廣州市登革熱監(jiān)測(cè)與媒介媒介抗測(cè)點(diǎn)分析

廣州市登革熱監(jiān)測(cè)與媒介媒介抗測(cè)點(diǎn)分析

由于目前尚未有效的生根熱疫苗，主要依靠衛(wèi)生消毒基金迅速減少寄生蟲密度，控制生根熱的流行。由于長期使用殺蟲劑,有可能產(chǎn)生抗藥性。因此,進(jìn)行抗藥性監(jiān)測(cè),可為選擇合適敏感的殺蟲劑、控制登革熱媒介提供依據(jù)。本研究旨在了解廣州市城鄉(xiāng)白紋伊蚊密度的季節(jié)性變化,并對(duì)登革熱病毒攜帶情況及抗藥性進(jìn)行檢測(cè)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1蚊子誘捕器1.1.2蚊卵的采集和繁殖敏感品系白紋伊蚊,由本實(shí)驗(yàn)室提供;野外種群白紋伊蚊,分別在廣州市內(nèi)(白云區(qū))、農(nóng)村(從化市某村)采集其蚊卵,帶回實(shí)驗(yàn)室繁殖2代;1代進(jìn)行蚊體內(nèi)登革熱病毒檢測(cè),2代挑選3齡末4齡初幼蟲進(jìn)行抗藥性測(cè)定。1.1.3特效藥1.2監(jiān)測(cè)方法1.2.1布放位置和回收在伊蚊誘捕器中放入?70mm的白色濾紙,然后加入30ml去氯水。完成處理后布放,每個(gè)布放點(diǎn)間距離為10m。布放位置根據(jù)白紋伊蚊的生態(tài)特點(diǎn),選擇墻角、樹下、草叢中陰暗處。次日觀察計(jì)數(shù),每隔24h觀察1次,并對(duì)所捕獲成蚊分類計(jì)數(shù)。每次實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察4d,至第5天回收,將回收的成蚊分類裝入凍存管并置-80℃保存,擇日進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。回收的蚊卵在實(shí)驗(yàn)室孵育,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及抗藥性檢測(cè)。1.2.2農(nóng)村2011年夏季8月、春季8月、冬季12月、2012年春季3月監(jiān)測(cè)現(xiàn)場(chǎng)為廣州市白云區(qū)某大學(xué)內(nèi)、從化市某村;監(jiān)測(cè)時(shí)間:城市2011年夏季8月、秋季10月、冬季12月、2012年春季3月;農(nóng)村2011年夏季8月、秋季10月、冬季12月、2012年春季4月;布放誘捕器數(shù)量:城市分別為82、100、90、100個(gè),農(nóng)村分別為200、250、200、200個(gè)。1.3rna提取、反轉(zhuǎn)錄將捕獲和孵育的白紋伊蚊冷凍麻醉,收集于冷凍管,將同范圍、同時(shí)間捕獲蚊蟲集中為1組,每組20~30只,用RT-PCR法檢測(cè)白紋伊蚊體內(nèi)登革熱病毒攜帶情況;登革熱2型病毒細(xì)胞懸液作陽性對(duì)照;實(shí)驗(yàn)室品系蚊蟲作陰性對(duì)照。RNA提取、反轉(zhuǎn)錄采用羅氏試劑盒,引物:上游5′-TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG-3′,下游5′-TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC-3′;反應(yīng)條件:50℃30min;94℃5min;94℃30s;55℃30s;72℃30s;40個(gè)循環(huán);72℃10min。1.4敏感品系采用WHO生物測(cè)試法,在溫度(26±1)℃、相對(duì)濕度(65±10)%條件下,分別對(duì)野外種群和實(shí)驗(yàn)室敏感品系白紋伊蚊進(jìn)行測(cè)定。每組6個(gè)濃度梯度,199ml去氯水中,加1ml不同濃度梯度的藥液,并投入30條3齡末4齡初幼蟲,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,24h觀察結(jié)果,以幼蟲不能逃避機(jī)械刺激為死亡。測(cè)定結(jié)果按機(jī)值法進(jìn)行統(tǒng)計(jì),計(jì)算半數(shù)致死濃度(LC50)。抗藥性指數(shù)計(jì)算公式:1.5蚊子檢測(cè)指標(biāo)1.5.1卵陽性誘捕器數(shù)量是指每100個(gè)有效的誘捕器(即成功回收的容器)中成蚊或/和卵陽性的誘捕器數(shù)量,該項(xiàng)指標(biāo)從率的角度綜合反映了一定地區(qū)內(nèi)蚊媒的成蚊和蚊卵密度。計(jì)算公式:式中,N表示回收的誘捕器中伊蚊成蚊或/和伊蚊誘卵陽性的誘捕器數(shù)量,n表示回收的誘捕器數(shù)量。1.5.2蚊密度和時(shí)間是指每100個(gè)有效的誘捕器中伊蚊成蟲陽性的誘捕器數(shù)量,該項(xiàng)指標(biāo)從率的角度單獨(dú)反映了一定地區(qū)內(nèi)成蚊密度情況。計(jì)算公式:式中,Nm表示回收的誘捕器中捕獲伊蚊成蚊陽性的誘捕器數(shù)量,n表示回收的誘捕器數(shù)量。1.5.3蚊卵密度測(cè)定的率是指每100個(gè)有效的誘捕器中蚊卵陽性的誘捕器數(shù)量,該項(xiàng)指標(biāo)從率的角度單獨(dú)反映了一定地區(qū)內(nèi)蚊卵密度情況。計(jì)算公式:式中,No表示回收的誘捕器中產(chǎn)卵陽性的誘捕器數(shù)量,n表示回收的誘捕器數(shù)量。1.6統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS16.0軟件對(duì)城市、農(nóng)村不同季節(jié)的MOI、MI、OI分別進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1城市、農(nóng)村白紋伊蚊密度季節(jié)變化4個(gè)季節(jié)城市共布放伊蚊誘捕器372個(gè),回收349個(gè),回收率為93.82%;農(nóng)村共布放伊蚊誘捕器850個(gè),回收834個(gè),回收率為98.12%。城市、農(nóng)村誘蚊陽性容器分別為69和159個(gè),誘卵陽性容器數(shù)分別為66和113個(gè),誘蚊誘卵陽性容器分別為79和165個(gè)。城市、農(nóng)村白紋伊蚊密度季節(jié)變化見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,城市4個(gè)季節(jié)之間的陽性指數(shù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MOI:χ2=31.45,P=0.000;MI:χ2=26.66,P=0.000;OI:χ2=35.69,P=0.000),農(nóng)村4個(gè)季節(jié)之間的陽性指數(shù)比較差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MOI:χ2=85.44,P=0.000;MI:χ2=83.18,P=0.000;OI:χ2=85.89,P=0.000)。由表1可見,城市、農(nóng)村白紋伊蚊密度的季節(jié)消長趨勢(shì)一致,均是春季白紋伊蚊密度開始升高,夏季達(dá)到高峰,秋季逐漸下降,冬季最低,但城市、農(nóng)村冬季白紋伊蚊密度均>0。2.2白紋伊蚊鑒定結(jié)果對(duì)城市捕獲的白紋伊蚊成蟲,以及由捕獲的蚊卵經(jīng)孵化而得的第1代白紋伊蚊成蟲共291只,經(jīng)檢測(cè)結(jié)果均為陰性;農(nóng)村捕獲的白紋伊蚊共567只,經(jīng)檢測(cè)結(jié)果也均為陰性。登革熱2型病毒細(xì)胞懸液作陽性對(duì)照,結(jié)果為陽性;實(shí)驗(yàn)室品系白紋伊蚊作陰性對(duì)照,結(jié)果為陰性。2.3對(duì)敵中小型蚊的抗性分析城市白紋伊蚊對(duì)敵敵畏的抗性系數(shù)為1.08~2.16,春秋季抗性系數(shù)>2,呈低抗性,夏季抗性系數(shù)<2,呈敏感性;農(nóng)村白紋伊蚊對(duì)敵敵畏的抗性系數(shù)為1.16~1.87(表2),春、夏、秋各季節(jié)的抗性系數(shù)均<2,呈敏感性,但春、秋季節(jié)高于夏季。由于冬季的蚊蟲密度低,未進(jìn)行冬季抗藥性檢測(cè)。3基于伊蚊的傳染病檢測(cè)登革熱廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū),是分布最廣,發(fā)病最多,危害較大的一種蟲媒傳染病,主要通過埃及伊蚊和白紋伊蚊傳播。隨著國際交流的日益頻繁,我國也常年發(fā)生登革熱輸入性病例并時(shí)有局部暴發(fā)疫情,已成為重點(diǎn)監(jiān)測(cè)與控制的傳染病之一。廣州市近年來多次暴發(fā)登革熱,而白紋伊蚊是該地區(qū)的主要傳播媒介。因此,對(duì)白紋伊蚊的密度、帶病毒情況以及抗藥性進(jìn)行監(jiān)測(cè)具有重要意義。3.1季節(jié)間蚊媒密度氣候因素,尤其是氣溫,對(duì)白紋伊紋密度的消長有著重要作用。而登革熱的流行與蚊媒的密度有關(guān),二者高峰都在高溫多雨的夏秋季。在一定的溫度范圍內(nèi),白紋伊蚊種群的繁殖隨著溫度的升高而加快。根據(jù)研究結(jié)果分析,廣州市城市、農(nóng)村4個(gè)季節(jié)間的陽性指數(shù)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,城市、農(nóng)村的季節(jié)消長情況一致,白紋伊蚊密度由高到低依次為夏季、秋季、春季、冬季,與以往研究結(jié)果一致。冬季除農(nóng)村OI為0外,其他各陽性指數(shù)均>0,說明白紋伊蚊可以成蟲和卵的形式越冬。鄭能雄等研究認(rèn)為伊蚊主要以卵越冬,也存在以幼蟲和殘存成蚊越冬的形式,呈半越冬形式。監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示,雖然蚊媒密度總體趨勢(shì)在下降,但絕大部分地區(qū)在監(jiān)測(cè)月份內(nèi)蚊媒密度依然高出警戒范圍,6-10月蚊媒活動(dòng)猖獗,成為登革熱暴發(fā)潛在危險(xiǎn)因素。而白紋伊蚊的密度高峰一般較登革熱的流行高峰提前出現(xiàn),因此,夏秋季做好白紋伊蚊的監(jiān)測(cè)和防控工作對(duì)于控制登革熱的暴發(fā)流行非常重要。3.2pcr檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)廣州市城市、農(nóng)村白紋伊蚊登革熱病毒攜帶情況,本研究共檢測(cè)城市白紋伊蚊14份291只,農(nóng)村20份567只,結(jié)果均為陰性。其可能原因有:(1)白紋伊蚊的捕獲地點(diǎn)均不是登革熱疫點(diǎn);(2)廣州地區(qū)的登革熱為非連續(xù)性暴發(fā),白紋伊蚊自然種群登革熱病毒的攜帶率較低;(3)檢測(cè)的蚊蟲標(biāo)本大部分是經(jīng)卵孵化的成蚊,可能存在登革熱病毒在蚊體內(nèi)傳代的遞減效應(yīng),造成檢出率低;(4)本研究采用普通PCR檢測(cè)方法,靈敏性相對(duì)偏低。有專家認(rèn)為,廣東省可能從登革熱非地方性流行區(qū)(無病毒)變?yōu)榈偷胤搅餍袇^(qū)(同一種血清型別流行)。因此,檢測(cè)白紋伊蚊自然種群登革熱病毒的攜帶情況,可以為登革熱的暴發(fā)流行提供快速、有效的預(yù)測(cè)預(yù)警信息。3.3抗藥性及抗藥特性我國自20世紀(jì)四五十年代廣泛使用化學(xué)殺蟲劑防治蚊蟲,蚊蟲通過生理生化多種機(jī)制產(chǎn)生了抗藥性。我國使用有機(jī)磷類殺蟲劑有40多年的歷史,其中敵敵畏和敵百蟲防治媒介蚊蟲最為普遍。應(yīng)用抗藥性系數(shù)評(píng)價(jià)昆蟲的抗性水平,一般認(rèn)為抗藥性系數(shù)<2,為敏感;在2~10為低抗性;11~20為中等抗性;>20為高度抗性。本研究發(fā)現(xiàn),春、夏、秋3個(gè)季節(jié),廣州市城市、農(nóng)村白紋伊蚊抗敵敵畏情況的變化趨勢(shì)一致,均是夏季最低,春、秋季較高,但是城市春、秋季的抗藥性指數(shù)>2,呈低抗性,其余均<2,呈敏感性,但本底值均高于敏感品系。夏季低春秋季較高的原因可能是經(jīng)越冬復(fù)蘇繁殖的白紋伊蚊生存能力強(qiáng),抗藥性較高;夏季蚊蟲繁殖旺盛,密度達(dá)到高峰,抗藥性減弱;經(jīng)過夏季的滅蚊處理,殺蟲劑的選擇壓力,造成秋季抗藥性又升高。由于冬季蚊蟲密度低,本研究未進(jìn)行冬季抗藥性檢測(cè)。目前,國內(nèi)未見有不同季節(jié)蚊蟲抗藥性情況的報(bào)道。及時(shí)對(duì)殺蟲劑抗性及不同季節(jié)的抗性變化進(jìn)行檢測(cè),對(duì)科學(xué)合理選擇殺蟲劑和施用時(shí)間防控白紋伊蚊具有重要意義。登革熱病毒可經(jīng)埃及伊蚊(Aedesaegypti)和白紋伊蚊(Aedesalbopictus)傳播,導(dǎo)致登革熱(DF)、登革出血熱(DHF)、登革休克綜合征(DSS)。