動物細胞融合和單克隆抗體(用)

細胞融合和單克隆抗體2021-3-261編輯課件復習穩(wěn)固：1.植物體細胞雜交2.植物組織培養(yǎng)2021-3-262編輯課件植物體細胞雜交植物細胞A植物細胞B原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜種細胞組織培養(yǎng)雜種植株去細胞壁纖維素酶、果膠酶化學法物理法誘導2021-3-263編輯課件1.概念：動物細胞融合〔cellfusion)，又稱體細胞雜交〔somatichybridiazation〕，是指兩個或更多個相同或不同細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。一、動物細胞融合融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。2021-3-264編輯課件2、動物細胞融合根本原理：與植物原生質(zhì)體融合的根本原理相同，即細胞膜的流動性3、誘導方式物理法：化學法：生物法：滅活的病毒電激、振動、離心聚乙二醇〔PEG〕例如：仙臺病毒2021-3-265編輯課件滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）生物法：滅活的病毒〔喪失感染性、保存抗原結(jié)構(gòu)〕2021-3-266編輯課件病毒促使細胞融合的主要步驟如下：兩個原生質(zhì)體或細胞在病毒黏結(jié)作用下彼此靠近；通過病毒與原生質(zhì)體或細胞膜的作用使兩個細胞膜間互相滲透，胞質(zhì)互相滲透；兩個原生質(zhì)體的細胞核互相融合，兩個細胞融為一體；進入正常的細胞分裂途徑，分裂成含有兩種染色體的雜種細胞。2021-3-267編輯課件4、過程：動物細胞A動物細胞B誘導，融合2個完整的雜交細胞AB有絲分裂〔膜融合、誘導方法質(zhì)融合、核融合〕單核細胞2021-3-268編輯課件5、動物細胞融合技術(shù)的開展簡史告訴我們：科學技術(shù)是不斷開展的。那么，實現(xiàn)動物細胞融合有什么意義呢？打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能；廣泛應用多個學科領(lǐng)域；重要用途：制備單克隆抗體。2021-3-269編輯課件6、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞融合的方法誘導方法用途制備單克隆抗體獲得雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞的全能性去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合物理〔離心、振蕩、電刺激〕化學〔聚乙二醇〕物理、化學方法〔同左〕滅活的病毒2021-3-2610編輯課件2、什么是抗體？二、單克隆抗體回憶3、抗體的分布？抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克?。俊翱寺〃晱挠⑽摹癱lone〞音譯而來，是指從一個共同祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子，細胞或個體。在細胞水平指動物細胞培養(yǎng).2021-3-2611編輯課件由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖〔克隆〕形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。

1、單克隆抗體概念:2021-3-2612編輯課件該法制備抗體的特點：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。自主閱讀P52：抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法及缺陷是什么？思考：如何大量獲取某種特定抗體？2021-3-2613編輯課件B淋巴細胞特點：３.每一個B淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。１.B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２.動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。2021-3-2614編輯課件怎樣才能大量生產(chǎn)單克隆抗體？提示1：僅用細胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？2021-3-2615編輯課件2、單克隆抗體的制備過程自學與思考：1〕在從小鼠體內(nèi)取B淋巴細胞前應對小鼠作何種處理？為什么要這樣處理？2〕從小鼠何處獲取B淋巴細胞？3〕如只考慮兩兩融合，可能出現(xiàn)哪些融合類型細胞？4〕是否所有雜交瘤細胞都能產(chǎn)生某一特定抗體？5〕由特定的B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合成的雜交瘤細胞具有什么特點？6〕最后可以通過哪些途徑大量獲取抗體？2021-3-2616編輯課件B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合〔只考慮兩兩融合〕培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？融合細胞幾種類型？骨髓瘤細胞---骨髓瘤細胞B淋巴細胞---B淋巴細胞B淋巴細胞---骨髓瘤細胞多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞〔多種〕。第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。該細胞繼承雙親細胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專一抗體又能無限增殖。雜交瘤細胞有何特點？特異性強，靈敏度高2021-3-2617編輯課件比較項目第一次篩選第二次篩選原理在選擇性培養(yǎng)基中添加某種藥物，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生長抗原—抗體的特異性結(jié)合目標雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞2021-3-2618編輯課件3.單克隆抗體的應用：①作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與一定抗原特異性結(jié)合。

優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速②用于運載藥物：制成“生物導彈〞治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療2021-3-2619編輯課件2021-3-2620編輯課件兩個過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一〞一個誘導細胞融合的新方法一個新細胞一個優(yōu)勢課堂小結(jié)你記住了嗎？－－滅活的病毒－－雜交瘤細胞－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢2021-3-2621編輯課件形成雜種細胞獲得雜種植株結(jié)果物理、化學方法〔同左〕滅活的病毒物理〔離心、振蕩、電刺激〕化學〔聚乙二醇〕誘導方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較工程1、植物、動物細胞融合的比較課堂小結(jié)融合前處理用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞分散2021-3-2622編輯課件2、單克隆抗體制備過程B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細胞〔B-瘤細胞〕克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體2021-3-2623編輯課件B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

1.右圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞。(1).該實驗方案的目的是：________________(2).該方案能到達預期效果嗎？為什么？課堂練習2021-3-2624編輯課件B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

(3)A是從小鼠的脾臟中取得__________該細胞能夠產(chǎn)生______。(4)圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。B淋巴細胞抗體細胞融合滅活的病毒雙親細胞產(chǎn)生專一抗體無限增殖