耐氟康唑白念珠菌ERG11基因突變篩查及鑒定芯片的研制的任務(wù)書(shū)

耐氟康唑白念珠菌ERG11基因突變篩查及鑒定芯片的研制的任務(wù)書(shū)一、任務(wù)背景白念珠菌是一種常見(jiàn)的真菌，常引起人體感染，嚴(yán)重危害人體健康。而耐氟康唑白念珠菌的出現(xiàn)更加增加了治療難度。該菌對(duì)氟康唑等抗真菌藥物的耐藥性不斷增加，已成為臨床常見(jiàn)的多藥耐藥菌株。因此，研究耐氟康唑白念珠菌的發(fā)生機(jī)制及其對(duì)抗藥物的機(jī)制，對(duì)白念珠菌感染的防治具有重要意義。目前，研究人員發(fā)現(xiàn)耐氟康唑白念珠菌的抗藥性與ERG11基因的突變有關(guān)。ERG11基因編碼真菌的保守酶底物荷爾蒙14α-甲基類固醇14α-脫甲基酶（CYP51）。在真菌中，這個(gè)酶參與酵母菌細(xì)胞膜的合成，因而成為了抗真菌藥物靶點(diǎn)。目前，靶向ERG11基因的抗真菌藥物已在臨床上得到了應(yīng)用。因此，研究ERG11基因的突變?cè)谀头颠虬啄钪榫械淖饔?，?duì)抗真菌藥物的發(fā)展也具有重要意義。二、研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)本項(xiàng)目旨在開(kāi)發(fā)一種快速高效的耐氟康唑白念珠菌ERG11基因突變篩查及鑒定芯片，研究其在抗真菌藥物耐受性中的應(yīng)用效果。具體研究?jī)?nèi)容和目標(biāo)如下：1.設(shè)計(jì)制備針對(duì)ERG11基因的引物和探針，篩查白念珠菌中ERG11基因的突變情況。2.建立含有ERG11基因突變的白念珠菌菌株文庫(kù)，并對(duì)其進(jìn)行特性分析。3.開(kāi)發(fā)ERG11基因突變鑒定芯片，對(duì)從病人樣品中分離得到的白念珠菌菌株進(jìn)行鑒定，并確定其耐藥性。4.測(cè)試ERG11基因突變鑒定芯片的檢測(cè)靈敏度和特異性，并優(yōu)化其檢測(cè)條件和方法。5.開(kāi)展臨床樣品測(cè)試，驗(yàn)證ERG11基因突變鑒定芯片在臨床治療中的應(yīng)用效果，并評(píng)估其在臨床中的價(jià)值。三、研究方法和技術(shù)路線1.突變篩查：根據(jù)已知的ERG11基因突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)合適的引物和探針，利用PCR方法擴(kuò)增特定片段，并分型鑒定突變情況。2.菌株培養(yǎng)：在含有白念珠菌的培養(yǎng)基中培養(yǎng)和傳代耐氟康唑白念珠菌菌株，篩選含有ERG11基因突變的菌株。3.鑒定芯片設(shè)計(jì)：根據(jù)突變位點(diǎn)確定芯片中的引物和探針設(shè)計(jì)，并對(duì)其性能進(jìn)行優(yōu)化。4.芯片檢測(cè)：將病人樣品中的白念珠菌菌株直接提取DNA并放置于芯片上進(jìn)行檢測(cè)，以鑒定其ERG11基因突變的情況。5.鑒定芯片優(yōu)化：針對(duì)芯片檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證和優(yōu)化，并建立標(biāo)準(zhǔn)操作流程。6.臨床應(yīng)用實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用ERG11基因突變鑒定芯片進(jìn)行臨床樣品檢測(cè)，研究其在臨床中的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)和發(fā)現(xiàn)。四、預(yù)期成果1.設(shè)計(jì)制備針對(duì)ERG11基因的引物和探針，研究白念珠菌ERG11基因突變的篩查技術(shù)。2.建立含有ERG11基因突變的白念珠菌菌株文庫(kù)，并進(jìn)行特性分析。3.開(kāi)發(fā)ERG11基因突變鑒定芯片，應(yīng)用于臨床樣品檢測(cè)。4.驗(yàn)證ERG11基因突變鑒定芯片在臨床中的應(yīng)用效果，評(píng)估其在臨床中的價(jià)值。五、項(xiàng)目周期本項(xiàng)目計(jì)劃為期2年。六、參考文獻(xiàn)1.Chen,J.,etal.MutationsinCYP51AandERG11contributetoazoleresistanceinAspergillusfumigatusisolatesfromChinesepoultry.Antimicrobialagentsandchemotherapy,2015.59(8):p.4571-4574.2.Xu,H.,etal.DifferenceofmutationsinERG11geneandInVitroSusceptibilitytoFourAzolesinCandidaalbicansIsolatedfromPatientswithVulvovaginalCandidiasis.Mycopathologia,2015.180(5–6):p.307-313.3.Gao,J.,etal.Emergenceofazole-resistantCandidatropicaliswithdeletionofFKS1allel