不穩(wěn)定心絞痛患者循環(huán)miR-223水平與抗血小板藥物治療期間血小板反應(yīng)性的相關(guān)研究

不穩(wěn)定心絞痛患者循環(huán)miR-223水平與抗血小板藥物治療期間血小板反應(yīng)性的相關(guān)研究研究目的：血小板活化與聚集是動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成的病理生理基礎(chǔ)之一。在臨床實(shí)踐,即使應(yīng)用了標(biāo)準(zhǔn)的阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷的雙聯(lián)抗血小板治療,仍有部分冠心病患者可發(fā)生血栓事件。此現(xiàn)象可能與治療后血小板高反應(yīng)(highon-treatmentplateletreactivity,HTPR)有關(guān)。隨著氯吡格雷的廣泛應(yīng)用,氯吡格雷低反應(yīng)不斷被報(bào)道。目前,有許多實(shí)驗(yàn)室方法可以檢測(cè)患者對(duì)抗血小板藥物的反應(yīng)性。我們的前期工作證實(shí)冠心病患者血小板microRNA-223(miR-223)的表達(dá)水平與服用氯吡格雷后血小板的反應(yīng)性存在負(fù)相關(guān)。本研究旨在探索循環(huán)miR-223與冠心病患者服用氯吡格雷后的反應(yīng)性的關(guān)系。研究內(nèi)容與方法：連續(xù)納入2012年11月至2013年01月在武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院心臟中心就診的經(jīng)冠脈造影證實(shí)的不穩(wěn)定型心絞痛(unstableanginapectoris,UAP)患者。入選患者于采集血樣前24小時(shí)口服300mg阿司匹林和300mg氯吡格雷,或口服300mg阿司匹林和75mg氯吡格雷5天以上。記錄患者的一般臨床資料及用藥情況;進(jìn)行各項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)、生化參數(shù)的檢驗(yàn)、進(jìn)行心臟超聲心動(dòng)圖檢查以及冠脈造影檢查及必要的介入治療。對(duì)冠脈病變進(jìn)行Gensini評(píng)分及Syntax評(píng)分。以二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集率和通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定的血小板血管舒張劑刺激磷蛋白(vasodilatorstimulatedphosphoprotein,VASP)磷酸化水平,判斷患者在服用氯吡格雷后血小板反應(yīng)活性的情況。提取患者血漿中的總miRNA,對(duì)與血小板P2Y12受體mRNA3’非編碼區(qū)結(jié)合的miR-223表達(dá)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(realtimepolymerasechainreaction,Real-timePCR)。提取基因組DNA,對(duì)CYP2C19*2/*3基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并針對(duì)該基因突變位點(diǎn)進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切,通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性分析。結(jié)果：1.共入選經(jīng)冠脈造影證實(shí)的冠心病,不穩(wěn)定心絞痛患者62例,根據(jù)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定的VASP磷酸化水平即血小板反應(yīng)指數(shù)(plateletreactivityindex,PRI)的中位數(shù)水平(56.3%)將入選患者分成2組：正常反應(yīng)組,即PRI≤56.3%,n=31,平均年齡60.52±8.88,男性14例,女性17例；低反應(yīng)組,即PRI>56.3%,平均年齡57.68±10.60,男性19例,女12例。①兩組患者的年齡、性別構(gòu)成、平均體重、血壓、心率等基礎(chǔ)資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。②兩組患者的心血管疾病史、伴發(fā)疾病情況及臨床主要心血管用藥情況無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③兩組患者的左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及左室舒末徑(1eftventriculardiastolicenddiameter,LVDED),各項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)及生化參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。④CYP2C19基因多態(tài)性分析顯示兩組患者CYP2C19*2/*3基因攜帶比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)⑤兩組患者冠脈Syntax評(píng)分及Gensim評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。⑥與正常反應(yīng)組組比較,低反應(yīng)組血漿miR-223相對(duì)表達(dá)水平下調(diào),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.008)2.根據(jù)光比濁法測(cè)定的血小板聚集率(plateletaggregation,PAG)的中位數(shù)水平(74.5%)重新將入選患者分成2組：正常反應(yīng)組(PAG≤<74.5%)和低反應(yīng)組(PAG>74.5%)①兩組患者的年齡、性別構(gòu)成、平均體重、血壓、心率等基礎(chǔ)資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。②兩組患者的心血管疾病史、伴發(fā)疾病情況及臨床主要心血管用藥情況無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③兩組患者的心臟功能及房室腔大小,各項(xiàng)血細(xì)胞參數(shù)及生化參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。④YP2C19基因多態(tài)性分析顯示兩組患者CYP2C19*2/*3基因攜帶比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)⑤兩組患者冠脈Syntax評(píng)分及Gensim評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。⑥與正常反應(yīng)組組比較,低反應(yīng)組血漿miR-223相對(duì)表達(dá)水平有降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)3.①相關(guān)分析顯示血漿miR-223相對(duì)表達(dá)水平與血小板反應(yīng)性PRI呈負(fù)相關(guān)性(Spearmanr=-0.379,P=0.002)。②將可能影響氯吡格雷反應(yīng)性的臨床因素包括：血漿miR-223相對(duì)表達(dá)水平、CYP2C19*2/*3基因多態(tài)性、年齡、性別、吸煙、合并糖尿病、應(yīng)用質(zhì)子泵抑制劑、應(yīng)用鈣拮抗等作為校正變量引入Logistic回歸模型后,顯示血漿miR-223相對(duì)表達(dá)水平是預(yù)測(cè)血小板對(duì)氯吡格雷低反應(yīng)的獨(dú)立相關(guān)因素。③以PRI中位數(shù)為分界點(diǎn)定義氯吡格雷正常反應(yīng)組和低反應(yīng)組,ROC曲線分析顯示miR-223相對(duì)表達(dá)水平能夠有效鑒別血小板低反應(yīng)和正常反應(yīng)者。(AUC=0.700,P=0.00895%CI: