分子生物學(xué)學(xué)習(xí)資料：answer-ch10

10.1描述真核生物核RNA聚合酶在DEA-Sephadex中的洗脫曲線。當(dāng)1μg/mlα-amanitin存在時(shí)，洗脫曲線應(yīng)該會(huì)發(fā)生什么變化？答：洗脫曲線如圖10.2所示，其中紅線的三個(gè)峰分別表示三個(gè)RNA聚合酶（已經(jīng)標(biāo)在圖中）當(dāng)存在1ug/ml的鵝膏蕈堿時(shí)，曲線中第一個(gè)聚合酶的峰值應(yīng)該不變，而第二個(gè)和第三個(gè)峰值都會(huì)下降，這是由于這三個(gè)酶對(duì)于鵝膏蕈堿的毒性敏感程度是不一樣的，其敏感程度下圖示，由圖10.7易得此結(jié)論。10.2描述實(shí)驗(yàn)證明聚合酶I定位于細(xì)胞的核仁內(nèi)，并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：分別提取細(xì)胞核核質(zhì)中的提取物以及細(xì)胞核核仁中的提取物，進(jìn)行洗脫試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果如下圖所示，其中上圖表示細(xì)胞核核質(zhì)中的提取物的洗脫曲線，下圖上圖表示細(xì)胞核核仁中的提取物的洗脫曲線，由這兩個(gè)洗脫曲線可以看出RNA聚合酶I在細(xì)胞核核仁中的含量明顯的高于細(xì)胞核核質(zhì)中的含量，這樣就證明了聚合酶I主要存在于細(xì)胞核核仁中。10.3RNA聚合酶I在低離子濃度的情況下活性最高，而且定位于核仁內(nèi)，這些說明了聚合酶I的可能產(chǎn)物是什么？答：這證明RNA聚合酶I主要合成大分子質(zhì)量的rRNA前提物質(zhì)，例如在脊椎動(dòng)物中主要就是合成45S的RNA，從而作為合成成熟的5.8S,18S,和28SRNA的前提物質(zhì)。10.4我們?nèi)绾沃繧型聚合酶合成大的rRNA前體，II型聚合酶合成mRNA前體？描述一個(gè)簡(jiǎn)單的體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，以及書中所述實(shí)驗(yàn)。答：體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：以放射性同位素標(biāo)記的UTP以及未標(biāo)記的ATP，GTP，CTP為原料，并加入除模板和聚合酶以外的體外轉(zhuǎn)錄所需物質(zhì)，進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)。第一組中只加入I型RNA聚合酶和rRNA模板，第二組中只加入I型RNA聚合酶和mRNA模板，第三組中只加入II型聚合酶和rRNA模板，第四組中只加入II型聚合酶和mRNA模板。用同位素檢驗(yàn)?zāi)慕M由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物產(chǎn)生，即可證明。書中實(shí)驗(yàn)：分別提取動(dòng)物肝臟的細(xì)胞核基質(zhì)部分和核仁部分，做凝膠層析，分析發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核基質(zhì)部分中II型聚合酶較集中分布，說明它參與mRNA前體的合成。而在核仁部分中則是I型聚合酶集中分布，說明它們參與rRNA前體的合成。10.5描述實(shí)驗(yàn)證明聚合酶III參與tRNA和5srRNA的合成，并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：1974年，Roeder和他的同事完成了一個(gè)驗(yàn)證聚合酶=3\*ROMANIII生成tRNA和5sRNA的實(shí)驗(yàn)。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，α-蠅蕈素扮演一個(gè)很重要的角色，因?yàn)棣?蠅蕈素對(duì)三種聚合酶有著不同的作用，當(dāng)α-蠅蕈素的濃度很低時(shí)它會(huì)抑制聚合酶II的活性，但不會(huì)影響聚合酶I和III的活性，但在一百倍的高濃度情況下，α-蠅蕈素也會(huì)抑制聚合酶III的活性。Roeder和他的同事利用α-蠅蕈素的這個(gè)特性完成了驗(yàn)證聚合酶=3\*ROMANIII生成tRNA和5sRNA的實(shí)驗(yàn)，他們?cè)诓煌?蠅蕈素濃度的環(huán)境中培養(yǎng)鼠細(xì)胞核，然后電泳轉(zhuǎn)錄出來的RNA，得到這樣一個(gè)結(jié)果：在高α-蠅蕈素濃度的情況下，tRNA和5sRNA的precursor的合成被抑制。故而驗(yàn)證了聚合酶=3\*ROMANIII生成tRNA和5sRNA10.6酵母RNA聚合酶含有多少個(gè)亞基？哪些是核心酶的亞基？哪些亞基對(duì)于三種核內(nèi)RNA聚合酶是共有的？答：酵母菌RNA聚合酶II有12個(gè)亞基，核心部分為Rpb1,Rpb2和Rpb3，它們是聚合酶的“必須”以及“核心”部分。共有的5個(gè)亞基為Rpb5,Rpb6,Rpb8,Rpb10和Rpb12，參與一些合成的基本工作。10.7描述如何用表位附加方法(epitopetagging)從酵母細(xì)胞中一步純化RNA聚合酶II。答：抗體(antibodies)具有與相對(duì)應(yīng)的抗原(antigen)特異性結(jié)合的能力，這種能力是通過抗體對(duì)抗原分子的某些特征（稱為抗原決定子，如氨基酸序列、特定的化學(xué)基團(tuán)等）的識(shí)別來實(shí)現(xiàn)的。這種性質(zhì)可以用于蛋白質(zhì)（或其他化學(xué)物質(zhì)）的純化，表位附加即為其中的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。用表位附加方法從酵母細(xì)胞中一步純化RNA聚合酶II的步驟如下：(1)通過基因工程手段，在編碼RNA聚合酶II的Rpb3亞基的基因上增加一個(gè)片段，使得合成的Rpb3亞基表面具備一個(gè)可以被某種抗體特異性識(shí)別的氨基酸片段作為表位標(biāo)簽(epitopetag)；(2)將此基因轉(zhuǎn)入Rpb3

亞基基因缺陷型（即不能合成Rpb3亞基）的酵母細(xì)胞中，使之得到表達(dá)——這時(shí)，酵母細(xì)胞所合成的RNA聚合酶II的表面上便帶有了該氨基酸片段表位標(biāo)簽；(3)將細(xì)胞裂解，提取蛋白質(zhì)，加入該種抗體，抗體與表位標(biāo)簽結(jié)合，即發(fā)生免疫共沉降(immuboprecipitation)，而雜蛋白可被洗脫，從而提純了RNA聚合酶II，可供進(jìn)一步的分析研究。抗體與表位標(biāo)簽的結(jié)合和免疫共沉降過程如圖10.7所示。圖10.7用表位附加方法(epitopetagging)從酵母細(xì)胞中一步純化RNA聚合酶II示意圖10.8描述實(shí)驗(yàn)證明聚合酶中的最大亞基與DNA發(fā)生相互作用，并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：使用G11抗體（能夠與Rpb1特異性結(jié)合）與DNA競(jìng)爭(zhēng)，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)出來的產(chǎn)物作凝膠電泳。第一條帶是對(duì)照組，用不相干的抗體競(jìng)爭(zhēng)，結(jié)果未能洗脫Rpb1。第二條帶是用G11抗體競(jìng)爭(zhēng)，得到兩條帶。這兩條色帶在聚合酶單獨(dú)電泳中分別為圖示215KD，180KD處，為Rpb1的兩種形式。本試驗(yàn)說明了Rpb1能與DNA特異性結(jié)合10.9描述一個(gè)實(shí)驗(yàn)，證明RNA聚合酶II的第二大亞基含有形成核苷之間的磷酸二酯鍵的催化位點(diǎn)。并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：實(shí)驗(yàn)步驟如下：1)將一種ATP的類似物——ATP的4-苯甲酸--酯與聚合酶II結(jié)合，并用NaBH4使其形成共價(jià)鍵。2)加入同位素標(biāo)記的[-32P]UTP，與ATP類似物形成磷酸二酯鍵。3)電泳分離酶的各個(gè)亞基。用放射自顯影處理膠，檢測(cè)同位素標(biāo)記的亞基。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：第二條帶有同位素標(biāo)記，說明第二大亞基與磷酸二酯鍵的形成有關(guān)。所以第二大亞基含有形成核苷之間的磷酸二酯鍵的催化位點(diǎn)。10.10有什么證據(jù)表明，真核生物RNA聚合酶=2\*ROMANII中最大的三個(gè)亞基分別與原核生物RNA聚合酶的β’、β、α亞基同源。答：真核生物酵母菌的RNA聚合酶=2\*ROMANII中最大的三個(gè)亞基Rpb1、Rpb2、Rpb3都是RNA聚合酶=2\*ROMANII具有活性所必需的。這三個(gè)亞基分別與大腸桿菌RNA聚合酶的β’、β、α亞基同源，有如下證據(jù)。從結(jié)構(gòu)上說，酵母菌Rpb1與大腸桿菌β’亞基有許多相似片斷，Rpb2也與大腸桿菌β亞基有許多相似片斷，這些相似結(jié)構(gòu)相似可以在圖1中明顯看到。Rpb3與α亞基的結(jié)構(gòu)相似雖然不明顯，但它們卻具有一段約20個(gè)氨基酸長(zhǎng)的精確相似區(qū)域，而且Rpb3與α亞基大小一致，在一個(gè)聚合酶全酶中都有兩個(gè)Rpb3或α亞基單體。圖10.10A酵母菌Rpb1與大腸桿菌β’亞基、Rpb2與β亞基有許多相似片斷，圖中紅色區(qū)域即表示具有相似結(jié)構(gòu)的區(qū)段從功能上說，Rpb1、Rpb2、Rpb3也分別與β’、β、α亞基有相似性。圖10.10B所示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是Rpb1具有類似于β’亞基的結(jié)合DNA的位點(diǎn)。SeanCarroll與DavidStollar使用DNA的類似物G11與DNA競(jìng)爭(zhēng)RNA聚合酶=2\*ROMANII上的DNA結(jié)合位點(diǎn)，洗脫不含結(jié)合位點(diǎn)的多肽鏈或蛋白后，進(jìn)行電泳分離，發(fā)現(xiàn)留下的，即能與G11結(jié)合的組分，就是Rpb1。圖10.10B驗(yàn)證Rpb1具有DNA結(jié)合位點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)。Lane1為RNA聚合酶=2\*ROMANII提取物與非相關(guān)探針；Lane2為RNA聚合酶=2\*ROMANII提取物與DNA類似物G11的混合液；Lane3為RNA聚合酶=2\*ROMANII提取物的染色圖樣?？梢?，有兩種蛋白能與G11結(jié)合，進(jìn)一步研究表明，它們是Rpb1的兩種形態(tài)而酵母菌RNA聚合酶=2\*ROMANII的Rpb2與大腸桿菌的β亞基一樣，與磷酸二酯鍵的形成有關(guān)，這可由ATP類似物標(biāo)記實(shí)驗(yàn)說明。具體實(shí)驗(yàn)為：先將ATP-4-甲苯基-γ-酯與RNA聚合酶=123\*ROMAN=1\*ROMANI、II、III分別反應(yīng)，接著用硼氰化鈉（NaBH4）還原，然后用同位素標(biāo)記的[α-32P]UTP與被鉚定的ATP類似物形成磷酸二酯鍵，最后經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)三種聚合酶都是第二大的亞基被標(biāo)記，在RNA聚合酶=2\*ROMANII中就是Rpb2亞基。Rpb2亞基與大腸桿菌的β亞基的相似性通過研究編碼它們的基因也能發(fā)現(xiàn)。雖然酵母菌RNA聚合酶=2\*ROMANII的Rpb3與大腸桿菌的α亞基在形態(tài)上只有少量相似性，但是Rpb3基因變異的菌株RNA聚合酶=2\*ROMANII無法正常組裝，這與α亞基變異的大腸桿菌完全相同。這一現(xiàn)象預(yù)示了Rpb3與α亞基在功能上的類似。綜上所述，不論從結(jié)構(gòu)上還是從功能上，都有理由相信酵母菌的RNA聚合酶=2\*ROMANII中最大的三個(gè)亞基Rpb1、Rpb2、Rpb3分別與大腸桿菌RNA聚合酶的β’、β、α亞基具有同源關(guān)系。10.11當(dāng)RPB4的基因被刪去時(shí)，RNA聚合酶=2\*ROMANII的結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生什么變化？這種聚合酶的功能有哪些是正常的，哪些是不正常的？舉出證據(jù)說明。答：當(dāng)RPB4的基因被刪去時(shí)，RPB7不能錨定到RNA聚合酶=2\*ROMANII上。這種聚合酶可以正常的催化RNA鏈的延伸和終止，但是不能啟始RNA轉(zhuǎn)錄。證據(jù)如下。用正常的RNA聚合酶=2\*ROMANII和RNA聚合酶=2\*ROMANIIΔ4/7分別催化聚胞嘧啶核苷酸,電泳檢測(cè)其產(chǎn)物。因?yàn)檗D(zhuǎn)錄可以隨機(jī)的在這些序列中啟始，故它可以顯示排出起始的干擾僅顯示延伸的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兩個(gè)酶的效果一樣。用5’末端有特殊延伸的，且啟動(dòng)子有缺陷的DNA，它們分別具有不同的終止子，然后用用正常的RNA聚合酶=2\*ROMANII和RNA聚合酶=2\*ROMANIIΔ4/7分別催化轉(zhuǎn)錄，因?yàn)镽NA可以在這些特殊延伸起始，故可排除起始的干擾僅觀察終止的情況。電泳檢驗(yàn)結(jié)果表明兩種聚合酶效果一樣。分別用兩種RNA聚合酶去催化一個(gè)由正常啟動(dòng)子的基因，電泳檢測(cè)其結(jié)果，可發(fā)現(xiàn)RNA聚合酶=2\*ROMANIIΔ4/7無轉(zhuǎn)錄子產(chǎn)生，而正常的RNA聚合酶=2\*ROMANII有。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可證明結(jié)論。10.12有些聚合酶含有3種不同的RPB1亞基，給出這些亞基的名字，并將他們?cè)赟DS中的相對(duì)位置表示出來。這些不同形式的亞基有什么區(qū)別？給出得出上述結(jié)論的證據(jù)。ⅡoⅡaⅡb答：這三種不同的亞基是：Ⅱa,Ⅱb,Ⅱo,它們?cè)赟DS中的位置如右圖所示從上到下遷移率增加。其中Ⅱa是RPB1基因的最初產(chǎn)物，Ⅱb是Ⅱa在蛋白酶作用下移除C末端的產(chǎn)物，而Ⅱo是ⅡaC末端一些絲氨酸和蘇氨酸殘基磷酸化的產(chǎn)物。在功能上而言，亞基Ⅱa構(gòu)成的聚合酶結(jié)合在啟動(dòng)子上，而由Ⅱo構(gòu)成的聚合酶參與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的伸長(zhǎng)。關(guān)于該結(jié)論的證據(jù)如下：對(duì)RPB1的測(cè)序可知，該基因能夠產(chǎn)生出一個(gè)210KD的肽鏈，而Ⅱa亞基正好是210KD。對(duì)于Ⅱb氨基酸序列分析可知，它缺乏Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重復(fù)序列，而這種重復(fù)序列在Ⅱa的CTD中?？惯@種CTD的抗體可以和Ⅱa反應(yīng)，卻不能和Ⅱb反應(yīng)，說明Ⅱb缺乏這個(gè)C末端。對(duì)于Ⅱo亞基，首先它比Ⅱa大，而且被磷酸化，關(guān)于它的證據(jù)為：1、Ⅱa的CTD中有大量的絲氨酸，蘇氨酸和酪氨酸，而這三種氨基酸的羥基極易被磷酸化,在Ⅱo中也發(fā)現(xiàn)了磷酸化的絲氨酸和蘇氨酸。而且，Ⅱo在脫磷酸酶的作用下脫去磷酸基后可以轉(zhuǎn)化為Ⅱa.10.13Rpb1(RNA聚合酶的亞基1)的羧基末端的結(jié)構(gòu)如何？答：Rpb1和E.coli的β’具有較好的同源性。如圖所示Rpb1上的綠色部分為其羧基末端。且Rpb1羧基較強(qiáng)磷酸化的一個(gè)亞基，它是RNA聚合酶對(duì)α-amanitin的抗性的關(guān)鍵亞基。圖10.13Rpb1的序列示意圖。紅色部分為它與E.coli的β’同源的序列，綠色部分為它的羧基末端。10.15描繪用電子結(jié)晶學(xué)和X–光結(jié)晶學(xué)研究酵母RNA聚合酶II和延伸聚合體得到的結(jié)果。答：用X-光檢測(cè)研究酵母菌聚合酶II：可以看到酶表面有寬25A的通道，它在模型接近中央處大概有90度的轉(zhuǎn)彎。并且該通道在接近它的左端處被該酶的一個(gè)柱片斷部分阻斷，并留下兩個(gè)較窄的通道。其中一個(gè)通道開在接近RNA3’用電子結(jié)晶學(xué)（電子云的密度不同）檢測(cè)DNA的延伸聚合體只能得到二維的結(jié)構(gòu)，但通過多角度的觀察，并整合起來，可以得到較為細(xì)致的結(jié)構(gòu)，并且知道該酶的10個(gè)基本結(jié)構(gòu)定位于DNA的哪些位置上。此時(shí)，穿過酶的通道呈現(xiàn)出一個(gè)深的裂縫的形狀，大部分Rpb1在一邊大部分Rpb2在另外一邊。這個(gè)裂縫可以看作一組鉗夾夾住DNA，并且致使DNA一定程度上彎曲。此外，在酶的另一邊，可以看到一堵墻狀的結(jié)構(gòu)位于活性位點(diǎn)外部，使DNA解旋。（具體細(xì)節(jié)書上列了好多，主要得到的結(jié)論是老師上課時(shí)講的一句話——DNA在RNA達(dá)到10bp時(shí)解鏈，即起始階段的轉(zhuǎn)錄片斷長(zhǎng)度為10bp左右，而在RNA達(dá)到20bp時(shí)形成D-R復(fù)合結(jié)構(gòu)，可以知道整個(gè)bubble的長(zhǎng)度為10bp.）通過這兩種觀測(cè)的對(duì)比以及相互補(bǔ)充，可以很好的看到RNA復(fù)合酶在DNA上的結(jié)構(gòu)，以及該酶與DNA，RNA，及其復(fù)合體的相對(duì)位置關(guān)系。我認(rèn)為這是很好的研究結(jié)構(gòu)的方法。10.17哪些類型的基因有TATAbox序列,哪些類型的基因沒有TATAbox序列?答:1)缺少TATABOX的啟動(dòng)子在下列兩類基因中可以找到：第一類包括了看家基因,這類基因在所有細(xì)胞的基因構(gòu)成中很活躍,因?yàn)樗鼈兛刂屏嘶镜纳锘瘜W(xué)路徑,比如核苷的合成.是維持細(xì)胞生命所必需的；第二類包括了發(fā)育控制基因.例如控制果蠅發(fā)育的同源基因,還有在哺乳動(dòng)物的免疫機(jī)制發(fā)育中活躍的基因。2)擁有TATABOX的啟動(dòng)子在下述基因中可以找到：一般來說,特異性基因(或叫做“奢侈基因”)，這類基因編碼一些只有在特定類型的細(xì)胞中可以找到的蛋白質(zhì)(比如,皮膚細(xì)胞中的角蛋白和紅細(xì)胞中的血色素)。10.18一段第二類基因的轉(zhuǎn)錄從一個(gè)鳥嘌呤核苷酸開始,該核苷酸在TATABOX的第一個(gè)堿基下游30bp的長(zhǎng)度.如果去掉在此鳥嘌呤核苷酸與TATABOX之間的10bp長(zhǎng)度的DNA，并將變異的DNA轉(zhuǎn)到細(xì)胞中表達(dá)。轉(zhuǎn)錄會(huì)從同一個(gè)鳥嘌呤核苷酸開始嗎？如果不是，會(huì)從哪里開始？答：不會(huì)從同一起點(diǎn)開始。下圖為第二類基因的TATABOX和起始點(diǎn)的位置示意圖。下圖為一個(gè)探索TATABOX對(duì)轉(zhuǎn)錄的作用的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)證明,TATABOX和起始點(diǎn)的間隔長(zhǎng)度是一定的，即題中的30bp。因此，刪除鳥嘌呤核苷酸與TATABOX之間的10bp長(zhǎng)度的DNA之后，轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)也會(huì)下移，即在原來的鳥嘌呤核苷酸下游10bp處。由此可見TATABOX的功能之一是定位轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)。10.19將TATABOX從一個(gè)第二類基因的啟動(dòng)子移走的兩個(gè)最有可能的結(jié)果是什么?答：TATAbox在classⅡpromoter中的作用主要為定位轉(zhuǎn)錄的起始點(diǎn)，在一些promoter中也影響轉(zhuǎn)錄活性。所以若將TATAbox移走，1）使得轉(zhuǎn)錄起始隨意化，可從任意點(diǎn)起始；2）對(duì)于一些promoter，可能會(huì)使轉(zhuǎn)錄活性下降。10.20畫出連接體掃描實(shí)驗(yàn)（linkerscanning）的過程。這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以提供哪些信息？答：掃描過程如下圖：a)用限制性內(nèi)切酶在要研究的DNA序列中切一段長(zhǎng)約10bp的缺口，并使用外部水解酶制造平齊末端；用一段長(zhǎng)約10bp的合成的隨機(jī)DNA序列(ligatelinker)代替切去的部分b)重復(fù)a的步驟，將由ligatelinker取代的位置向下游移動(dòng)…c)檢驗(yàn)經(jīng)過連接體取代的DNA序列的轉(zhuǎn)錄效果。 通過連接體掃描實(shí)驗(yàn)，可以判斷出對(duì)啟動(dòng)子中對(duì)轉(zhuǎn)錄起重要作用的區(qū)段（以10bp為單位）10.21列出II類啟動(dòng)子的兩種常見的上游元件答：常見的II類啟動(dòng)子上游元件如下：1）GC盒很多II類聚合酶啟動(dòng)子中都含有GC盒。它們經(jīng)常處在TATA盒的上游，常以2~6或更多的重復(fù)的形式出現(xiàn)。在這些基因中，GC盒的存在對(duì)轉(zhuǎn)錄效率起著重要的作用?；騽h除實(shí)驗(yàn)表明，刪除1個(gè)GC盒會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)錄效率造成一定的影響，而刪除2個(gè)則會(huì)大大地降低轉(zhuǎn)錄效率。將GC盒歸入啟動(dòng)子元件的一個(gè)重要原因是它們發(fā)揮作用的能力與其位置有著重要的聯(lián)系。一些特異性轉(zhuǎn)錄因子可以識(shí)別GC盒并與之相互作用。2）CAT盒又稱“CCAAT盒”。與GC盒類似，CAT盒有自己的特異性轉(zhuǎn)錄因子（CTF）。不同的基因轉(zhuǎn)錄效率對(duì)CAT盒的依賴程度是不同的。10.22畫出一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的I類啟動(dòng)子答：如下圖： 標(biāo)準(zhǔn)的I類啟動(dòng)子包括兩個(gè)元件：核心元件（Coreelement）：在圖中以藍(lán)色標(biāo)出，位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)處，覆蓋了-45~+20的區(qū)段。上游調(diào)控元件（UCE）：在圖中以黃色標(biāo)出，覆蓋了轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游的-156~-107的區(qū)域。10.23I類啟動(dòng)子是怎樣被發(fā)現(xiàn)的？試給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：應(yīng)用連接體掃描實(shí)驗(yàn)（linkerscanning）可以檢測(cè)出I類啟動(dòng)子的兩個(gè)重要元件.下圖給出該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果：其中紅色條的高度表示相應(yīng)位置上的堿基被突變掉后轉(zhuǎn)錄的相對(duì)強(qiáng)度，其中100為野生型（wildtype）啟動(dòng)子的相對(duì)轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度。由此可以看出，突變后對(duì)轉(zhuǎn)錄效率有明顯影響的有兩個(gè)區(qū)段，分別處在-156~-107及-45~+20的位置。由此確定出I類啟動(dòng)子的兩個(gè)相應(yīng)得重要元件（UCE和coreelement）10.24描述并給出表明I類啟動(dòng)子兩元件間距對(duì)轉(zhuǎn)錄效率的影響的實(shí)驗(yàn)，并給出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。答：Tjian及合作者以人類的rRNA作為實(shí)驗(yàn)材料研究I類啟動(dòng)子兩元件間距對(duì)轉(zhuǎn)錄效率的影響。他們保持兩元件的內(nèi)部序列不變，而增加或刪減元件間區(qū)段的長(zhǎng)度，檢驗(yàn)做這樣的修改后的啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄效率。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果由下圖給出：其中黃色和藍(lán)色分別表示UCE和coreelement。變異后的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度由右側(cè)一列數(shù)字給出?？梢钥闯?，刪除4個(gè)堿基對(duì)轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度沒有明顯影響，而刪除16和32個(gè)堿基時(shí)，轉(zhuǎn)錄效率降為40%~20%；進(jìn)一步，當(dāng)刪除掉44和53個(gè)堿基時(shí)，效率減小到了10%；刪除掉64個(gè)堿基時(shí)，效率就小于5%了。 另一方面，28個(gè)堿基仍未對(duì)轉(zhuǎn)錄效率造成明顯影響，而當(dāng)增加49個(gè)堿基時(shí)，效率降為30%。 同時(shí)也可以看出，如果改變UCE內(nèi)部堿基，即使兩區(qū)段的距離保持不變，也會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)錄效率造成嚴(yán)重影響。 綜上，可知，I類啟動(dòng)子的兩個(gè)元件的間距對(duì)轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度起著重要的作用。而且減小間距似乎對(duì)轉(zhuǎn)錄效率影響更大。10.25比較經(jīng)典與非經(jīng)典(c