育瓶上做好標(biāo)記，注明代號(hào)、日期，輕輕搖勻，置于37℃CO2培育箱培育〔假設(shè)瓶蓋不帶通氣孔，則需將瓶蓋旋開半圈〕。24h后即可對(duì)細(xì)胞的生長狀況進(jìn)展觀看記錄。當(dāng)細(xì)胞長成單層后即可用于接種或凍存。試驗(yàn)操作留意事項(xiàng)1.用電安全2.操作儀器安全3.準(zhǔn)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)記錄HeLa細(xì)胞傳代培育試驗(yàn)原理細(xì)胞在培育瓶長成致密單層后，已根本上飽和，為使細(xì)胞能連續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必需進(jìn)展傳代〔再培育〕。

傳代培育也是一種將細(xì)胞種保存下去的方