實驗二DNA與RNA的化學(xué)顯色反應(yīng)課件

實驗三

核酸(DNA和RNA)的細(xì)胞核定位觀察

p220作業(yè)：1、說明DNA和RNA的亞細(xì)胞定位在哪里?為什么？2、解釋一下本實驗中設(shè)立對照組的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用實驗原理Unna染色法主要成分：甲基綠-派洛寧混合染料（堿性染料）原理：核酸是酸性的，它們對于堿性染料具有親和力，但是DNA和RNA對甲基綠-派洛寧混合染料的親和力不同，而使這兩種染料對兩類核酸具有了選擇性。DNA被甲基綠染成綠色，RNA被派洛寧染成紅色，這樣就能使細(xì)胞中兩種核酸分布顯示出來“樣品的固定”王金發(fā)書p37目的：迅速殺死細(xì)胞，穩(wěn)定細(xì)胞的化學(xué)成分，以便在后面的處理、切片時不被破壞。固定使得細(xì)胞大分子交聯(lián)而保持在一定位置上，不至于在后面的染色等處理過程中移位或丟失而產(chǎn)生人工假象。常用的固定液：(醛類：甲醛、戊二醛)Unna染色法實驗步驟撕取洋蔥內(nèi)表皮↓小離心管Carnoy固定劑15min↓95%酒精復(fù)水5min↓70%酒精復(fù)水5min↓H2O5min↙↘小離心管表面皿中實驗組對照組→5%三氯乙酸（TCA）↙90℃保溫,15minH2O5min↙Unna染液20min(室溫)↓H2O漂洗幾秒后

丙酮分色6-10Sec↓H2O洗片刻↓水壓片分別鏡檢觀察Unna法背景知識核酸是一種線形多聚核苷酸，它的基本單位是核苷酸。細(xì)胞核內(nèi)存在有兩種核酸：DNA和RNA，它們具有類似的化學(xué)組成，即均由含氮堿基，戊糖和磷酸組成，可表示如下:磷酸核糖（RNA）核酸核苷酸戊糖脫氧核糖（DNA）核苷A、G、C、U(RNA)堿基（嘌呤/嘧啶）A、G、C、T（DNA）ThegeneralstructureofribosomesinprokaryotesandeukaryotesrNTs:numberofribonucleotidesThemacromolecularcompositionofamammalianribosomeStructureofT.thermophilus70Sribosomeasdeterminedbyx-raycrystallographySmallribosomalproteins,darkgray;Largeribosomalproteins,lightgrayLightmicrographofanisolatednucleusfromaXenopusootytestainedtorevealthehundredsofnucleoli.核仁

纖維中心(FC)：位于核仁中央，低電子密度、染色淺，rRNA基因的儲存位點。

稠密區(qū)(DFC)：電子密度最高，由致密的纖維構(gòu)成，一般見不到顆粒；含正在轉(zhuǎn)錄的RNA分子。

顆粒區(qū)(GC)：位于周邊，直徑為15-20nm的核糖核蛋白顆粒(RNP)-代表已合成的核糖體亞單位前體顆粒。Asectionofpartofanucleuswithanucleol