




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
第一章生物藥物概論1、生物藥物的分類:(1)基因重組多肽、蛋白類治療劑(2)基因藥物(3)天然生物藥物(4)合成與部分合成的藥物。DNA重組藥物和基因藥物的區(qū)別:DNA重組藥物即應(yīng)用重組DNA技術(shù)(包括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù))制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類藥物和疫苗、單克隆抗體與細(xì)胞因子等;基因藥物即以基因物質(zhì)(DNA或RNA)為基礎(chǔ),研究而成的基因治療劑、基因疫苗、反義藥物和核酶等。2、生物藥物的作用特點(diǎn):藥理學(xué)特性:(1)藥理活性高(2)治療的針對(duì)性強(qiáng),治療的生理、生化機(jī)制合理,療效可靠。(3)毒副作用較少,營養(yǎng)價(jià)值高。(4)生理副作用常用發(fā)生。理化特性:(1)生物材料中的有效物質(zhì)含量低,雜質(zhì)種類多且含量相對(duì)較高。(2)生物活性物質(zhì)組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定性差。(3)生物材料易染菌,腐敗。(4)生物藥物制劑的特殊要求。3.DNA重組藥物有:(1)細(xì)胞因子干擾素類:α-干擾素、β-干擾素、γ-干擾素(2)細(xì)胞因子白介素類和腫瘤壞死因子:白介素-2(IL-2)和突變型白介素-2(Ser125-IL-2)腫瘤壞死因子類主要有TNF-α和TNF-α受體。(3)造血系統(tǒng)生長因子類:粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、促血小板生成素(TPO)干細(xì)胞生長因子(SCF)(4)生長因子類:胰島素樣生長因子(IGF)、表皮生長因子(EGF)、血小板衍生生長因子(PDFD)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-α和TGF-β)、神經(jīng)生長因子及各種神經(jīng)營養(yǎng)因子。(5)重組多肽與蛋白質(zhì)類激素:重組人胰島素(rhInsulin)、重組人生長激素(rhGH)、促卵胞激素(FSH)、促黃體生成素(LH)和絨毛膜促性腺激素(HCG)、重組人白蛋白和重組人血紅蛋白(6)心血管病治療劑與酶制劑:Ⅷ因子、水蛭素、tpA、rtpA、尿激酶、鏈激酶、葡激酶、天冬酰胺酶、超氧化歧化酶、葡萄糖腦苷酶及DNsae等(7)重組疫苗與單抗制品:重組乙肝表面抗原疫苗、乙肝基因疫苗、AIDS疫苗、流感疫苗、痢疾疫苗和腫瘤疫苗。4術(shù)語藥物:用于預(yù)防、診斷、治療保健的一類物質(zhì)。藥品:是指用于預(yù)防、治療、診斷人體疾病,有目的地調(diào)節(jié)人體生理功能并規(guī)定有適應(yīng)證或者功能主治、用法和用量的物質(zhì),包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。藥品根據(jù)其來源可分兩大類:天然藥物即植物藥、動(dòng)物藥和礦物藥;合成藥包括化學(xué)合成藥與微生物合成藥。天然藥物一般來源于自然界,很少有人工加工過程,藥物成分相對(duì)較復(fù)雜。生化藥物:(biopharmaceutics)是利用生物體、生物組織、細(xì)胞或其成分,綜合應(yīng)用生物學(xué)與醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、微生物學(xué)與免疫學(xué)、物理化學(xué)與工程學(xué)和藥學(xué)的原理與方法加工制造而成的一大類用于預(yù)防、診斷、治療和康復(fù)保健的制品。DNA重組藥物:即應(yīng)用重組DNA技術(shù)(包括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù))制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類藥物和疫苗、單克隆抗體與細(xì)胞因子等?;蛩幬铮阂曰蛭镔|(zhì)(RNA和DNA及其衍生物)作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ),包括基因治療用的重組目的DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酸等。生化藥物:是運(yùn)用生物化學(xué)的理論、方法、技術(shù)與研究成果,從生物體(包括動(dòng)物、植物、微生物和海洋生物)分離、純化得到的一些重要生理活性物質(zhì),經(jīng)藥效學(xué)和毒理學(xué)研究證明對(duì)于疾病的防治是安全有效的一大類藥物,如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶、輔酶、維生素、激素、糖類、脂類、核酸、核苷酸及其衍生物。反義藥物:是以人工合成的10~幾十個(gè)反義寡核苷酸序列與模板DNA或mRNA互補(bǔ)形成穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu),抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄和mRNA的翻譯,從而起到抗腫瘤和抗病毒作用,目前有20多種反義藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn),其中ISIS是FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)反義藥物,用于治療AIDS病患者的巨噬細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎。核酸疫苗:將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi),并通過宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)合成抗原蛋白質(zhì),誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答以達(dá)到防病治病的目的。第二章生物制藥工藝學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)1、生物活性物質(zhì)的濃縮與干燥的方法:生物活性物質(zhì)的濃縮:(1)鹽析濃縮(2)有機(jī)溶劑沉淀濃縮(3)用葡聚糖凝膠(Sephadex)濃縮(4)用聚乙二醇(PEG)濃縮(5)超濾濃縮(6)真空減壓濃縮與薄膜濃縮生物活性物質(zhì)的干燥:(1)減壓干燥(2)噴霧干燥(3)冷凍干燥2簡述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理:根據(jù)混合物中的不同組分分配率的差別,把它們分配于可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中,或者將混合物置于某一相中,外加一定作用力,使多組分分配于不同區(qū)域,從而達(dá)到分離的目的。主要純化原理有:(1)根據(jù)分子的形狀和大小不同進(jìn)行分離(2)根據(jù)分子電離性質(zhì)(帶電性)的差異進(jìn)行分離(3)根據(jù)分子極性大小及溶解度的不同進(jìn)行分離。(4)根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同進(jìn)行分離(5)根據(jù)配體特意性進(jìn)行分離3、保存菌種、菌種退化、檢查菌種退化常用的菌種保存方法:斜面低溫保藏法、液體石蠟封藏法、冷凍干燥保藏法、液氮超低溫保藏法、甘油冷凍保藏法、其他如沙土管保藏法。菌種的退化意味著隨時(shí)間的推移菌種的一個(gè)或多個(gè)特性逐步減退或消失,最終導(dǎo)致營養(yǎng)細(xì)胞的死亡。一般把菌株的生活力、產(chǎn)孢子能力的衰退和特殊產(chǎn)物產(chǎn)量的下降統(tǒng)稱為退化。檢查菌種退化:(1)單位容積中發(fā)酵液的活性物質(zhì)含量(2)瓊脂平皿上的單菌落形態(tài),(3)不同培養(yǎng)時(shí)期菌體細(xì)胞的形態(tài)和主要遺傳特征,如形成孢子的能力;(4)發(fā)酵過程的pH變動(dòng)情況(5)發(fā)酵液的氣味、色澤4重組DNA技術(shù)基本原理,如何獲取目的基因基因工程是通過體外重組將甲生物體的基因轉(zhuǎn)入乙受體生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)的生物技術(shù)。獲取目的基因的方法有:(1)鳥槍克隆法(2)人工合成目的基因1、酶促方法2、化學(xué)合成法5常見的基因載體有,如何構(gòu)建基因重組體在體外將含目的基因的DNA片段和具有自我復(fù)制功能、并帶有選擇標(biāo)記的載體分子進(jìn)行酶切連接,獲的重組DNA分子。常見的基因載體有:鏈霉菌質(zhì)粒、芽孢桿菌載體、質(zhì)粒、噬菌體(phage)、黏粒(cosmid)、病毒載體等。6DNA重組體有主要有哪幾種表達(dá)系統(tǒng)?各有什么特點(diǎn)?基因工程包括轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后加工等過程。根據(jù)宿主細(xì)胞種類不同,分為原核基因工程和真核基因工程。原核基因工程以原核細(xì)胞作為表達(dá)宿主,如大腸桿菌、枯草桿菌等;而真核基因工程則以真核細(xì)胞為表達(dá)宿主,如酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞等。大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng):遺傳背景比較清楚,使用安全、技術(shù)操作簡便,繁殖力強(qiáng)(20~30min即可繁殖一代),便于大規(guī)模培養(yǎng),成本較低,表達(dá)水平較高(可達(dá)總蛋白的5%~6%),下游技術(shù)成熟、易于控制。目前使用最廣泛、最成功的表達(dá)系統(tǒng)。酵母表達(dá)系統(tǒng):=1\*GB3①是真核表達(dá)體系,對(duì)表達(dá)蛋白可進(jìn)行折疊和翻譯后的修飾與糖基化;=2\*GB3②表達(dá)量高,如明膠表達(dá)量達(dá)14。8g/L;=3\*GB3③培養(yǎng)成本低;=4\*GB3④適用高密度發(fā)酵;=5\*GB3⑤雜蛋白少,產(chǎn)物易純化。哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng):中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和猴腎細(xì)胞(COS)優(yōu)點(diǎn)是能識(shí)別和剪切外源基因的內(nèi)含子并加工成為成熟的mRNA.但其培養(yǎng)技術(shù)難度大,成本高,研究與生產(chǎn)周期長。三體系表達(dá)特點(diǎn)比較表達(dá)體系產(chǎn)物產(chǎn)生部位培養(yǎng)方式提純產(chǎn)物活性潛在危險(xiǎn)大腸桿菌多肽、蛋白質(zhì)或融合蛋白質(zhì)菌體內(nèi)容易部分可獲得高產(chǎn)一般對(duì)原核者好真核者稍差不大β鹽析:在一定離子強(qiáng)度下僅改變pH和溫度進(jìn)行鹽析。鹽析分布曲線:蛋白質(zhì)沉淀的速度可用—dS/dP對(duì)鹽飽和度(P)作圖表示。蛋白質(zhì)沉淀的速率開始時(shí)十分迅速,以后變慢,從起始沉淀到沉淀結(jié)束,形成具有尖峰的曲線。透析結(jié)晶法:為了使蛋白質(zhì)溶解度的變化緩慢而且連續(xù),而進(jìn)行透析的方法;在鹽濃度緩慢降低的結(jié)晶情況下,進(jìn)行透析。第六章吸附法1、化學(xué)吸附與物理吸附的區(qū)別:當(dāng)吸附劑和吸附物之間作用力是通過分子間引力(范德華力)產(chǎn)生的吸附稱為物理吸附,最常見的一種吸附現(xiàn)象。在吸附劑和吸附物之間有電子的轉(zhuǎn)移,發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生化學(xué)鍵,這種吸附稱為化學(xué)吸附。物理吸附是可逆的,可以是單分子層吸附或多分子吸附,選擇性較差。物理吸附與吸附劑的表面積、孔分布和溫度等因素有密切的關(guān)系?;瘜W(xué)吸附的選擇性強(qiáng),即一種吸附劑只對(duì)某種或特定幾種物質(zhì)有吸附作用,只能形成單分子層吸附,吸附后較穩(wěn)定,不易解吸,平衡慢。項(xiàng)目物理吸附化學(xué)吸附作用力范德華庫侖力吸附力較小,接近液化熱較大,接近反應(yīng)熱選擇性幾乎沒有有選擇性吸附速度較快,需要活化能很小慢,需要較高的活化能吸附分子層單分子層或多分子層單分子層2、吸附劑及被吸附物的極性對(duì)吸附的影響:一般極性吸附劑易吸附極性物質(zhì),非極性吸附劑易吸附非極性物質(zhì)。極性吸附劑適宜從非極性溶劑中吸附極性物質(zhì),非極性吸附劑適宜從極性溶劑中吸附非極性物質(zhì)。如活性炭從水中吸附有機(jī)化合物;硅膠是極性的,適宜從有機(jī)溶劑中吸附極性物質(zhì)。3、吸附劑用量及吸附劑濃度對(duì)于吸附效果的影響:一般吸附物濃度大時(shí),吸附量也大。由于雜質(zhì)存在,濃度升高后,吸附的雜質(zhì)量也上升,吸附選擇性差。提高吸附選擇性,常將料液適當(dāng)稀釋。吸附量是指單位重量吸附劑所吸附物質(zhì)的量。4兩種以上常用吸附劑的性質(zhì),用途。活性炭:吸附能力很強(qiáng)的非極性吸附劑。價(jià)格低,來源廣。除雜,生化藥物的分離。人造沸石:人工合成的無機(jī)陽離子交換劑。帶正電荷。與鈉離子交換。磷酸鈣凝膠:吸附作用主要是鈣離子與蛋白質(zhì)負(fù)電基團(tuán)結(jié)合。白陶土:活性物質(zhì)分離純化的吸附劑,也可作為助濾劑與去除熱原的吸附劑。白陶土能吸附分子量較大的雜質(zhì),包括導(dǎo)致過敏的物質(zhì),常用它脫色。:氧化鋁:適用于親脂性成分的分離價(jià)廉,再生容易,活性易控制,操作不便,手續(xù)繁瑣,處理量有限硅膠:活性強(qiáng)弱與自由水的含量有關(guān),自由水多,活性低,自由水少,活性高。5、大網(wǎng)格高聚物吸附劑與傳統(tǒng)吸附劑相比的優(yōu)點(diǎn):選擇性好、解吸容易,理化性質(zhì)穩(wěn)定,機(jī)械強(qiáng)度好,反復(fù)使用,流體吸力較小。6術(shù)語:正吸附:吸附提取液中的有效成分。負(fù)吸附:去除提取液中的雜質(zhì)。大網(wǎng)格高聚物吸附劑:與大孔網(wǎng)狀離子交換樹脂具有相同的大網(wǎng)狀骨架,保留離子交換樹脂的功能團(tuán),性質(zhì)與活性炭、硅膠等吸附劑相似。第七章凝膠層析1、公式Ve=Vo+KdVi各字母的含義,凝膠層析的原理。Ve——淋出體積Vo——粒尖體積Vi——填料的孔體積Kd——排阻系數(shù)或分配系數(shù)凝膠層析原理:平衡排除理論一個(gè)高聚物分子的流出體積是由在宏觀的流動(dòng)相和微觀的孔體積中的平衡分配系數(shù)所決定的。這里所謂的平衡是指擴(kuò)散的平衡,即溶質(zhì)分子擴(kuò)散進(jìn)入一個(gè)填料顆??字星以俪鰜硭枰臅r(shí)間遠(yuǎn)小于溶質(zhì)區(qū)段在此停留的時(shí)間。換言之,當(dāng)溶質(zhì)分子流過一個(gè)填料顆粒這段距離時(shí),溶質(zhì)分子已多次進(jìn)出于填料的孔,達(dá)到平衡。平衡條件只是在流速很慢時(shí)一個(gè)極端情況。2、常用凝膠的名稱、特點(diǎn)及用途。名稱特點(diǎn)用途葡聚糖凝膠(SephadexG)最常用,穩(wěn)定,對(duì)陽離子輕微吸附,多次重復(fù)使用分離修飾葡聚糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠化學(xué)穩(wěn)定好,成分不易脫落,適用pH廣,機(jī)械強(qiáng)度好,無帶電基團(tuán),分辨率較高瓊脂糖類凝膠多孔玻璃微球化學(xué)穩(wěn)定性高、強(qiáng)度大、高壓下操作,好的流速;缺點(diǎn)是對(duì)糖類、葡萄糖吸附疏水性凝膠只適用分離分子量較小的物質(zhì)分離不溶水的有機(jī)物質(zhì)3、選擇凝膠:選擇何種凝膠及其型號(hào)、粒度,一方面是考慮凝膠的性質(zhì),包括凝膠的分離分子量范圍,(滲入限與排阻限),理化穩(wěn)定性、強(qiáng)度、非特異吸附性質(zhì)等;另一方面還要注意分離目的和樣品的性質(zhì)。4、好的凝膠層析效果如何選柱、裝柱。選柱:層析柱的有效體積與柱比的選擇必須根據(jù)樣品的數(shù)量、性質(zhì)及分離目的加以確定。對(duì)于類分離,柱床體積一般微樣品溶液體積的5倍或略微多一些就夠了,柱比5:1或10:1,對(duì)于分級(jí)分離,要求柱床體積大于樣品體積25倍以上,柱比在25~100之間。底端支持物滿足兩個(gè)條件:不易阻塞,死腔小。裝柱:正式裝柱前必須檢查柱底的凝膠支持物是否符合要求。要求不漏不堵,不吸附樣品,且能保持一定的流速。在裝柱時(shí),連續(xù)攪拌下小心裝柱。開始裝柱時(shí),避免膠粒直接沖擊支持物,空柱種應(yīng)約留1/5的水或溶劑。所用的凝膠必須是用相應(yīng)溶劑系統(tǒng)充分溶脹的。為了防止柱中出現(xiàn)氣泡,凝膠懸液溫度必須與室溫平衡并用水泵減壓排氣。進(jìn)膠過程必須連續(xù)、均勻,不要中斷,并在不斷攪拌下使膠粒均勻沉降,使不發(fā)生凝膠分層和膠面傾斜。5、溶質(zhì)通過色譜峰時(shí)造成的峰加寬效應(yīng)包括:(1)分子擴(kuò)散:使用顆粒度小而均勻的填料可以降低擾動(dòng)作用。(2)渦流擴(kuò)散:渦流擴(kuò)散對(duì)凝膠色譜峰的加寬比較重要。應(yīng)用小而均勻的填料緊密地裝在內(nèi)徑適當(dāng)?shù)闹锌梢詼p少由渦流擴(kuò)散造成的峰加寬,提高效柱。(3)流動(dòng)相中傳質(zhì)阻力造成的色譜峰加寬。擴(kuò)散速度越快,流速不平衡的影響就越小。(4)固定相中傳質(zhì)阻力造成的色譜峰加寬。填充介質(zhì)粒度越小所造成的峰加寬效應(yīng)也小。溶液在柱外產(chǎn)生的峰加寬:(1)連接管路(2)檢測(cè)池6、利用凝膠層析測(cè)量蛋白質(zhì)的分子量。測(cè)定的依據(jù)是不同分子量的物質(zhì),只要在凝膠的分離范圍內(nèi)(滲透限與排阻限之間),洗脫體積Ve及分配系數(shù)Kd值隨分子量增加而下降。對(duì)于一個(gè)特定體系,待測(cè)定物質(zhì)洗脫體積與分子量之間的關(guān)系:Ve=-KlgM+C(1)求解法以兩個(gè)已知分子量的蛋白質(zhì)過柱,求出C和K,將待測(cè)物的Ve代入得到M。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線法以多個(gè)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白過柱,測(cè)取各自的Ve值。以Ve作縱坐標(biāo),lgM作橫坐標(biāo),,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。在同一測(cè)定體系中測(cè)取未知物質(zhì)的Ve,由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得分子量。7術(shù)語柱比:層析柱的長度與直徑的比值操作壓:凝膠層析由于進(jìn)出口之間液位差形成的對(duì)凝膠顆粒的壓力內(nèi)水體積:柱中凝膠顆粒內(nèi)部所含的液相體積。外水體積:凝膠柱床中凝膠顆粒之間的液相體積。類分離:分開樣品分子中分子量懸殊較大的兩類物質(zhì),并不要求分離分子量相近的組分。分級(jí)分離:分開分子量不很懸殊的大分子物質(zhì)。排阻系數(shù):表征物質(zhì)分子進(jìn)入凝膠顆粒的程度。全滲入:Kd=1全排阻:Kd=0分離限..分辨率:R=△Ve/(1/2(Wa+Wb))分辨率與洗脫體積的差值成正比,而與兩物質(zhì)的洗脫峰寬度成反比。
第8章離子交換1、離子交換常用洗脫方法:從樹脂上洗脫目的物的方法主要有兩種:調(diào)節(jié)洗脫液的pH,使目的物粒子在此pH下失去電荷,甚至帶相反電荷,從而喪失與原離子交換樹脂的結(jié)合力而被洗脫下來。用高濃度的同性離子根據(jù)質(zhì)量作用定律將目的物離子取代下來。2、離子交換樹脂的命名法。舉兩種樹脂骨架。樹脂命名編號(hào):強(qiáng)酸類1~100號(hào),弱酸類101~200號(hào),強(qiáng)堿類201~300號(hào),弱堿類301~400號(hào),中強(qiáng)酸401~500。各種樹脂除注明類別和編號(hào)外,還需標(biāo)明載體的交聯(lián)度。書寫交聯(lián)度時(shí),將百分號(hào)除去,寫在樹脂編號(hào)后并用乘號(hào)“X”隔開。強(qiáng)酸1X7,交聯(lián)度為7%。樹脂骨架:(1)苯乙烯型離子交換樹脂(2)丙烯酸型陽離子交換樹脂(3)多乙烯多胺——環(huán)氧氯丙烷樹脂(4)聚乙烯砒啶系離子交換樹脂(5)其他離子交換樹脂蛇籠樹脂選擇性離子交換樹脂熱再生離子交換樹脂3、離子交換的選擇性的因素:一、離子化合價(jià)與水合半徑的影響二、離子化合價(jià)與離子濃度的影響三|、交換環(huán)境的影響(1)溶液的pH(2)離子強(qiáng)度(3)有機(jī)溶劑四、樹脂結(jié)構(gòu)的影響(1)樹脂載體交聯(lián)度(2)輔助力(3)其他結(jié)合力五、偶極離子排斥作用。4、偶極離子的交換特點(diǎn):凈電荷為零時(shí),正電中心和負(fù)電中心并不重疊,遂成偶極。鈉型樹脂,被吸附的氨基酸的羧基所帶的負(fù)電荷與樹脂磺酸基的負(fù)電荷產(chǎn)生排斥力。偶極離子的排斥作用,所以使樹脂對(duì)氨基酸的吸附量大大降低。氫型樹脂:由于氨基酸的解離度低,被取代之氫離子為羧基所固定,使被吸附的氨基酸不能形成偶極,故與樹脂磺酸基沒有排斥力。偶極離子的排斥力隨氨基酸的R基碳鏈的加長而減弱。適當(dāng)增加溶液中離子強(qiáng)度,偶極排斥力減弱。5、大孔、均孔樹脂的特點(diǎn):大孔型離子交換樹脂的特征:1載體骨架交聯(lián)度高,有較好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性及機(jī)械強(qiáng)度。2孔徑大,不受環(huán)境條件的影響,動(dòng)力學(xué)性能好,抗污染能力強(qiáng),交換速度快。3表面積大,表面吸附能力強(qiáng),對(duì)大分子物質(zhì)的交換容量大4孔隙率大,比重大,對(duì)小離子的體積交換量比凝膠型樹脂小。均孔樹脂的特點(diǎn):主要為陰離子交換樹脂,骨架的交聯(lián)度比較均勻,孔徑大小一致,重量和體積交換容量都較高,膨脹度、相對(duì)密度適中、機(jī)械強(qiáng)度好、抗污染和再生能力強(qiáng)。6、離子交換纖維素的特點(diǎn)及洗脫。離子交換纖維素為開放的長鏈骨架,大分子物質(zhì)能自由地在其中擴(kuò)散和交換,親水性強(qiáng),表面積大,易吸附大分子;交換基團(tuán)稀疏,對(duì)分子的實(shí)際交換容量大;吸附力弱,交換和洗脫條件緩和,不易引起變性;分辨率強(qiáng),能分離復(fù)雜的生物大分子混合物。洗脫:對(duì)離子交換纖維素進(jìn)行吸附后的洗脫一般比從離子交換樹脂的洗脫緩和。升高環(huán)境的pH或是降低環(huán)境的pH或增加離子強(qiáng)度都能將被吸附物質(zhì)洗脫下來。7、酸堿性蛋白選擇合適的離子交換纖維素。酸性蛋白質(zhì)(等電點(diǎn)約pH5),作為一個(gè)陰離子,它的DEAE-纖維素柱層析可在pH5。5~9。0之間進(jìn)行,蛋白質(zhì)和交換劑都是解離的,帶有相反的電荷。在CM-纖維素上層析則需限制在(pH3.5~4.5)之間。堿性蛋白質(zhì)(等電點(diǎn)約pH8)作為一個(gè)陽離子,用羧甲基纖維素層析可在pH3.~7.5進(jìn)行。8、離子交換聚焦色譜的原理:(1)pH梯度的形成:色譜聚焦利用離子交換劑本身的帶電基團(tuán)的緩沖作用,當(dāng)洗脫緩沖液不斷滴到離子交換柱上時(shí),柱內(nèi)自動(dòng)形成pH梯度。(2)蛋白質(zhì)的色譜行為:蛋白質(zhì)所帶電荷取決與他們的等電點(diǎn)和介質(zhì)的pH.當(dāng)介質(zhì)的pH低于它的等電點(diǎn)時(shí),蛋白質(zhì)帶正電荷,它不與陰離子交換劑結(jié)合,隨洗脫液向下移動(dòng)。(3)聚焦效應(yīng):當(dāng)一種蛋白質(zhì)在柱上隨洗脫液下移至等電點(diǎn)處,移動(dòng)速度明顯減慢。加上相同的第二個(gè)樣品,它將以洗脫液移動(dòng)的速度下降,,直到追到正在慢移的第一個(gè)樣品成分處(聚焦)。然后這兩個(gè)樣品一起下移,往柱下一起洗脫出來。所有的樣品必須在第一個(gè)樣品峰尚未被洗脫前加入。9舉例三種常用離子交換樹脂和離子交換纖維素。大孔型強(qiáng)酸型離子交換樹脂大孔型弱酸型離子交換樹脂大孔型弱堿型離子交換樹脂甲基磺酸纖維素乙基磺酸纖維素二乙基氨基乙基纖維素芐基化的DEAE纖維素10、術(shù)語:CM-C:羧甲基纖維素。DEAE-C:二乙氨基乙基纖維素。PBE94:多緩沖交換劑尼柯爾斯方程:m1(1/z1)/m2(1/z2)=Kc1<1/z1>/c2<1/z2>..交換容量:meq/g(毫克當(dāng)量/克樹脂)樹脂再生:使用過的樹脂重新獲得使用性能的處理過程。偶極離子排斥:被吸附的氨基酸的羧基所帶的負(fù)電荷與樹脂之負(fù)電荷產(chǎn)生排斥力。蛇籠樹脂:由丙烯酸或甲基丙烯酸在季胺型陰離子交換樹脂中聚合而成的一類樹脂。第九章親和層析1、親和層析原理,主要特點(diǎn)。利用生物體中多數(shù)大分子物質(zhì)具有與某些相應(yīng)的分子專一型可逆結(jié)合的特性。主要特點(diǎn):經(jīng)過一此簡單的處理就可以獲得所需的高純度活性物質(zhì)。對(duì)設(shè)備要求不高,操作簡便,使用范圍廣,特異性強(qiáng),分離速度快,分離效果好,分離條件溫和。缺點(diǎn)是吸附劑的通用性較差。2、選擇配基的注意點(diǎn):(1)配基與配體由足夠大的親和力(2)配基與配體的結(jié)合應(yīng)是專一的(3)配基應(yīng)具有化學(xué)活性。3、手臂,其長短與親和層析的效果的聯(lián)系,為什么。由于酶的活性中心常是埋藏在其結(jié)構(gòu)的內(nèi)部,它們與介質(zhì)的空間障礙影響其與親和配基的結(jié)合作用。在載體和配基之間插入手臂,以消除空間障礙,手臂的長度是有限的,太短不能起消除空間障礙的作用,太長會(huì)使非特異性性吸附增加。4、制作高親和力的親和吸附劑:提高親和層析效果,固定相的配基和流動(dòng)相的配基具有較強(qiáng)的親和力。配基濃度對(duì)親和力的影響。為了將親和配體和其他物質(zhì)分開,在實(shí)際親和層析時(shí),通常需要阻流值≥10??臻g障礙的影響:插入適當(dāng)長度的手臂。配基與載體的結(jié)合位點(diǎn)的影響。載體孔徑的大小對(duì)吸附劑的親和能力有決定性的作用。微環(huán)境的影響,包括載體及手臂的電性、極性、次級(jí)鍵對(duì)配基親和力的影響。5、非專一性吸附包括那些:如何克服。親和層析中的非專一性吸附有以下情況:(1)離子情況(2)疏水基團(tuán)a長的烴類結(jié)構(gòu)的“手臂”b疏水性配基(3)復(fù)合親和力確定離子強(qiáng)度以獲得良好的分離效果6、親和層析洗脫方法:(1)非專一性洗脫改變洗脫劑的pH以影響電性基團(tuán)的解離程度而洗脫(2)特殊洗脫(3)專一性洗脫競爭性效應(yīng)非競爭性效應(yīng)反競爭性效應(yīng)7、二次作用親和沉淀:利用在物理場(chǎng)(如pH、離子強(qiáng)度、溫度和舔加金屬離子等)改變時(shí)溶解度下降,發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基,制備親和沉淀介質(zhì)。親和介質(zhì)結(jié)合目的分子后,通過改變物理場(chǎng)使介質(zhì)與目標(biāo)分子共同沉淀的方法。8、親和膜分離原理及特點(diǎn):親和膜利用親和配基修飾的微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標(biāo)蛋白質(zhì),是固定床親和層析的變型。優(yōu)點(diǎn):(1)傳質(zhì)阻力小,達(dá)到吸附平衡的時(shí)間短,配基利用率高。(20壓降小,流速快,設(shè)備體積小,配基用量低。缺點(diǎn):理論塔板很低,吸附和清洗率低。9術(shù)語:親和力:配基對(duì)互補(bǔ)分子間的作用力,是制備高效親和柱的重要參數(shù)。親和吸附劑:載體——配基。配基:在親和層析中起可逆結(jié)合的特異性物質(zhì)。阻流值:Ve/Vo。正洗脫:吸附提取物中的有效成分。負(fù)洗脫:去處提取物中的雜質(zhì)。金屬螯合層析:利用金屬離子的絡(luò)合或形成螯合物的能力吸附蛋白質(zhì)的分離系統(tǒng)。有機(jī)染料親和層析:有機(jī)染料如蒽醌化合物和偶氮化合物具有類似于NAD+的結(jié)構(gòu),一些需要核酸類物質(zhì)為輔酶的酶,對(duì)這些染料具有一定的親和力,將這些染料共價(jià)偶聯(lián)到纖維素或瓊脂等多糖載體上,就制得親和層析柱。親和錯(cuò)流過濾:(affinitycrossflowfiltration)ACFF將親和層析與超濾技術(shù)結(jié)合,高分子底物經(jīng)專一可逆的親和反應(yīng)后,用膜進(jìn)行錯(cuò)流過濾,兼有親和層析與膜過濾的優(yōu)點(diǎn)。親和萃?。豪门悸?lián)親和配基的PEG為成相聚合物進(jìn)行目標(biāo)產(chǎn)物的雙水相萃取,可在親和配基的親和作用下促進(jìn)目標(biāo)產(chǎn)物在PGE相(上相)的分配,提高目標(biāo)產(chǎn)物的分配系數(shù)和選擇性。親和反膠團(tuán)萃?。菏侵冈诜茨z團(tuán)相中除通常的表面活性劑(如AOT)外,舔加另一種親水頭部為目標(biāo)分子的親和配基的助表面活性劑,通過親和配基與目標(biāo)分子的親和結(jié)合作用,促進(jìn)目標(biāo)產(chǎn)物在反膠團(tuán)相的分配,提高目標(biāo)產(chǎn)物的分配系數(shù)和反膠團(tuán)萃取分離的選擇性。第十章離心技術(shù)1、相對(duì)離心力:(RCF)離心力與重力的比值。用符號(hào)“×g”或“g”表示。RCF=11.18×10Nr(×g)2、離心機(jī)轉(zhuǎn)子有幾種,各自特點(diǎn)。(1)角度轉(zhuǎn)子:機(jī)械強(qiáng)度高,重心低,運(yùn)轉(zhuǎn)平穩(wěn),壽命長,管內(nèi)溫度分布均勻,溫差對(duì)流小,離心時(shí)間短,使用方便,但離心管外壁易產(chǎn)生強(qiáng)烈對(duì)流和渦流,同時(shí)管外側(cè)會(huì)出現(xiàn)沉淀,形成壁效應(yīng)。(2)水平轉(zhuǎn)子:結(jié)構(gòu)復(fù)雜,加工困難,機(jī)械強(qiáng)度低,重心高,容量小,低速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)易搖擺,離心時(shí)間長,壽命短而價(jià)格高。對(duì)流作用小,“壁效應(yīng)”弱。(3)區(qū)帶轉(zhuǎn)子:Anderson轉(zhuǎn)子,無離心管,“十”字隔板將樣品槽分為四個(gè)扇形室。無壁效應(yīng),適用于大量樣品的密度梯度及等密度梯度離心。配有附屬設(shè)備和儀器,操作過程復(fù)雜,設(shè)備較貴,但離心機(jī)使用效率高。(4)垂直管轉(zhuǎn)子:特殊類型的定角轉(zhuǎn)子。離心時(shí)的碰撞及溫差引起的對(duì)流不顯著。顆粒沉降時(shí)間短,可用于差速、密度梯度及等密度離心,用于平衡等密度離心時(shí)效果最佳。(5)連續(xù)離子轉(zhuǎn)子:低速或高速離心機(jī)轉(zhuǎn)子,可用于超速離心機(jī)。結(jié)構(gòu)簡單,低速時(shí)加樣,高速時(shí)排出清夜。用于實(shí)驗(yàn)室,也可用于小規(guī)模生產(chǎn),最適宜自培養(yǎng)液中收集菌體及細(xì)胞。(6)細(xì)胞洗脫轉(zhuǎn)子:低速離心時(shí)連續(xù)分離型轉(zhuǎn)子,最高轉(zhuǎn)速不超過6000r/min。最適于自動(dòng)植物培養(yǎng)液或發(fā)酵液中連續(xù)分離單細(xì)胞和菌體,回收濃度及回收率均較高。3、速度區(qū)帶離心的特點(diǎn)及其用途:離心操作時(shí)將樣品液置于連續(xù)或不連續(xù)線形或非線形密度梯度液上,控制離心時(shí)間,使所需組分通過部分梯度液,形成的分離區(qū)帶在達(dá)到其等密度區(qū)之前即停止離心。速度區(qū)帶離心的特點(diǎn):(1)樣品加于梯度介質(zhì)的頂步、離心時(shí)間需嚴(yán)格控制。(2)介質(zhì)的密度需嚴(yán)格掌握:梯度最大值≤組分最小密度(3)樣品的密度<梯度密度最小值(4)分離依據(jù)是各組分之沉降系數(shù)差(5)分辨率受組分沉降系數(shù)、離心時(shí)間、顆粒擴(kuò)散系數(shù)、介質(zhì)黏度及梯度范圍和形狀的影響。本法適于分離顆粒大小不同而密度相近的組分,如DNA與RNA混合物、核蛋白體亞單位及線粒體、溶酶體及過氧化酶體。4、差分離心的特點(diǎn)、用途。原理是依據(jù)不同大小和密度的顆粒在離心力場(chǎng)中沉降速度的差異進(jìn)行離心分離。所得的沉淀物只具有相對(duì)純度而不具有絕對(duì)均一性。5、密度梯度的設(shè)計(jì)包括:(1)密度梯度介質(zhì)的選用(2)梯度的密度范圍(3)梯度的形狀(4)梯度的容量、(5)直線型梯度的斜率6、“密度梯度”通常的制備方法:(1)不連續(xù)梯度的制備、(2)混合梯度法(3)離心平衡法7、梯度的取出與收集的方法:(1)底部穿刺法(2)頂步收集法取代法虹吸法(3)切割法凍結(jié)切割法聚合切割法8術(shù)語區(qū)帶轉(zhuǎn)子:Anderson轉(zhuǎn)子,無離心管,“十”字隔板將樣品槽分為四個(gè)扇形室。無壁效應(yīng),適用于大量樣品的密度梯度及等密度梯度離心。角度轉(zhuǎn)子:定角轉(zhuǎn)子速度區(qū)帶離子法:離心操作時(shí)將樣品液置于連續(xù)或不連續(xù)線形或非線形密度梯度液上,控制離心時(shí)間,使所需組分通過部分梯度液,形成的分離區(qū)帶在達(dá)到其等密度區(qū)之前即停止離心。差分離心:差速離心。原理是依據(jù)不同大小和密度的顆粒在離心力場(chǎng)中沉降速度的差異進(jìn)行離心分離。所得的沉淀物只具有相對(duì)純度而不具有絕對(duì)均一性。等密度離心法:離心平衡法,在離心力的作用下,不同密度的多組分顆粒在梯度介質(zhì)中“向上”或“向下”移動(dòng)。當(dāng)移動(dòng)至其密度與介質(zhì)密度相等的位置便不再移動(dòng),形成靜止區(qū)帶,即達(dá)到離心平衡。第十一章過濾和膜分離技術(shù)用于制作透析膜的材料所應(yīng)具有的特點(diǎn):在使用的溶劑介質(zhì)中能形成具有一定孔徑的分子篩樣薄膜。由于介質(zhì)一般為水,所以膜材料應(yīng)具有親水性,它只允許小分子溶質(zhì)通過。在化學(xué)上呈惰性。不具有與溶質(zhì)、溶劑起作用的基團(tuán)。有良好的物理性能。包括一定的強(qiáng)度和柔韌度,不易破裂,有良好的再生性能,便于多次重復(fù)使用。透析裝置的類型:(1)旋轉(zhuǎn)透析器(2)平面透析器(3)連續(xù)透析器(4)淺流透析器克服濃差極化現(xiàn)象的措施:克服極化的主要措施有振動(dòng)、攪拌、錯(cuò)流、切流等技術(shù),但應(yīng)注意過于激烈的措施易使蛋白質(zhì)等生物大分子變性失活。此外,將某種水解酶類固定于膜上,能降解造成極化現(xiàn)象的大分子,提高流速。不過這種措施沒有通用性,只適用于一些特殊情況。實(shí)驗(yàn)用超濾器的類型:(1)無攪拌式裝置(2)攪拌或振動(dòng)式裝置(3)小棒超濾器(4)淺道系統(tǒng)超濾裝置膜孔徑檢測(cè)技術(shù):(1)氣泡壓力法D=4Kσcosθ/P修正為:D=4σ/P(2)水流量法:將濾膜以蒸餾水完全潤濕,裝于濾器中,下接抽氣瓶。開動(dòng)真空泵,使壓力穩(wěn)定于700mmHg柱,然后加入潔凈蒸餾水100ml,記錄下抽濾100ml水所需要的時(shí)間。計(jì)算孔徑:r=(其中r——濾膜孔隙半徑,cm;K——0.265;S——膜的厚度,mm;V——蒸餾水體積,ml;G——干濕膜重量差,g;P——壓力差,dyn/cm;t——時(shí)間,s。)(3)細(xì)菌過濾法6、超濾技術(shù)及優(yōu)點(diǎn)。超濾技術(shù)是一項(xiàng)分子級(jí)薄膜分離手段。它以特殊的超濾膜為分離介質(zhì),以膜兩側(cè)的壓力差為推動(dòng)力,將不同分子量的物質(zhì)進(jìn)行選擇性分離。優(yōu)點(diǎn):沒有相轉(zhuǎn)移,無需舔加任何強(qiáng)烈化學(xué)物質(zhì),可以在低溫下操作,過濾速度較快,便于做無菌處理等。使分離操作簡化,避免生物活性物質(zhì)的活力損失和變性。7術(shù)語超濾:以特殊的超濾膜為分離介質(zhì),以膜兩側(cè)的壓力差為推動(dòng)力,將不同分子量的物質(zhì)進(jìn)行選擇性分離??紫堵剩何⒖诪V膜孔隙總體積與濾膜總體積之比各向異性膜:在厚度方向上物質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同的膜。濃度極化現(xiàn)象:超濾在外壓作用下進(jìn)行。外源壓力迫使分子量較小的溶質(zhì)通過薄膜,而大分子被截留于膜表面,并逐漸形成濃度梯度。水流量法:將濾膜以蒸餾水完全潤濕,裝于濾器中,下接抽氣瓶。開動(dòng)真空泵,使壓力穩(wěn)定于700mmHg柱,然后加入潔凈蒸餾水100ml,記錄下抽濾100ml水所需要的時(shí)間。氣泡壓力法:在多孔板上加3~5mm深的水或其他液體。在容器處于密封狀態(tài)下引入壓縮空氣,使桶內(nèi)壓力緩慢上升。當(dāng)膜面出現(xiàn)第一個(gè)氣泡,記下壓力計(jì)讀數(shù),將此壓力換算成dyn/cm,進(jìn)行計(jì)算。第十二章制備高效液相色譜HPLC的組成部分:進(jìn)樣器、高壓泵、預(yù)柱、色譜柱、柱頭、檢測(cè)器理論塔板數(shù)及分離度的計(jì)算公式:理論塔板數(shù)N:分離度R:3、制備型高效液相色譜的重要參數(shù):分離度(resolution)、分離速度(speed)、回收率(recovery)、樣品容量(capacity)主要考慮樣品容量、回收率、和產(chǎn)率。4、蛋白質(zhì)分離的依據(jù):蛋白質(zhì)的疏水性、分子的大小、等電點(diǎn)。5、色譜介質(zhì)按分離機(jī)理分為:液固色譜、鍵合相色譜、離子交換色譜、離子交換色譜、離子對(duì)色譜、凝膠色譜、疏水色譜、親和色譜、聚焦色譜、金屬螯合親和色譜制備型HPLC與分析型HPLC的主要不同點(diǎn)參數(shù)分析型制備型柱內(nèi)徑(mm)2~5>10柱填料30、5、10μm全多孔或30μm薄殼型10、50μm全多孔流動(dòng)相流速(ml/min)~1>10流動(dòng)相線速度(cm/s)0.1~10.01~0.5樣品體積(μl)<200>1000要求的檢測(cè)靈敏度高低注射的樣品量(mg)<0.5>100術(shù)語塔板理論:塔板理論把色譜柱看作一個(gè)分餾塔,有如下基本假設(shè):色譜柱是由一系列連續(xù)、等距的水平塔板組成。在柱內(nèi)每層塔板內(nèi)部,組成能夠在流動(dòng)相和固定相中達(dá)到平衡。流動(dòng)相通過色譜柱呈間歇式前進(jìn)運(yùn)動(dòng),每次前進(jìn)為一個(gè)塔板體積。樣品和流動(dòng)相同時(shí)加在第一個(gè)塔板上,且樣品垂直于前進(jìn)方向的擴(kuò)散(縱向擴(kuò)散)可以忽略。分配系數(shù)在各塔板上是常數(shù)。速率理論:在低流速時(shí)增加流速,峰變銳,柱效增加;當(dāng)超過一定流速時(shí)峰變鈍,柱效降低。用塔板高度H對(duì)載氣流量μ作圖為二次曲線,曲線最低點(diǎn)對(duì)應(yīng)的塔板高度最小,柱效最高,此時(shí)流速為最佳流速()其數(shù)學(xué)表達(dá)式為H=A+B/μ+Cμ容量因子:溶質(zhì)在固定相中的總摩爾數(shù)與流動(dòng)相中的總摩爾數(shù)之比。選擇因子:表示柱對(duì)難分離物質(zhì)的選擇性的好壞。綜合表達(dá)式:第十三章生化藥物生化藥物的特點(diǎn)及主要資源。(主要資源:(1)氨基酸類藥物(2)多肽與蛋白質(zhì)類(3)核酸類藥物(4)酶類藥物(5)糖類藥物(6)脂類藥物(7)維生素及輔酶類藥理學(xué)特性:(1)藥理活性高(2)治療的針對(duì)性強(qiáng),治療的生理、生化機(jī)制合理,療效可靠。(3)毒副作用較少,營養(yǎng)價(jià)值高。(4)生理副作用常用發(fā)生。理化特性:(1)生物材料中的有效物質(zhì)含量低,雜質(zhì)種類多且含量相對(duì)較高。(2)生物活性物質(zhì)組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜、穩(wěn)定性差。(3)生物材料易染菌,腐敗。(4)生物藥物制劑的特殊要求。氨基酸的生產(chǎn)方法及各自特點(diǎn)水解法最早發(fā)展起來生產(chǎn)氨基酸的方法,以毛發(fā)、血粉及廢蠶絲等蛋白質(zhì)為原料,通過酸、堿或水解成多種氨基酸混合物,經(jīng)分離純化獲得各種藥用氨基酸。水解、分離、結(jié)晶。發(fā)酵法:微生物通過固氮作用,硝化還原及外界吸收氨使酮酸氨基化成相應(yīng)的氨基酸。酶轉(zhuǎn)化法:反應(yīng)大多在水溶液中進(jìn)行,條件溫和、選擇性高、副產(chǎn)物少、生產(chǎn)工藝簡單,分離精制容易?;瘜W(xué)合成法:以石油化工產(chǎn)品為原料,價(jià)格低廉,成本低、適合工業(yè)化生產(chǎn)。3、簡述用酶轉(zhuǎn)化法由反丁烯二酸生產(chǎn)天冬氨酸,丙氨酸的過程和所用的關(guān)鍵酶。關(guān)鍵酶:固定化天冬氨酸酶、固定化L-Asp-β-脫羧酶簡述氨基酸輸液的組方原理和原則,常用的氨基酸輸液的類型。組方的原理和原則:(1)所供氨基酸除質(zhì)量要合格外,尚需根據(jù)組合原理確定氨基酸的比例及組成。(2)在氨基酸輸液里,含必需氨基酸的同時(shí),加入恰當(dāng)組成的非必需氨基酸。必需氨基酸(E)與非必需氨基酸(N)之比一般在1:1或1:3之間。(3)在輸液中通常加入山梨醇或木糖醇,作為添加劑。常見的氨基酸輸液的類型:(1)氨基酸營養(yǎng)輸液(2)代血漿用輸液(3)止血用氨基酸輸液(4)嬰幼兒用氨基酸輸液(5)治療用氨基酸輸液多肽類藥物及蛋白質(zhì)類藥的分類。多肽類藥物的分類:多肽激素=1\*GB3①垂體多肽激素=2\*GB3②下丘腦激素=3\*GB3③甲狀腺激素=4\*GB3④胰島激素=5\*GB3⑤胃腸道激素=6\*GB3⑥胸腺激素多肽類細(xì)胞生長調(diào)節(jié)因子表皮生長因子(EGF)轉(zhuǎn)移因子(TG)心鈉素(ANP)含有多肽成分的其他生化藥物血活素胚胎素蛇毒等。以生物組織為原料提取純化多肽和蛋白質(zhì),在選擇材料及選擇分離純化方法時(shí)注意點(diǎn):材料選擇:種屬(2)發(fā)育生長階段(3)生物狀態(tài)(4)原料來源(5)原料解剖血部位分離純化方法:1根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的不同來純化蛋白質(zhì)2根據(jù)蛋白質(zhì)分子形狀和大小的不同來純化蛋白質(zhì)3根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的不同來純化蛋白質(zhì)4根據(jù)蛋白質(zhì)電離性質(zhì)的不同來純化蛋白質(zhì)5根據(jù)蛋白質(zhì)功能專一性的不同來純化蛋白質(zhì)6根據(jù)蛋白質(zhì)疏水基團(tuán)與相應(yīng)的載體基團(tuán)結(jié)合來純化蛋白質(zhì)7根據(jù)蛋白質(zhì)在溶劑系統(tǒng)種分配的不同來純化蛋白質(zhì)8根據(jù)蛋白質(zhì)的選擇性吸附性質(zhì)來純化蛋白質(zhì)9根據(jù)蛋白質(zhì)的某些特殊性質(zhì)進(jìn)行純化純化注意點(diǎn):分離純化早期使用方法的選擇2各種分離純化方法的使用順序3分離純化后期的保護(hù)性措施4對(duì)分離純化每一步驟的優(yōu)劣進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)酸醇提取法以胰臟為原料生產(chǎn)胰島素的工藝工藝流程:2.3~2.6倍的86%~88%乙醇(W/W)和5%草酸提取→用pH8.0~8.4濃氨水堿化,用硫酸酸化pH3.6~3.8→減壓濃縮,蒸去乙醇→去脂、27%(W/V)固體氯化鈉鹽析→精制→除酸性蛋白質(zhì)→鋅沉淀→結(jié)晶→回收重組DNA技術(shù)制造人胰島素的兩途徑。AB鏈合成法:以人工合成的人胰島素A鏈和B鏈基因,分別插入克隆載體質(zhì)粒所攜帶的β-半乳糖苷酶基因中,再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌,在細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制,并在β-半乳糖苷酶基因的信號(hào)序列的控制下,合成mRNA,再翻譯出A鏈和B鏈蛋白,用溴化氰(CNBr)將A鏈和B鏈聯(lián)接起來組成人胰島素。反轉(zhuǎn)錄酶法:通過胰島素原的cDNA合成人胰島素。先將mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶處理合成cDNA,用化學(xué)合成法把甲硫氨酸密碼子(ATG)接在胰島素原cDNA的5′末端,再將此基因插入pBR322質(zhì)粒載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌中增殖,連接物蛋氨酸使胰島素原從融合的蛋白質(zhì)中釋放出來。胰島素原折疊成三維結(jié)構(gòu),并形成二硫物,再經(jīng)工具酶切開,除去C-肽,即可獲得人胰島素。在多肽的固相合成方法中,常用的氨基保護(hù)劑有:(1)Boc(叔丁氧羰基)(2)Fmoc(9-芴甲氧羰基)熟悉多肽的固相合成方法的過程首先將一個(gè)用Fmoc基團(tuán)對(duì)α-氨基進(jìn)行保護(hù)的氨基酸通過一個(gè)支臂連接到一個(gè)不溶性載體上,隨后將α-氨基脫保護(hù),用溶液洗滌氨基酸—支臂—樹脂。將第二個(gè)預(yù)先活化的α-氨基保護(hù)的氨基酸通過偶連反應(yīng)連接上來。此外,也可以用α-N端及側(cè)鏈保護(hù)的肽片段代替單個(gè)的氨基酸進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng),縮合反應(yīng)完成后,用溶液洗滌,重復(fù)進(jìn)行脫保護(hù)、偶聯(lián)、直到得到目的肽,最后將肽—支臂—樹脂—裂解。這種延長肽鏈的固相合成法既可采用間斷的方法,也可使用連續(xù)流動(dòng)的方法。依據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及臨床應(yīng)用核酸類藥物分類:具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì),有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡,加速受損組織的修復(fù)。有ATP、輔酶A、脫氧核苷酸等。天然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸結(jié)構(gòu)類似物或聚合物,用于人類治療病毒、腫瘤、愛滋病等,產(chǎn)生干擾素、免疫抑制的抑制物質(zhì)。如:疊氮胸苷、環(huán)腺苷酸等。12、用營養(yǎng)缺陷型菌株發(fā)酵生產(chǎn)核苷及核苷酸的原理和方法。13、依據(jù)功效和臨床應(yīng)用酶類藥物分類酶類藥物:依照其功效和臨床應(yīng)用分類(1)消化酶類胰酶、胰脂酶、胃蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等(2)消炎(抗炎)、粘痰溶解酶類胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、膠原酶、SOD、菠蘿蛋白酶、溶菌酶、玻璃酸酶、DNase(3)循環(huán)酶類抗凝酶:鏈激酶、尿激酶、纖溶酶..止血酶:人凝血酶、蛇毒凝血酶、促凝血酶原激酶..血管活性酶:激肽釋放酶、彈性蛋白酶(4)抗腫瘤酶天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶(5)其它生理活性酶青霉素酶、尿酸酶、細(xì)胞色素C14、從生物材料中提取酶的主要過程和分離純化過程中應(yīng)注意的問題酶的純化:凡用于蛋白質(zhì)的純化手段均適用于酶的純化注意兩個(gè)問題:1.建立快速的測(cè)定酶活力的方法2.建立活力回收表酶的分離純化工作中的注意事項(xiàng):1.防止酶蛋白變性2.防止復(fù)因子丟失3.防止酶被蛋白水解酶降解15、CuZn-SoD和Mn-SoD的生產(chǎn)工藝及測(cè)定方法。(1)以牛血紅細(xì)胞提取Cu、Zn-SOD的工藝:(2)以牛肝為原料提取Mn-SOD的工藝16、粘多糖的特點(diǎn)粘多糖:是指含有氨基糖與糖醛酸或它的衍生物的多糖。粘多糖基本上是由特殊的重復(fù)雙糖單位構(gòu)成,在此雙糖單位中包括一個(gè)N-乙酰氨基己糖(2)粘多糖的組成結(jié)構(gòu)單位中有兩種糖醛酸。即D-葡萄糖醛酸和L-艾杜糖醛酸;有兩種氨基己糖,即:氨基-D-葡萄糖和氨基-D-半乳糖。(3)粘多糖中還有若干其它單糖作為附加成分,如半乳糖等17、多糖結(jié)構(gòu)和多糖活性的關(guān)系(1)多糖的高級(jí)結(jié)構(gòu)與生物活性的關(guān)系(2)多糖的分支度及其側(cè)鏈與生物活性的關(guān)系(3)多糖的分子量與活性的關(guān)系右旋糖苷:Mw10萬~20萬。紅細(xì)胞聚集。Mw2萬~4萬紅細(xì)胞解聚,治療血栓。(4)多糖中的取代基與生物活性的關(guān)系乙酰基:改變多糖的定向性和橫次性..硫酸基:抗凝血…抗病毒(包括抗艾滋病病毒):a多糖本身結(jié)構(gòu)(均一多糖)b分子量c硫酸基團(tuán)的含量18、鹽解—離子交換法生產(chǎn)肝素的工藝19、術(shù)語生化藥物:(biopharmaceutics)是利用生物體、生物組織、細(xì)胞或其成分,綜合應(yīng)用生物學(xué)與醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、微生物學(xué)與免疫學(xué)、物理化學(xué)與工程學(xué)和藥學(xué)的原理與方法加工制造而成的一大類用于預(yù)防、診斷、治療和康復(fù)保健的制品。粘多糖:是指含有氨基糖與糖醛酸或它的衍生物的多糖。多糖一級(jí)結(jié)構(gòu):通常指糖基的組成,糖基排列順序,相鄰糖基連接方式,異頭物構(gòu)型,糖基有無分支,分支的位置與長短以及糖基上羥基的取代情況等第十四章微生物藥物β-內(nèi)酰胺類抗生素,氨基糖苷類抗生素,大環(huán)內(nèi)酯類抗生素以及四環(huán)類抗生素結(jié)構(gòu)上特點(diǎn),熟悉代表品種的理化性質(zhì)。(1)β-內(nèi)酰胺類抗生素:β-內(nèi)酰胺類抗生素是一類在結(jié)構(gòu)上具有β-內(nèi)酰胺環(huán)(β-lactam),呈抗菌活性的天然的或化學(xué)改造的化合物的總稱。青霉素的基本母核為β-內(nèi)酰胺環(huán)核噻唑烷環(huán)并聯(lián)組成的N-酰基-6-氨基青霉烷酸,其側(cè)鏈上的R基可為不同基團(tuán)取代。青霉素是弱酸性物質(zhì),易溶于醇類、酮類、醚類和酯類溶劑中,其游離酸在水中的溶解度很小,但其金屬鹽類易溶于水,而幾乎不溶于乙醚、三氯甲烷和醋酸丁酯。工業(yè)上利用此原理,通過將青霉素G游離酸與醋酸鉀反應(yīng)生成鉀鹽,使之從醋酸丁酯相中析出,可得到高純度的青霉素G鉀鹽。青霉素是不穩(wěn)定的化合物,它在水溶液中極易被破壞而失活,溫度升高或在酸、堿性條件下分解更快。頭孢菌素C為兩性化合物,分子中有2個(gè)羧基和一個(gè)氨基,pK值分別為<2.6(側(cè)鏈羧基)、3.1(核羧基)、9.8(側(cè)鏈NH),在中型和偏酸性下呈酸性,能與堿金屬結(jié)合生成鹽類。其鈉鹽含2個(gè)結(jié)晶水,為白色或淡黃色結(jié)晶性粉末,易溶于水,不溶于有機(jī)溶劑。對(duì)稀酸及重金屬離子均穩(wěn)定,水溶液pH>11時(shí)迅速失活。(2)氨基糖苷類抗生素:氨基糖苷類抗生素失在分子中含有氨基糖苷結(jié)構(gòu)的一大類抗生素。它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)都是以氨基酸醇與氨基酸縮合而成的苷,其名稱應(yīng)為氨基糖苷-氨基環(huán)醇類抗生素。鏈霉素是由鏈霉胍同鏈霉糖和葡萄糖胺衍生物所構(gòu)成的糖苷。其分子中含胍基,呈強(qiáng)堿性,比較穩(wěn)定,易溶于水,難溶于有機(jī)溶劑。鏈霉素鹽酸易溶于甲醇,難溶于乙醇,而硫酸鹽即使在甲醇中也很難溶解。硫酸卡那霉素為白色或類白色粉末,無臭,味苦,有吸濕性。易溶于水,在乙醚或三氯甲烷中幾乎不溶,不溶于乙醇、丙酮、苯及醋酸乙酯。在pH2~11范圍內(nèi)較穩(wěn)定,在pH6~8加熱煮沸時(shí),活力可維持30min;加熱至120℃(3)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素:大環(huán)內(nèi)酯抗生素是以一個(gè)大環(huán)內(nèi)酯為母體,通過羥基,以苷鍵和1~3分子糖相連的一類抗生素物質(zhì)。紅霉素14元環(huán)是白色或類白色的結(jié)晶,微有吸濕性,味苦,易溶于醇類、丙酮、三氯甲烷、酯類、微溶于乙醚。溶解度在55℃(4)四環(huán)類抗生素:四環(huán)類抗生素系以四并苯(萘并萘)為母族的一族抗生素。固體四環(huán)類抗生素很穩(wěn)定。四環(huán)類抗生素的水溶液在不同pH下穩(wěn)定性差別大。四環(huán)類抗生素對(duì)各種氧化劑,包括空氣中的氧氣在內(nèi),都是不穩(wěn)定的。其堿性水溶液特別容易氧化,顏色很快變黑形成黑色色素。四環(huán)類抗生素在弱酸性溶液中比較穩(wěn)定。四環(huán)類抗生素能和很多高價(jià)金屬離子如鈣離子、鎂離子等形成螯合物,這一性質(zhì)用于從發(fā)酵液中提取四環(huán)素。四環(huán)類和尿素形成等摩爾比復(fù)合物,不溶于水,當(dāng)溶于有機(jī)溶劑時(shí),復(fù)合物即分離成四環(huán)素和尿素。微生物藥品的一般分離純化過程:預(yù)處理和過濾—交換洗脫、萃取—精制—脫色、結(jié)晶—洗滌、干燥熟悉幾大類抗生素制備工藝的一般流程,掌握其工藝要點(diǎn)。P577-P592a.青霉素:性質(zhì)很不穩(wěn)定,提煉過程應(yīng)在低溫、快速、嚴(yán)格控制pH下進(jìn)行,注意對(duì)設(shè)備清洗消毒減少污染,盡量避免青霉素效價(jià)的破壞損失。工藝要點(diǎn):發(fā)酵液預(yù)處理和過濾→萃取→脫色和脫水→結(jié)晶→洗滌干燥b.頭孢菌素C:工業(yè)上主要采用多種分離純化方法相結(jié)合的生產(chǎn)工藝,先用大孔網(wǎng)狀吸附劑從發(fā)酵液中初步分離出頭孢菌素C,然后經(jīng)離子交換法純化,最后采用絡(luò)鹽沉淀法進(jìn)行結(jié)晶。工藝要點(diǎn):預(yù)處理→大孔網(wǎng)狀吸附劑的吸附與解吸→離子交換樹脂的純化→沉淀結(jié)晶c.鏈霉素:提取目前均采用離子交換法、二次洗脫工藝要點(diǎn):預(yù)處理及過濾→交換和洗脫→精制→脫色、干燥d.卡那霉素:采用強(qiáng)酸型陽離子樹脂進(jìn)行提純濃縮。工藝要點(diǎn):預(yù)處理→樹脂洗脫→脫色→粗制→精制e.紅霉素:溶劑萃取法和大孔樹脂吸附法工藝要點(diǎn):發(fā)酵液的預(yù)處理和過濾→吸附→洗滌、解吸→反萃取→結(jié)晶f.麥迪霉素:它在不同的酸堿度溶解在不同溶劑中的特性,以丁酯和酸性水溶液反復(fù)萃取,最后轉(zhuǎn)入酸型水相,pH調(diào)至堿性,析出麥迪霉素游離堿,經(jīng)洗滌干燥后即得成品。g.四環(huán)素:工藝要點(diǎn):酸化過濾→粗品結(jié)晶→溶解→連續(xù)結(jié)晶→分離洗滌→氣流干燥→尿素復(fù)鹽結(jié)晶→溶解→結(jié)晶→分離洗滌→固定床氣流干燥根據(jù)給定藥物的性質(zhì),試設(shè)計(jì)其分離純化方法。離子交換法分離純化鏈霉素時(shí)用的離子交換樹脂,它們的作用和原理是什么?110-Na型樹脂吸附,鏈霉素在中性溶劑中,是三價(jià)的陽離子,可用陽離子交換樹脂吸附。NaOH中和后401樹脂吸附,一次洗脫液還存在鏈霉胍、鏈胍雙氫鏈霉糖、二鏈霉胺、色素等雜質(zhì),應(yīng)用芐胺樹脂與鏈霉素形成席夫堿反應(yīng)排除上述雜質(zhì),吸附飽和樹脂用無鹽水洗凈后同前用低溫硫酸洗脫得到二次洗脫液。1×14—H型樹脂精制,以離子篩的作用達(dá)到分離目的。330—OH型樹脂去除硫酸根等陰離子。列舉兩種微生物產(chǎn)生的酶抑制劑和免疫調(diào)節(jié)。酶抑制劑:(1)β-內(nèi)酰胺類酶抑制劑克拉維酸(2)膽固醇生物合成酶抑制劑a.HMG-CoA還原酶抑制劑美伐他汀b.HMG-CoA合成酶抑制劑1233A(3)鯊烯合成酶抑制劑免疫調(diào)節(jié)劑:(1)微生物產(chǎn)生的免疫抑制劑:環(huán)孢菌素A(2)微生物產(chǎn)生的免疫增強(qiáng)劑烏苯美司7術(shù)語:微生物藥物:是指由微生物在其生命活動(dòng)中產(chǎn)生的生理活性物質(zhì)及其衍生物,包括抗生素、維生素、氨基酸、核苷酸、酶、激素、免疫抑制劑等一類化學(xué)物質(zhì)的總稱,是人類控制感染等疾病、保障身體健康,以及用來防治動(dòng)、植物病害的重要化療藥物??股?/p>
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 貂皮抵押合同范本
- 機(jī)械代工合同范本
- 習(xí)作:故事新編 教學(xué)設(shè)計(jì)-2023-2024學(xué)年四年級(jí)下冊(cè)語文統(tǒng)編版
- 2025至2030年雙電機(jī)卷取式天棚簾項(xiàng)目投資價(jià)值分析報(bào)告
- 2024-2030年中國軍用服裝行業(yè)發(fā)展監(jiān)測(cè)及投資前景預(yù)測(cè)報(bào)告
- 2025至2030年免漆環(huán)保防水板項(xiàng)目投資價(jià)值分析報(bào)告
- 2025年萘系高濃高效減水劑項(xiàng)目可行性研究報(bào)告
- 2025至2030年中國德式鍍鋅喉箍數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)研究報(bào)告
- 2025年車輛小罩便器項(xiàng)目可行性研究報(bào)告
- 2025年超細(xì)纖維屏幕擦拭布項(xiàng)目可行性研究報(bào)告
- 六年級(jí)下冊(cè)語文第一單元測(cè)試卷 部編版(含答案)
- 2024年湖南高速鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院單招職業(yè)適應(yīng)性測(cè)試題庫新版
- 《研學(xué)旅行市場(chǎng)營銷》課件-研學(xué)旅行市場(chǎng)營銷之社群營銷
- clsim100-32藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)2023中文版
- LNG加氣站質(zhì)量管理手冊(cè)
- 艱難梭菌感染動(dòng)物模型的建立及其應(yīng)用評(píng)價(jià)
- (正式版)HGT 22820-2024 化工安全儀表系統(tǒng)工程設(shè)計(jì)規(guī)范
- 2024年公安部直屬事業(yè)單位招聘筆試參考題庫附帶答案詳解
- 《旅游景點(diǎn)云南》課件2
- 《肺癌課件:基本概念與臨床表現(xiàn)》
- 《斯特魯普效應(yīng)》課件
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論