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文檔簡介

補體依賴的細胞毒實驗

Complement-dependentcytotoxicity抗原（antigen,Ag）:

能夠刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能與之特異性結合的物質(zhì)?？贵w(antibody,Ab)：

B細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的可特異性結合抗原的一組糖蛋白。

抗原-抗體反應的特點與影響因素反應條件：

適當?shù)臏囟入娊赓|(zhì)酸堿度特點：

特異性可逆性可見性（合適的抗原抗體比例）凝集反應(agglutination):顆粒性抗原與抗體的反應。沉淀反應(precipitation):可溶性抗原與抗體的反應。補體參與的反應免疫標記技術（immunolabellingtechnique）:用示蹤物質(zhì)標記抗原或抗體，進行抗原-抗體反應的檢測。

抗原-抗體反應的基本檢測方法本次實驗目的1掌握細胞毒實驗的原理2補體依賴細胞毒實驗基本操作步驟3了解補體依賴細胞毒實驗的應用補體的作用和激活途徑補體的作用溶菌和溶細胞促進中和溶解病毒調(diào)理吞噬炎癥介質(zhì)免疫粘附補體的激活途徑經(jīng)典途徑旁路途徑MBL途徑

實驗原理+補體臺盼藍染液抗原與抗體結合實驗主要材料小鼠抗血清（

）3.補體：新鮮豚鼠血清（補）4.

磷酸鹽緩沖液（PBS

），載玻片、蓋玻片、一次性移液管5.臺盼藍染色液(講臺上取)實驗材料需要清洗回收:請及時清洗完交至講臺處由老師檢查：剪刀、鑷子、玻璃培養(yǎng)皿、

研磨棒。操作步驟一、小鼠胸腺/脾臟細胞懸液的制備

4~6周齡小鼠斷頸處死，取出胸腺/脾臟放至含有1~3mLPBS(一次性移液管)的平皿中，置于復篩網(wǎng)上，用剪刀和鑷子將組織處理成單細胞懸液。胸腺注意事項：小鼠斷頸要迅速、徹底，以防小鼠掙扎過程中出血過多。脾臟操作步驟振蕩混勻，置37C水浴箱，10min振蕩混勻，置37C水浴箱，20min每管各加50ul0.4%臺盼藍，混勻后立即鏡下觀察振蕩混勻，滴片加蓋玻片，鏡檢Ag+Abcomplement二、細胞毒實驗：按下表加樣PBS/脾臟細胞結果觀察

臺盼藍染色：如果細胞膜不完整、破裂，臺盼藍染料進入細胞，細胞變藍。如果細胞膜完整，細胞不為臺盼藍染色，則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性，區(qū)別壞死細胞有意義。ABA.對照組B.實驗組注意事項：臺盼藍染色后放置時間不能太長，2-5min之內(nèi)觀察結果，否則出現(xiàn)假陽性，需要重新染色。計算殺傷率：在高倍鏡下計數(shù)200個細胞中死細胞的百分率補體依賴

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