川丁特羅的動物體內(nèi)代謝和動力學(xué)研究

川丁特羅的動物體內(nèi)代謝和動力學(xué)研究川丁特羅,2-(3-氯-4-氨基-5-三氟甲基)-苯基-2-叔丁氨基-乙醇,是一種新型高選擇性腎上腺素β2受體激動劑,通過選擇性激動肺及支氣管平滑肌上的β2受體,發(fā)揮其抗哮喘作用。目前關(guān)于川丁特羅的代謝和藥物動力學(xué)方面的報道較少。本論文的主要目的是研究川丁特羅在大鼠和犬體內(nèi)的代謝情況；建立同時測定川丁特羅及其Ⅰ相代謝物M1的LC-MS／MS方法,研究川丁特羅在大鼠體內(nèi)的吸收動力學(xué)和排泄情況；考察川丁特羅的人血漿蛋白結(jié)合率；建立川丁特羅對映體的分離方法。一、川丁特羅在大鼠和犬體內(nèi)的代謝研究使用提取分離技術(shù)從給藥后大鼠尿樣中分離得到了川丁特羅經(jīng)生物轉(zhuǎn)化的代謝物,通過質(zhì)譜和核磁共振光譜確證了2種代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu),分別是：2-(3-氯-4-氨基-5-三氟甲基)-苯基-2-叔丁氨基-乙酸(M1)和4-(3-氯-4-氨基-5-三氟甲基)-苯基-4-叔丁氨基-乙酸乙酯(M7)。采用LC-MS/MS技術(shù),研究了川丁特羅在大鼠和犬體內(nèi)的代謝情況并對代謝途徑進行了推斷。共發(fā)現(xiàn)了13種代謝物,利用代謝物對照品鑒定了其中2種代謝物的結(jié)構(gòu),根據(jù)川丁特羅及其代謝物的二級質(zhì)譜特征碎片,結(jié)合藥物代謝規(guī)律,推斷了其它11種代謝物的結(jié)構(gòu)。除M1和M7外,其余代謝物分別為川丁特羅的叔丁氨基羥基化代謝物(M2)、羥基化代謝物(M3,M4)、雙羥基化代謝物(M5)、雙硝基化代謝物(M6)、N-乙?；x物(M8)和葡萄糖醛酸結(jié)合物(M10)、川丁特羅N-去烷基后的葡萄糖醛酸結(jié)合物(M9)、M3或M4的葡萄糖醛酸結(jié)合物(M11)、M5的葡萄糖醛酸結(jié)合物(M12)和M7或M8的葡萄糖醛酸結(jié)合物(M13)。川丁特羅在大鼠體內(nèi)檢測到8種代謝物,在犬體內(nèi)代謝比較廣泛,檢測到13種代謝物,其中有8種代謝物與大鼠相同。推斷了川丁特羅在大鼠和犬體內(nèi)的6種代謝途徑,其中Ⅰ相的有：羥基化、C-氧化、C-硝基化、N-脫烴基；Ⅱ相的有：乙酰化、葡萄糖醛酸結(jié)合,這些代謝途徑還可能相互交叉,生成次級代謝物。二、川丁特羅在大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)研究為了深入了解川丁特羅及其代謝物M1在大鼠體內(nèi)的系統(tǒng)暴露,采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀,通過對色譜和質(zhì)譜條件進行優(yōu)化,首次建立了專屬性強、靈敏度高、分析速度快的LC-MS/MS方法,用于同時測定生物樣品中川丁特羅和M1,對川丁特羅大鼠體內(nèi)的藥物動力學(xué)進行了研究。灌胃給予大鼠川丁特羅后,測定不同時刻血漿中川丁特羅和M1的濃度,繪制兩者的血藥濃度-時間曲線,計算主要的藥動學(xué)參數(shù)。川丁特羅在大鼠體內(nèi)吸收較快,血漿濃度在0.6h達峰；血漿中M1的達峰時間略遲于原形藥物。雄性大鼠體內(nèi)川丁特羅和M1的Cmax比值為1：3,AUC比值為1：4,M1的兩參數(shù)均明顯高于原形藥物,表明川丁特羅經(jīng)口服吸收后,有相當(dāng)一部分可以快速代謝為M1,在體循環(huán)中M1的存在水平明顯高于川丁特羅,其系統(tǒng)暴露量遠大于原形藥物；雌性大鼠體內(nèi)川丁特羅和M1的Cmax比值為1：0.7,AUC比值為1：1,表明兩者在體循環(huán)中存在水平和系統(tǒng)暴露程度差別不大。三、川丁特羅在大鼠體內(nèi)的排泄研究采用LC-MS/MS方法,測定灌胃給藥后大鼠尿液和糞便中川丁特羅和M1的含量,了解兩者在大鼠體內(nèi)的排泄速度和程度。灌胃給藥后0～96h內(nèi),雄性大鼠尿液中共回收給藥劑量的14.9%,川丁特羅占的比例較小,川丁特羅和M1累積排泄量的比值為1：10；雌性大鼠尿液中共回收給藥劑量的9.31%,川丁特羅和M1累積排泄量的比值為1：2。雄性大鼠糞便中共回收給藥劑量的2.46%,M1和川丁特羅累積排泄量的比值為1：8；雌性大鼠糞便中共回收給藥劑量的2.53%,M1和川丁特羅累積排泄量的比值為1：35。糞便中排泄的大部分是川丁特羅,代謝物M1只占很小的比例。川丁特羅在雌性大鼠尿液中的累積排泄量較大,而在雌、雄大鼠糞便中的累積排泄量相近；M1在雄性大鼠尿液和糞便中的累積排泄量均較大。四、川丁特羅的人血漿蛋白結(jié)合情況采用平衡透析法和LC-MS技術(shù)對川丁特羅與人血漿蛋白的結(jié)合程度進行了研究。血漿藥物濃度在2.00～50.0ng／mL范圍內(nèi)透析72h后,川丁特羅的血漿蛋白結(jié)合率平均值為30.2±6.5%,與人血漿蛋白的結(jié)合程度處于中等水平,各濃度組的蛋白結(jié)合率數(shù)據(jù)之間無顯著性差異,血漿蛋白結(jié)合率不具有濃度依賴性,該結(jié)果可為臨床安全合理用藥提供參考。五、高效液相色譜法分離川丁特羅對映體成功應(yīng)用手性試劑衍生化法和手性固定相法對川丁特羅對映體進行了分離。采用手性熒光衍生化試劑(R)-(+)-DBD-Pro-COCl進行手性分離時,確定了衍生化條件和分離的色譜條件；采