HS-T 81-2023 脫皮花生檢測(cè)方法

0ICS67.600CCSX24

HS/T

81—2023脫皮花生檢測(cè)方法t sTes

oft s-

- -

--

- -

-中華人民共和國(guó)海關(guān)總署 發(fā)

布HS/T81—2023前 言本文件按照

GB/T1.標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》及HS/T1—2022《海關(guān)標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署關(guān)稅征管司提出。本文件由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署歸口。本文件起草單位:青島海關(guān)技術(shù)中心、中華人民共和國(guó)廣州海關(guān)、山東省花生研究所、日照海關(guān)綜合技術(shù)服務(wù)中心。本文件主要起草人:張雪琰、牛增元、羅忻、楊珍、毛容妹、劉培海、周龍龍、陳春光、劉泉。HS/T81—2023脫皮花生檢測(cè)方法警告———使用本文件的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文件并未指出所有可能的安全問題,使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?并保證符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。1

范圍本文件規(guī)定了干燥脫皮花生中過氧化氫酶和過氧化物酶的檢測(cè)方法。本文件適用于干燥脫皮花生中過氧化氫酶和過氧化物酶的檢測(cè)。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3GB5009. 食品安全目錄標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定3GB/T601

化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備GB/T6682

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3

術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。13.1

- s干燥脫皮花生

dry- s去殼花生,花生衣經(jīng)加熱破裂和松脫,冷卻后,子仁經(jīng)刷子或有凸起花紋的橡膠帶去衣。23.2it過氧化氫酶活動(dòng)度(活性)

catalaseactit規(guī)定條件下,一定量試樣中的過氧化氫酶與過氧化氫作用所消耗的過氧化氫量,用每克試樣所消耗的過氧化氫毫克數(shù)表示。[來源:GB/T5522—2008,3.1,有修改]33.3it U過氧化物酶活性單位 peroxidaseactviyit U 0p在25℃,H7.

時(shí), 0p[來源:GB/T32131—2015,3.1,有修改]43.4it過氧化物酶活性 peroxidaseactit規(guī)定條件下,一定量試樣中過氧化物酶活性單位(U)數(shù)量,用每克試樣過氧化物酶活性單位數(shù)量表示。4

過氧化氫酶活性的測(cè)定1HS/T81—202314. 原理1在pH

值7.

條件下,從樣品中提取過氧化氫酶,在提取液中加入一定量的過氧化氫,使過氧化氫在過氧化氫酶作用下分解,再用高錳酸鉀溶液滴定過量的過氧化氫。根據(jù)高錳酸鉀溶液的消耗量計(jì)算出試樣中過氧化氫酶活動(dòng)度。24. 試劑和材料221 122除另有說明外,所用試劑均為分析純。水為符合

GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水21 1224..

2%過氧化氫溶液:取30%過氧化氫溶液2mL,加水稀釋至30mL。4..

10%硫酸溶液:0mL濃硫酸邊滴邊攪拌加入90mL水中。23c 1 124 225 14..高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液:(/5KMnO423c 1 124 225 14..

磷酸氫二鈉水溶液:稱取

NaHPO4·12H2O29.g,加水溶解定容至1000mL。4.. 磷酸二氫鉀水溶液:稱取無水

KH2PO49.g,加水溶解定容至1000mL。 ( 4( 5264.. pH7.

磷酸鹽緩沖液:臨用時(shí),將磷酸氫二鈉水溶液

4.2.)與磷酸二氫鉀水溶 ( 4( 5269∶1混合。34. 儀器和設(shè)備3314.. 分析天平:感量為0.1g。3132 333 24..

恒溫水浴鍋(或恒溫培養(yǎng)箱):032 333 24.. 具塞錐形瓶:50mL。34 1 2 135 5 2364..

量筒34 1 2 135 5 2364.. 移液管:

mL、0mL。4.. 研缽。37 23839 5314..滴定管37 23839 5314.. 多功能粉碎機(jī)。4.. 離心管:0mL。4..0

離心機(jī)。 231 331314..1

樣品篩:

mm

231 331314..2

搖床:00r/min。4..3

電爐。3144..4

濾紙:中速。3144. 試驗(yàn)步驟414.. 樣品處理41將干燥脫皮花生樣品混合均勻,倒入粉碎機(jī)粉碎,過2mm

孔徑樣品篩,收集篩下樣品。424.. 過氧化氫酶的提取42( 655稱取過篩后樣品約1g,精確至0.1g,倒入研缽,研磨至無粗粒,量取pH

值7.

磷酸鹽緩沖( 6554.2.)0mL,先加入少量以潤(rùn)濕樣品,細(xì)磨至糊狀后,小心轉(zhuǎn)移至50mL離心管中,剩余緩沖液分多次洗凈研缽,洗液并入50mL離心管中,劇烈振搖10min,000r/min離心5min,用濾紙全部過濾。434.. 過氧化氫酶活性的測(cè)定43( 1準(zhǔn)確移取20mL濾液于250mL錐形瓶中,加入20mL水和3mL2%過氧化氫溶液

4.2.( 12m

×8.×50m

×8.×5020

…………(1)3 (1( 3勻,0℃恒溫水浴鍋中水浴15min,取出,加入5mL10%硫酸溶液

4.2.),搖勻,用0.3 (1( 3酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液

4.2.)滴定剩余的過氧化氫,至溶液呈粉紅色,記錄消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積。444.. 空白試驗(yàn)44( 1 3 ( /1 ( 3吸取20mL濾液于250mL錐形瓶中,( 1 3 ( /1 ( 3氫溶液

4.2.),搖勻,0℃恒溫水浴鍋中水浴15min,取出,加入5mL10%硫酸溶液

4.2.),搖勻,用0.

molL高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液

4.2.)滴定剩余的過氧化氫,至溶液呈粉紅色,記錄消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液體積。54. 結(jié)果計(jì)算5 1X過氧化氫酶活性(

1)按公式() 1XVX1=(

0-V1)×

c 5V式中:X1

———過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì)),單位為毫克每克(mg/g);V0

———空白試驗(yàn)用去高錳酸鉀體積,單位為毫升(mL);V1

———樣品滴定用去高錳酸鉀體積,單位為毫升(mL);c

———高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,單位為摩爾每升(mol/L);gm ———試樣的質(zhì)量,單位為克();g5 0c 1 18.———與1.0mL高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[(/5KMnO4)=0.

mol/L]相當(dāng)?shù)?/p>

H2O2

的5 0c 1 1氧化氫計(jì)),單位為毫克每摩爾(mg/mol)。實(shí)際樣品檢測(cè)示例見附錄

A。64. 重復(fù)性6相同的試驗(yàn)材料,用同樣的方法,在同一實(shí)驗(yàn)室由同一操作人員在較短的時(shí)間間隔內(nèi)獲得的兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間絕對(duì)差值不得超過其算術(shù)平均值的10%。5

過氧化物酶活性的測(cè)定15. 原理17過氧化物酶能迅速催化過氧化氫氧化愈創(chuàng)木酚(又名鄰甲氧基苯酚,化學(xué)式:C

H8O2)生成棕色的7四鄰甲氧基連酚,通過436nm

處吸光度值的變化計(jì)算其酶活性。反應(yīng)式為:3

X 2=

ΔA

X 2=

ΔA

×3.×4×D

25.×1×0.5×2×V

m ×1000 …………(2)25. 試劑和材料2除另有說明外,所用試劑均為分析純。水為符合

GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。 1 621 1 2 822 / /10 1 (1

6 1235.. 1 621 1 2 822 / /10 1 (1

6 1235..

0.

mol/L磷酸氫二鈉:稱取

NaHPO4·12H2O35.g,加水溶解定容至1000mL。5..

0.

molLpH7.

磷酸鹽緩沖液:量取38mL0.

molL磷酸二氫鈉

5.2.)、2mL0.

mol/(L磷酸氫二鈉

5.2.)混勻

。( 824 42535..

80mmol/L愈創(chuàng)木酚水溶液:量取0.8mL愈創(chuàng)木酚用水定容至100 824 42535..

40mmol/L過氧化氫水溶液:量取0.1mL30%過氧化氫用水定容至100mL。5. 儀器和設(shè)備315.. 分光光度計(jì)。31325.. 分析天平:感量為0.1g。3233 234 2355.. 恒溫水浴鍋(或恒溫培養(yǎng)箱):533 234 2355.. 樣品篩:

mm

孔徑。5.. 研缽。36 1 1 537 5385.. 36 1 1 537 5385..離心管:0mL。5..離心機(jī)。39 3 131313145..搖床39 3 131313145..0

比色皿:cm。5..1

多功能粉碎機(jī)。5..2

濾紙:中速。5. 試驗(yàn)步驟415.. 樣品處理41見4.4.1。425.. 過氧化物酶的提取420( 355稱取過篩后樣品約1g,精確至0.1g,倒入研缽,研磨至無粗粒,吸取pH7.

磷酸鹽緩沖0( 3555.2.)

mL,先加入少量以潤(rùn)濕樣品,細(xì)磨至糊狀后,小心轉(zhuǎn)移至50mL離心管中,剩余緩沖液分多次洗凈研缽,洗液并入50mL離心管中,劇烈振搖10min,000r/min離心5min,用濾紙全部過濾。435.. 過氧化物酶活性測(cè)定43 /8 1 0 ( 3 1(4(5于1cm

比色皿中,依次加入2.

/8 1 0 ( 3 1(4(5L愈創(chuàng)木酚水溶液

5.2.

)和0.5mL

樣品提取液,混勻,在放入分光光度計(jì)之前加入0.5

mL40mmol/L過氧化氫水溶液

5.2.),快速混勻,于分光光度計(jì)436nm

波長(zhǎng)下,測(cè)定初始時(shí)和2min后的吸光度值,兩者之差即為ΔA。每次測(cè)定至少完成2個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。55.結(jié)果計(jì)算5 2X過氧化物酶活性(

2)按公式() 2X05 04HS/T81—2023式中:X2

———過氧化物酶活性,單位為過氧化物酶活性單位每克(U/g);ΔA ———樣品吸光度變化值;03. ———反應(yīng)試劑的總體積,單位為毫升(mL);04 ———四鄰甲氧基連酚換算成過氧化氫的量的系數(shù);D ———稀釋倍數(shù);Lc25.

———四鄰甲氧基連酚的摩爾消光系數(shù),單位為升每摩爾厘米[/(mol·cm)];Lc1 ———比色皿光徑,單位為厘米(m);g0.5———參與反應(yīng)樣品的體積,單位為毫升(mL);g2———反應(yīng)時(shí)間,單位為分鐘(min);m ———樣品質(zhì)量,單位為克();V ———提取樣品所用磷酸鹽緩沖液的體積,單位為毫升(mL)。實(shí)際樣品檢測(cè)示例見附錄

A。65. 重復(fù)性6相同的試驗(yàn)材料,用同樣的方法,在同一實(shí)驗(yàn)室由同一操作人員在較短的時(shí)間間隔內(nèi)獲得的兩個(gè)獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間絕對(duì)差值不得超過其算術(shù)平均值的10%。6

試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告至少應(yīng)給出以下內(nèi)容:a)

試樣描述;b)

本文件編號(hào);c)

試驗(yàn)結(jié)果;d)

測(cè)試日期。5樣品項(xiàng)目名稱實(shí)驗(yàn)室1實(shí)驗(yàn)室2實(shí)驗(yàn)室3實(shí)驗(yàn)室4實(shí)驗(yàn)室5平均值SDRSD/%鮮花生過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì))/(mg/g)46.345.745.746.146.646.10.390.84過氧化物酶活性/(U/g)44614495442744874494447329.010.65生花生過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì))/(mg/g)38.739.239.138.738.938.90.220.57過氧化物酶活性/(U/g)21592171219221652177217312.680.58干燥脫皮花生過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì))/(mg/g)30.530.730.630.731.030.70.190.60過氧化物酶活性/(U/g)2882902852852902872.380.83經(jīng)150℃30min烘烤的生花生過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì))/(mg/g)0.180.180.170.170.170.170.012.87過氧化物酶活性/(U/g)0.000.000.000.000.000.0000經(jīng)150℃30min烘烤的干燥脫皮花生過氧化氫酶活性(以過氧化氫計(jì))/(mg/g)0.190.180.190.190.170.180.013.6過氧化物酶活性/(U/g)0.000.000.00