實驗二空氣微生物的檢驗

一、實驗?zāi)康?、掌握平板沉降法空氣采樣原理及方法；2、掌握空氣中溶血性鏈球菌培養(yǎng)鑒定方法；3、掌握空氣衛(wèi)生狀況，用細菌總數(shù)以及溶血性鏈球菌總數(shù)多少來判斷。二、實驗原理與儀器1、空氣中溶血性鏈球菌主要是草綠色鏈球菌（甲型）和溶血性鏈球菌（乙型）數(shù)量的總和，鏈球菌在自然界分布廣泛，常寄居于人類鼻咽腔和腸道內(nèi)。鏈球菌種類很多，有能致病的，也有非致病的，根據(jù)鏈球菌在血平板培養(yǎng)基上得溶血特征，可以分為三類：甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、丙型溶血性鏈球菌。室內(nèi)大部分是草綠色和溶血性鏈球菌，寄居于正常人呼吸道，可通過飛沫播散到周圍空氣中，其數(shù)量與人群密度和空氣污濁度有關(guān)，衛(wèi)生學(xué)意義較大。因此常把草綠色溶血性鏈球菌和溶血性鏈球菌作為空氣衛(wèi)生監(jiān)測或空氣污染評價指標。目前國家規(guī)定的方法是固體撞擊法和自然沉降法。2、自然沉降法原理：根據(jù)空氣中攜帶有微生物氣溶膠粒子在地心引力作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上。經(jīng)37℃，24h溫箱培養(yǎng)計算出菌落數(shù)，應(yīng)以菌落形成單位cfu/皿或cfu/m3來表示。

1）顯微鏡、培養(yǎng)箱、載玻片、酒精燈、接種環(huán)、滅菌鑷子、離心機、水溶箱。

2）血瓊脂平板、匹克肉湯、滅菌生理鹽水、革蘭染色液、桿菌肽紙片。3、儀器與器材三、實驗步驟

1、樣品的采集

5個采樣點，離地面高度為1.5米，東、西、南、北、中各放置一個平皿，揭開蓋子暴露15min,扣好蓋子。2、培養(yǎng)觀察

36±1℃培養(yǎng)24h。3、菌落形態(tài)觀察及鏡檢血平板：圓形突起，針尖狀，灰白色半透明/不透明，邊緣整齊，表面光滑，周圍有溶血圈（α型和β型溶血）。

鏡檢：G+,鏈狀排列，鏈長短不一（4-8個細胞，20-30個細胞）。

β溶血性鏈球菌：血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約0.5mm~0.75mm，為圓形突起的細小菌落，周圍有2mm~4mm界限分明，無色透明的溶血圈。α型溶血（草綠色鏈球菌）：

β溶血平板觀察生化鑒定1、革蘭氏染色，陽性，G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。2、生化鑒定（1）鏈激酶試驗（溶纖維蛋白酶試驗）吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鏈球菌18-24h36±1℃肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，置于36±1℃水浴10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如24h后不溶解即為陰性。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。（2）桿菌肽敏感試驗（藥敏試驗）將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，36℃，18h，出現(xiàn)抑菌帶為陽性，（可推測為乙型溶血性鏈球菌）。四、實驗報告根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗結(jié)果進行報告。培養(yǎng)基菌落數(shù)平均菌落數(shù)東西南北中普平血平五、實驗結(jié)果分析與報告（1）溶血性鏈球菌是鑒定球菌最常用的項目，也是鑒定過程中重要的一步。（2）甲型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍部分紅細胞被破壞，呈現(xiàn)一個草綠色溶血環(huán)。（3）乙型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍紅細胞被全部破壞，呈現(xiàn)一個清楚透明的溶血環(huán)；（4）丙型溶血性鏈球菌：血平板菌落周圍無紅細胞溶解，無溶血環(huán)。（5）鏡檢革蘭陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血環(huán)，鏈激酶和桿菌肽敏感試驗陽性可報告為溶血性鏈球菌?？諝馕⑸锏男l(wèi)生標準居室內(nèi)空氣衛(wèi)生細菌學(xué)評價的參考指標（前蘇聯(lián)）夏季標準冬季標準空氣評價細菌總數(shù)（cfu/m3

）綠色和溶血性鏈球菌（cfu/m3

）細菌總數(shù)（cfu/m3

）綠色和溶血性鏈球菌（cfu/m3

）清潔空氣＜1500＜16＜4500＜36污染空氣＞2500＞36＞7000＞124空氣微生物的衛(wèi)生標準室內(nèi)空氣質(zhì)量標準（GB/T18883-2002