降鈣素原的重組、表達(dá)及單克隆抗體的制備的任務(wù)書

降鈣素原的重組、表達(dá)及單克隆抗體的制備的任務(wù)書一、任務(wù)背景及要求降鈣素原是一種肽類激素，在鈣、磷代謝、神經(jīng)系統(tǒng)和免疫調(diào)節(jié)等方面具有重要作用。因此，研究降鈣素原的表達(dá)、結(jié)構(gòu)和功能對于人類健康具有重要意義。該任務(wù)要求對降鈣素原進(jìn)行重組、表達(dá)和單克隆抗體制備，以便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)開展。二、任務(wù)內(nèi)容（一）降鈣素原基因的克隆和重組1.根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)降鈣素原基因引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；2.克隆擴(kuò)增得到的基因片段進(jìn)入表達(dá)載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒；3.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入宿主細(xì)胞，利用蛋白表達(dá)技術(shù)進(jìn)行降鈣素原的重組表達(dá)。（二）降鈣素原單克隆抗體制備1.基于重組降鈣素原，免疫Balb/c小鼠，提取小鼠脾細(xì)胞；2.將脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，集落篩選得到單克隆細(xì)胞；3.鑒定單克隆細(xì)胞的特異性，并進(jìn)行擴(kuò)充和凍存。三、任務(wù)計(jì)劃任務(wù)周期為50天，具體計(jì)劃如下：1.第1-5天：設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；2.第6-10天：進(jìn)行重組質(zhì)粒構(gòu)建；3.第11-20天：轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，進(jìn)行降鈣素原的重組表達(dá)；4.第21-30天：開展小鼠免疫和單克隆細(xì)胞篩選；5.第31-40天：單克隆細(xì)胞鑒定、擴(kuò)充和凍存；6.第41-50天：數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，撰寫報(bào)告。四、任務(wù)所需材料和設(shè)備1.降鈣素原基因序列、表達(dá)載體和宿主細(xì)胞；2.PCR儀、電泳儀、蛋白電泳裝置、細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和冰箱等實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備；3.Balb/c小鼠、骨髓瘤細(xì)胞和培養(yǎng)基等實(shí)驗(yàn)動物和試劑。五、任務(wù)人員和分工任務(wù)需由具有生物學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)等專業(yè)知識和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的人員組成，其中：1.基因克隆人員負(fù)責(zé)引物設(shè)計(jì)、PCR擴(kuò)增和克隆構(gòu)建；2.細(xì)胞培養(yǎng)人員負(fù)責(zé)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和蛋白表達(dá)；3.免疫及細(xì)胞培養(yǎng)人員負(fù)責(zé)小鼠免疫和細(xì)胞融合；4.單克隆細(xì)胞鑒定人員負(fù)責(zé)單克隆細(xì)胞篩選和鑒定。六、任務(wù)成果1.獲得重組降鈣素原蛋白；2.獲得具有高特異性的降鈣素原單克隆抗體。七、報(bào)告要求1.實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果的詳細(xì)記錄；2.獲得降鈣素原的表達(dá)、純化和鑒定結(jié)果；3.獲