基因測序的原理及應(yīng)用

基因測序的原理及應(yīng)用遺傳咨詢培訓(xùn)-遺傳檢測一、基因測序的原理基因結(jié)構(gòu)和基因序列、核酸分離純化和保存、PCR技術(shù)和應(yīng)用二、一代測序技術(shù)和臨床應(yīng)用一代測序技術(shù)、單基因遺傳病的基因檢測三、二代測序技術(shù)和臨床應(yīng)用二代測序技術(shù)、panel測序和全外顯子組測序講 課 大 綱一、基因測序的原理基因結(jié)構(gòu)和基因序列、核酸分離純化和保存、PCR技術(shù)和應(yīng)用講 課 大 綱大?。喝L：3.2

×

109bp（3200Mb）基因序列占：1.2

×

109bp（1200Mb）基因間序列占：2.0

×

109bp

（2000Mb）基因平均長27kb，平均9個(gè)外顯子/基因，編碼序列平均1340bp/基因特點(diǎn)：編碼序列僅占1%；非編碼序列98%以上；重復(fù)序列多。目前，人類基因組中的蛋白質(zhì)編碼基因數(shù)目：20500個(gè)（ClampM.ProcNatlAcadSciUSA.2007Dec

4;104(49):19428-33）人類基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)4真核生物基因結(jié)構(gòu)CAAT

boxTATA

boxEnhancerpromoter調(diào)控序列調(diào)控序列exonexonPoly(A)加尾信號5

′+1Stop3

′結(jié)構(gòu)基因intronintronexonTGAATGresponseelement5’-UTR轉(zhuǎn)錄DNARNA翻譯蛋白質(zhì)復(fù)制復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄基因控制性狀的兩種途徑：基因通過控制酶合成控制生物體的性狀基因通過控制蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)控制生物體的性狀基因、環(huán)境與性狀的關(guān)系生物性狀是由基因與環(huán)境綜合作用的結(jié)果中心法則及其發(fā)展酪氨酸黑色素酪氨酸酶控制酪氨酸酶的基因控制酶形成的基因異常酪氨酸酶合成異常黑色素形成障礙黑色素缺乏-白化病基因突變酶異常白化表型眼白化病-GPR143Type-1型-TYRType

2型-OCA2Type

4型-SLC45A2代謝異常基因突變導(dǎo)致疾病表型DNA的多態(tài)性(polymorphism)：某些DNA序列在人群中出現(xiàn)的頻率>1%，有的與疾病相關(guān)基因的突變(mutation)：出現(xiàn)頻率<<1%，引起基因功能的顯著改變，導(dǎo)致人類遺傳病或不致病人類DNA序列變異（variation）包括：8三類常見的DNA多態(tài)性（

frequency

>1%）變異類型概念基因組中的頻率給定人群中基因組的給定位點(diǎn)的單個(gè)核苷酸變異，人群中出現(xiàn)的頻率>1%基因組中約有1000萬個(gè)SNPSTR可變數(shù)目為1-6bp核心單元組成的重復(fù)序列，長度一般<200bp基因組中至少有100萬個(gè)，約占人DNA序列的3%CNV基因組中從≥1kbp到≥Mb不等的DNA片段的拷貝數(shù)變異，包括倒位、缺失、插入、重復(fù)等方式。人群中出現(xiàn)頻率>1%時(shí)稱拷貝數(shù)多態(tài)性目前尚不清楚，估計(jì)≥50kbp的CNV約占DNA序列的12%常見基因突變類型點(diǎn)突變動(dòng)態(tài)突變

大片斷突變同義突變錯(cuò)義突變剪接突變啟動(dòng)子突變無義突變移碼突變?nèi)笔Р迦胫嘏湃?lián)體重復(fù)擴(kuò)增突變與蛋白活性的關(guān)系：遺傳密碼改變蛋白肽鏈中的片段缺失mRNA剪接錯(cuò)誤影響mRNA修飾影響基因表達(dá)常見基因突變突變類型概念生物學(xué)效應(yīng)點(diǎn)突變同義突變發(fā)生在三聯(lián)密碼子的第三位堿基仍編碼相同的氨基酸錯(cuò)義突變涉及三聯(lián)密碼子前兩位堿基中的一個(gè)氨基酸發(fā)生改變，可影響蛋白活性中心，也可無影響無義突變使編碼氨基酸的密碼變成終止密碼子多肽鏈合成提前終止，通常產(chǎn)生無活性的多肽鏈剪接突變位于內(nèi)含子與外顯子交界處，可影響RNA剪接的突變降低剪接效率或產(chǎn)生異常剪接子，抑制正?；虮磉_(dá)啟動(dòng)子區(qū)突變突變位于基因調(diào)控元件結(jié)合處影響該基因的轉(zhuǎn)錄移碼突變插入、缺失非三的整倍數(shù)的堿基突變位點(diǎn)以下的氨基酸序列發(fā)生改變，可使蛋白質(zhì)失活或功能異常缺失缺失數(shù)十到數(shù)百個(gè)堿基對部分結(jié)構(gòu)基因序列丟失造成編碼基因序列重排，也可使整個(gè)基因缺如插入插入一段數(shù)十到數(shù)百個(gè)bp

DNA片段，可來源于同一染色體，也可來自其他染色體或外源基因若插入發(fā)生在結(jié)構(gòu)基因，序列將發(fā)生重排，導(dǎo)致基因表達(dá)失活或激活插入位點(diǎn)附近的基因重排DNA缺失或插入引起，或由于基因擴(kuò)增使基因序列發(fā)生大的改變通?？墒够虮磉_(dá)產(chǎn)物劑量增加，導(dǎo)致細(xì)胞功能的紊亂 10DNA突變與基因功能的改變單倍劑量不足（haploinsufficiency）顯性負(fù)效應(yīng)（dominant negative）反義RNA轉(zhuǎn)錄/基因組修飾轉(zhuǎn)錄因子基因突變影響mRNA穩(wěn)定性轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)作用增強(qiáng)子的位置效應(yīng)劑量效應(yīng)SNP創(chuàng)造新啟動(dòng)子獲得性RNA堆積基因測序的基本流程抽提核酸-擴(kuò)增（建庫）-測序-分析一代測序：抽提核酸-PCR擴(kuò)增-電泳檢測PCR產(chǎn)物-毛細(xì)管電泳（Sanger測序）-數(shù)據(jù)分析二代測序：抽提核酸-目標(biāo)區(qū)域捕獲-各種方式建庫/擴(kuò)增-各種平臺大規(guī)模平行測序-數(shù)據(jù)分析兩種方法的測序原理與數(shù)據(jù)分析不同細(xì)胞破碎沉淀核酸核酸提取抽提去蛋白質(zhì)DNA為雙鏈線性分子，在細(xì)胞中以與蛋白質(zhì)結(jié)合的形式存在RNA為單鏈線性分子并具有不同的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，如mRNA在3＇端有polyA結(jié)構(gòu)分離核酸中應(yīng)注意避免降解化學(xué)降解-酸堿環(huán)境物理降解- DNA的雙鏈剛性生物降解：DNA酶抑制劑金屬二價(jià)離子螯合劑-

EDTA-Na2抑制DNA酶活性（DNA酶需要金屬二價(jià)離子Mg2+、Ca2+的激活）RNA酶（RNAase)抑制劑DEPC(二乙基焦碳酸鹽) (C2H5OCOOCOOC2H5)RNase阻抑蛋白（RNasin）（可在樣本中長期維持）血液基因組DNA抽提操作規(guī)程（QIAGEN）一、目的：保證抽提的血液基因組DNA質(zhì)量，以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求二、血液樣本：外周靜脈血

，EDTA抗凝劑（紫色管）三、所用試劑：QIAamp

DNA

Mini

Kit四、準(zhǔn)備工作：首次實(shí)驗(yàn)前將試劑AW1，AW2中加入無水乙醇（體積見瓶上標(biāo)注），并混勻。首次實(shí)驗(yàn)前將蛋白酶溶解于稀釋液中（50人份試劑盒的蛋白酶中加入1.2ml稀釋液，250人份試劑盒的蛋白酶中加入5.5ml稀釋液）。

注：

稀釋后的蛋白酶液能在2-8

C穩(wěn)定保存2個(gè)月。如果試劑AL出現(xiàn)沉淀，放置56

C水浴使其溶解。具體操作步驟：1、200ul全血中加入20ul蛋白酶液，充分混勻（用于芯片分析的標(biāo)本在加入蛋白酶液前，先加入RNA酶（100mg/ml）4ul）。2、加入200ulAL，渦旋15秒混勻。3、56

C水浴45分鐘（間隔15分鐘震蕩混勻一次），短暫離心。4、加入200ul室溫放置無水乙醇，渦旋15秒，短暫離心。5、標(biāo)記離心柱，將上述混合液小心的加入柱中，8000

g離心2分鐘。6、將離心柱放置于一干凈的2ml收集管上，棄去盛有濾過液的收集管。加入400ul

AW1液，8000

g離心2分鐘。7、棄去收集管中廢液，重復(fù)步驟6（加入400ul

AW1液，8000轉(zhuǎn)離心2分鐘）。8、將離心柱放置于一干凈的2ml收集管上，棄去盛有濾過液的收集管。加入400ul

AW2液，13000

g離心4分鐘。9、棄去收集管中廢液，重復(fù)步驟9（加入400ul

AW2液，13000

g離心4分鐘）。10、棄去盛有濾過液的收集管，將離心柱放置于一干凈的1.5ml離心管上（自備）。室溫（15-25

C）開蓋干燥15min。加入70ul

56度預(yù)熱的AE，室溫孵育5分鐘，8000

g離心2分鐘。11、將離心管中的AE吸出重新放入離心柱的膜中央，8000

g離心1分鐘。12、測定收集管中DNA的濃度。記錄260/280，260/230值。-20

C保存。PCR

(Polymerase

chain

reaction)

是用一對寡聚DNA作為引物，通過加溫變性－退火－DNA合成這一周期的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到擴(kuò)增。由于這種擴(kuò)增產(chǎn)物是以指數(shù)形式積累的，經(jīng)25-30個(gè)循環(huán)后，擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)106-9。Dr.

Karry

Mullis

1985年發(fā)明，獲1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)；目的:

用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段PCR技術(shù)PCR的類型巢式PCR多重PCR不對稱PCR共享引物PCR錨定PCR----

-原位PCR定量PCR彩色PCR重組PCRRT-PCR----

-PCR技術(shù)的主要用途目的基因的克隆;基因突變;DNA和RNA的微量分析;

DNA序列測定:

將PCR技術(shù)引入DNA序列測定，使測序工作大為簡化，也提高了測序的速度基因突變分析:

PCR與其他技術(shù)的結(jié)合可以大大提高基因突變檢測的敏感性DNA序列分析常用技術(shù)一代測序技術(shù)及應(yīng)用二代測序技術(shù)進(jìn)展基因芯片技術(shù)：SNP和CNV分析1990 20002010測序技術(shù)的發(fā)展歷史1950 1960 1970 1980DevelopmentofSangerSequencing(1977)Invention

ofAutomatedFluorescentSequencer(1985)Invention

ofCapillarySequencerInventionofApplied

BiosystemsSolid

System(2007)Invention

ofIlluminaGenomeAnalyzerSystem(2006)Invention

of454GS

20Sequencer(2005)chemicaldegradationmethodbyMaxam-Gilbertmethod(1977)ChemicaldegradationmethodbyWhitfield(1954)Invention

ofHeliscopesinglemolecularsequencerInventionofSinglemolecule

realtime(SMRT)DNAsequencingInvention

ofNanoporesinglemolecularsequencing(OxfordNanoporecorporation)一代測序：雙脫氧末端終止法(Sanger

測序法)二代測序：合成測序法三代測序：單分子測序二、一代測序技術(shù)和臨床應(yīng)用一代測序技術(shù)、單基因遺傳病的基因檢測講 課 大 綱一代測序（Sanger測序）1977年，英國人Frederick

Sanger

發(fā)現(xiàn)在DNA復(fù)制過程中摻入ddNTP，會(huì)產(chǎn)生一系列末端終止DNA鏈，能通過電泳按長度分辨。1980年獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)Sanger測序技術(shù)PCR末端終止技術(shù)+毛細(xì)管電泳檢測技術(shù)小片段PCR序列測定最高通量：小于4MB/天基于平板膠的測序技術(shù)96通道毛細(xì)管陣列一代測序結(jié)果的分析原始測序圖專業(yè)分析軟件點(diǎn)突變?nèi)笔Р迦爰羟形稽c(diǎn)點(diǎn)突變Sanger測序仍然是目前測序的“金標(biāo)準(zhǔn)”相對于其他分型技術(shù)具有最高的準(zhǔn)確性能檢測新的突變適用于小突變檢測和驗(yàn)證Alagille綜合征(MIM118450)又稱先天性肝內(nèi)膽管發(fā)育不良征，是具有表型特征的慢性膽汁淤積的最常見原因，是一種累及多系統(tǒng)（肝臟、心臟、眼、顏面和骨骼等）的顯性遺傳性疾病。單倍劑量不足（haploinsufficiency）：JAG1基因：20p12.1，93%可發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變（/sites/GeneTests/）27Alagille

syndrome

(ALGS,

OMIM#

118450)-JAG1基因突變HGMD數(shù)據(jù)庫（2014-03）已檢測84例，其中病例為65例，39例發(fā)現(xiàn)突變（60%）Basedon92individualswithALGS[Emericketal1999]and117children

withALGS[Subramaniametal2011]-in

GeneTestsGenotype-Phenotype

CorrelationsNogenotype-phenotypecorrelationsexistbetweenclinicalmanifestationsofALGSandspecificJAG1mutationtypesorlocationwithinthe

gene.ThephenotypeofALGScausedbymutationsinJAG1isindistinguishablefromthephenotypecausedbymutationsinNOTCH2.NOTCH2mutationshadsignificantrenaldisease,oftenresultinginend-stage

renal.HeartismoresensitivetoJAG1dosagethanthe

liver.IndividualswithALGSwithmoresevereimpairmentmayhavealargerdeletionofchromosome20p12encompassingtheentireJAG1geneaswellasothergenesinthe

region.Pulmonic

Stenosis；Vascular

AnomaliesBrownSJ,McLeanWH.Oneremarkablemolecule:filaggrin.JInvest

Dermatol.2012Mar;132(3Pt

2):751-62Filaggrin

(FLG)基因-魚鱗病的致病基因AkiyamaM.FLGmutationsinichthyosisvulgarisandatopiceczema:spectrumofmutationsandpopulationgenetics.BrJDermatol.2010

Mar;162(3):472-7.ReviewSanger測序臨床應(yīng)用實(shí)例糖原累積癥1a型-GSDIa型葡萄糖-6-磷酸酯酶缺陷肝臟不能將糖原、乳酸、氨基酸分解成葡萄糖臨床表現(xiàn)：低血糖、肝大、酸中毒、高脂血癥、高尿酸血癥、高乳酸血癥、凝血功能障礙、發(fā)育遲緩等致病基因：G6PC，位于chr：17q21，全長13.6Kb，編碼區(qū)5個(gè)外顯子常染色體隱性遺傳，男女發(fā)病幾率均等88%患者可檢測到該基因的突變已報(bào)道致病突變位點(diǎn)（CM980780，PMID:9700613）患兒，男，21天。因“肝功能異常一周余”入院查體：肝臟腫大實(shí)驗(yàn)室：肝功能異常，饑餓性低血糖，曾出現(xiàn)酸中毒，血乳酸偏高，空腹血脂偏高，血尿酸偏高G6PC：Exon

1：c.202G>A，p.G68R雙向測序的必要性-排除假陽性實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控和室間質(zhì)評LDT-需要詳細(xì)的SOP實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控室間質(zhì)評遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷三、二代測序技術(shù)和臨床應(yīng)用二代測序技術(shù)、panel測序和全外顯子組測序講 課 大 綱二代測序技術(shù)（next-generation

sequencing

或deep

sequencing）單分子測序技術(shù)單分子實(shí)時(shí)測序，無需PCR擴(kuò)增運(yùn)行時(shí)間更短，讀長達(dá)到5-50K，數(shù)據(jù)產(chǎn)出100-1000G；使人類基因組測序成本低于1000美元單細(xì)胞測序2008年，Ley等對一位50多歲急性骨髓性白血病(acutemyeloid

leukemia，

AML)患者，通過單細(xì)胞分析技術(shù)，測得每個(gè)腫瘤樣本細(xì)胞擁有9個(gè)突變。--Nature 2008，456；66-722011年-Nature

Methods

將單細(xì)胞測序列為年度值得期待的技術(shù)之一--Science 25 May 2012: Vol. 336 no. 6084 pp. 976-9772013年-Science將單細(xì)胞測序列為年度最值得關(guān)注的六大領(lǐng)域榜首高通量測序4343ACGTGGTAA

CGTATACAC

TAGGCCATAGTAATGGCG CACCCTTAGTGGCGTATA CATA…ACGTGGTAATGGCGTATACACCCTTAGGCCATAShortfragmentsofDNATT..TCAC..GCAC..GC TG..GTTC..CCCG..CAGA..GC

TG..ACCT..TGGT..GC AC..GC AC..GCTT..CCAA..GC AT..ATShortDNA

sequencesACGTGACCGGTACTGGTAACGTACACCTACGTGACCGGTACTGGTAACGTACGCCTACGTGACCGGTACTGGTAACGTATACACGTGACCGGTACTGGTAACGTACACCTACGTGACCGGTACTGGTAACGTACGCCTACGTGACCGGTACTGGTAACGTATACCTCT...Sequenced

genomeGenome44Sanger測序與高通量平行測序比較PolonySangerNext-generationsequencing

technology200520062007Birthday PrinciplePyrosequencingSequencing-by-SynthesisSequencing-by-Ligation2010Semiconductor

SequencingPGM46afew

days2009:Illumina,Helicos40-50K$人類基因組測序Log10(price)20102005Year20001086422012:

100$,<24hrs2008:ABI

SOLiD60K$,2

weeks2010:

5K$,2007:

4541M$,3

months2001:

Celera100M$,3

years2001:

HumanGenomeProject2.7G$,11

yearsDNA打斷并連接接頭后，應(yīng)用水包油顆粒捕獲DNA。PCR擴(kuò)增DNA片段，置于29

μm測序板中。應(yīng)用焦磷酸反應(yīng)方法進(jìn)行序列測定454

測序儀,

FLX2005:300Mb/day,250bp,Eachrunin

7.5h.2008:XLR-HDkit,1G/day,450bp,eachrunin

10h.SOLEXA 測序儀單分子陣列測試，邊合成邊測序破碎DNA并加接頭在有接頭的小室內(nèi)擴(kuò)增靶DNA加不同顏色標(biāo)記的核苷及DNA合成所需試劑根據(jù)顏色辨別序列每張芯片可測定1G49GenerationofPolonyarray:Bridge-PCR(Solexa)DNAfragmentsareattachedtoarray

andusedasPCR

templates50Sequencing:FluorescentlylabeledNucleotides

(Solexa)Complementarystrandelongation:DNA

Polymerase51測序通量成本比較Read

lengthSequencingTechnologyThroughput(per

run)Cost

(1mbp)*Sanger~800bpSanger400kbp500$454~400bpPolony500Mbp60$Solexa75bpPolony20Gbp2$SOLiD75bpPolony60Gbp2$Helicos30-35bpSinglemolecule25Gbp1$*Source:Shendure&Ji,NatBiotech,

2008454GSJunior：~35

MbpIonTorrentPersonalGenomeMachine

(PGM)：~60M~2

GbpProton:~10-15

GbpIlluminaMiSeq:~10

GbpNextSeq500:~100

Gbp小型二代測序儀（Benchtop

sequencers）二代測序技術(shù)流程GeneID:2737（case

B114）DNA

samplesSamplepreparationand

high-throughputsequencingRaw

ReSequencingdataRawdataprocessingSequence

mappingSequence

alignmentSNP

identificationSNP

functionannotationPublic

SNPdatabaseScoreSNPnsSNPof

interestExperimentinformation&Public

diseasedatabaseAssociation

Study數(shù)據(jù)分析流程基因測序?qū)εR床診斷的影響SaundersCJ.SciTranslMed.2012Oct

3;4(154):154ra13WGS技術(shù)快速診斷NICU患兒Candiadte

gene

based

Pipeline50 hrs TATGJB2基因突變:c.85_87del, p.Phe29delBCMWGLLaunchesClinicalExomeSequencingOct2011Over3000

samplesreceived,~2500cases

analyzed85%peds;15%

adultMostly

neurologicInaddition:skeletaldisorders,pulmonaryarteryhypertension,cardiovascular

dzVarietyofreferralsources–

academicmedical

centersN=3000~25%

+Dx; ESmolecularDxfitswithclinical

pictureGermlineCancer復(fù)旦兒科的工作-高通量測序數(shù)據(jù)分析流程建立59復(fù)旦流程60檢測平臺：質(zhì)譜篩查：串聯(lián)質(zhì)譜-色譜-高效液相質(zhì)譜細(xì)胞遺傳：染色體、FISH、MLPA、aCGH基因測序：一代測序（Sanger）、二代測序質(zhì)譜核型二代測序儀一代測序儀arrayCGH分子診斷和基因組研究平臺分子基因診斷實(shí)驗(yàn)室2008年籌建2011年7月試運(yùn)行2013年兒研所重組分子實(shí)驗(yàn)室、質(zhì)譜室、新生兒篩查、細(xì)胞遺傳臨床醫(yī)師

4人技術(shù)人員

7

人研發(fā)人員

5人臨床多?？茖＜覉F(tuán)隊(duì)二代測序平臺建設(shè)過程裝機(jī)2012.4培訓(xùn)2012.5First

run2012.72012.12NMDHI2013.42013.8-102013.8-102013.8-10GSDPPHNEAIDP2014.1-2分析流程的篩選準(zhǔn)確性研究63中國循證兒科雜志2015年2月第1期64形成產(chǎn)學(xué)研的重要基地國家衛(wèi)計(jì)委批準(zhǔn)的首批國家遺傳病二代測序試點(diǎn)單位中國遺傳學(xué)會(huì)認(rèn)定的遺傳咨詢師培訓(xùn)基地復(fù)旦兒科-明碼（上海）聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)中心65檢測技術(shù)20132015新增單基因測序4910253個(gè)MLPA等拷貝數(shù)分析51510個(gè)二代測序多基因panel01919個(gè)全外顯子組測序（WES）0WES檢測372例基因檢測技術(shù)研發(fā)及應(yīng)用臨床應(yīng)用典型案例：疑難危重病例診斷和臨床干預(yù)IL10RA基因突變患兒表現(xiàn)頑固性類炎癥性腸病（IBD），經(jīng)臍血干細(xì)胞移植-國內(nèi)年齡最小、體重最輕的患兒（6M），順利康復(fù)Sanger

測序Ion

Torrent

平臺NGS

:

一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行測序?qū)嶒?yàn)平臺結(jié)果比對波士頓兒童醫(yī)院復(fù)旦兒科醫(yī)院楊琳#,王慧君#.Ion Torrent PGMTM平臺在兒童遺傳性疾病診斷中應(yīng)用初探.中國循證兒科雜志

2013;8(3):210-215已建立的部分二代panel項(xiàng)目名稱檢測指標(biāo)項(xiàng)目名稱檢測指標(biāo)新生兒遺傳代謝病篩查89個(gè)基因膽汁淤積型肝病60個(gè)基因糖原累積癥19個(gè)基因尿素循環(huán)障礙8個(gè)基因進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良DMD范可尼貧血3個(gè)基因神經(jīng)纖維瘤3個(gè)基因結(jié)節(jié)性硬化TSC1，TSC2新生兒高胰島素血癥9個(gè)基因大皰表皮松懈癥14個(gè)基因抗體缺陷病22個(gè)基因重癥聯(lián)合免疫缺陷41個(gè)基因馬凡綜合征4個(gè)基因自身炎癥性疾病20個(gè)基因重癥EBV感染和噬血相關(guān)基因15個(gè)基因多囊腎和肝纖維化5個(gè)基因肺遺傳相關(guān)疾病17基因NOONAN綜合征8個(gè)基因糖原累積病(glycogen

storage

disease，GSD)糖原累積病(glycogen

storage

disease，GSD)是一類由于先天性酶缺陷造成的糖原代謝障礙疾病,它可以出現(xiàn)機(jī)體能量代謝障礙和糖原異常堆積。多數(shù)屬常染色體隱性遺傳,少數(shù)屬X連鎖隱性遺傳。GSD根據(jù)酶缺陷不同和糖原在體內(nèi)沉積的部位不同分為

13型涉及與糖原合成、分解相關(guān)的十幾個(gè)基因（已知）。其中Ⅰ、

Ⅲ、

Ⅳ、

Ⅵ、

Ⅸ型

以

肝

臟病變?yōu)橹鳎?/p>

Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ型以肌肉組織受損為主

。臨床以Ⅰ型最多見（25%），

Ⅰ型又可分為Ⅰa（G6PC1）和

Ⅰb型（SLC37A4）。臨床分型困難。一代測序耗時(shí)、耗力、耗錢。GSD-panel:涉及19個(gè)基因。臨床應(yīng)用實(shí)例糖原累積病基因測序panel設(shè)計(jì)

GSD2Ampliseq

panel：

19gen