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文檔簡介
幾種菌種的保存及復(fù)蘇方法(含擴(kuò)增方法)
定期移植法,亦稱傳代培養(yǎng)保藏法,包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等。是指將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基中,最適條件下培養(yǎng),待生長充分后,于4~6℃進(jìn)行保存并間隔一定時間進(jìn)行移植培養(yǎng)的菌種保藏方法。
操作步驟如下:
1培養(yǎng)基制備
1.1器皿準(zhǔn)備
培養(yǎng)基制備過程中所用的一些玻璃器皿,如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等,經(jīng)洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。
1.2溶解培養(yǎng)基配料
先在燒杯中放適量水,按培養(yǎng)基配方稱取各項材料,依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解,最后加足水量,攪拌均勻。
1.3調(diào)pH值
配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫,根據(jù)要求加稀酸(0.1mol/L鹽酸)或稀堿(10%氫氧化鈉)調(diào)pH值。加酸或堿液時要緩慢、少量、多次攪拌,防止局部過堿或過酸而導(dǎo)致測量不準(zhǔn)確和營養(yǎng)成分被破壞。
1.4加凝固劑
配制固體培養(yǎng)基時需加凝固劑,如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中,加熱并不斷攪拌至融解,再補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。
1.5過濾分裝
在二層紗布中間夾入脫脂棉,將配好的培養(yǎng)基趁熱過濾并分裝。斜面培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的四分之一(4~5mL),穿刺培養(yǎng)基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過程中勿使培養(yǎng)基沾污管口,以免弄濕棉塞造成污染。
1.6包扎標(biāo)記
將試管加棉塞,外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。
1.7滅菌
根據(jù)要求將培養(yǎng)基滅菌,通常蒸汽滅菌為121℃,15~20min。
1.8斜面擺放
滅菌后及時擺放斜面,斜面長度不超過試管管長的二分之一為宜。
1.9無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作無菌檢驗,通常30℃培養(yǎng)1~3天。無菌檢查合格后將其保存于4℃下備用。
2接種
2.1斜面接種
2.1.1點(diǎn)接
把菌種點(diǎn)接在斜面中部偏下方處。適用于擴(kuò)散型生長及絨毛狀氣生菌絲類霉菌(如毛霉、根霉等)。
2.1.2中央劃線
從斜面中央自下而上劃一直線。適用于細(xì)菌和酵母菌等。
2.1.3稀波狀蜿蜒劃線法
從斜面底部自下而上劃“之”字形線。適用于易擴(kuò)散的細(xì)菌,也適用于部分真菌。
2.1.4密波狀蜿蜒劃線法
從斜面底部自下而上劃密“之”字形線。能充分利用斜面獲得大量菌體細(xì)胞,適用于細(xì)菌和酵母菌等。
2.1.5挖塊接種法
挖取菌絲體連同少量培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)接到新鮮斜面上。適用靈芝等擔(dān)子菌類真菌。
2.2穿刺接種
用接種針從原菌種斜面上挑取少量菌體,從柱狀培養(yǎng)基中心自上而下刺入,直到接近管底(勿穿到管底),然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用于細(xì)菌和酵母菌等。
2.3液體接種
挑取少量固體斜面菌種或用無菌滴管等吸取原菌液接種于新鮮液體培養(yǎng)基中。
3培養(yǎng)
將接種后的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中,在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定期或得到成熟孢子。細(xì)菌培養(yǎng)溫度一般為30~37℃,真菌培養(yǎng)溫度一般為25~28℃。
4保藏
培養(yǎng)好的菌種于4~6℃保存,根據(jù)要求每3~6個月移植一次。某些菌種,如芽裂酵母,阿舒假囊酵母,棉病囊霉等,須1~3個月移植一次。
保藏濕度用相對濕度表示,通常為50%~70%。
斜面菌種應(yīng)保藏相繼三代培養(yǎng)物以便對照,防止因意外和污染造成損失。
液體石蠟保藏法
亦稱礦物油保藏法,定期移植保藏法的輔助方法。是指將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上,最適條件下培養(yǎng)至菌種長出健壯菌落后注入滅菌的液體石蠟,使其覆蓋整個斜面,再直立放置于低溫(4~6℃)干燥處進(jìn)行保存的一種菌種保藏方法。
操作步驟如下:
1液體石蠟的準(zhǔn)備
選用優(yōu)質(zhì)化學(xué)純液體石蠟,將液體石蠟分裝加塞,用牛皮紙包好,采用以下兩種方式進(jìn)行滅菌:
121℃濕熱滅菌30min,置40℃恒溫箱中蒸發(fā)水分,經(jīng)無菌檢查后備用。
160℃干熱滅菌2個小時,冷卻后,經(jīng)無菌檢查后備用。
2斜面培養(yǎng)物的制備
參照定期移植法。
3灌注石蠟
將無菌的液體石蠟在無菌條件下注入培養(yǎng)好的新鮮斜面培養(yǎng)物上,液面高出斜面頂部1cm左右,使菌體與空氣隔絕。
4保藏
4.1注入液體石蠟的菌種斜面以直立狀態(tài)置低溫(4~6℃)干燥處保藏,保藏時間2~10年。
4.2保藏期間應(yīng)定期檢查,如培養(yǎng)基露出液面,應(yīng)及時補(bǔ)充無菌的液體石蠟。
5恢復(fù)培養(yǎng)
恢復(fù)培養(yǎng)時,挑取少量菌體轉(zhuǎn)接在適宜的新鮮培養(yǎng)基上,生長繁殖后,再重新轉(zhuǎn)接一次。
3.標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇、復(fù)壯及標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株的制備
3.1物品及試劑:接種針、酒精燈、移液管、75%酒精及75%酒精棉球
3.2培養(yǎng)基
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基:用于黑曲霉復(fù)蘇、復(fù)壯.用于白色念珠菌復(fù)蘇、復(fù)壯.
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基:用于生孢梭菌復(fù)蘇、復(fù)壯.
營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基:用于金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單胞菌復(fù)蘇、復(fù)壯。
3.3操作步驟:
a.打開潔凈工作臺。
b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并讓其自然風(fēng)干。
c.用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線,用手輕輕將安瓿掰開(開啟安瓿時必須小心,因為安瓿遇熱時可能會破裂)。
d.以無菌方法用一無菌吸管從已準(zhǔn)備好的上述液體培養(yǎng)基中移取0.5~0.8ml到安瓿中。
e.輕輕地旋轉(zhuǎn)安瓿以使凍干菌種和液體培養(yǎng)基充分混合并完全溶解。
f.用無菌吸管將安瓿內(nèi)菌液全部轉(zhuǎn)接到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基。
g.根據(jù)安瓿上所標(biāo)明的不同菌種類型而將其培養(yǎng)于相應(yīng)的溫度(細(xì)菌培養(yǎng)溫度30~35℃,培養(yǎng)18~24小時;真菌培養(yǎng)溫度23~28℃,培養(yǎng)3~5天。觀察是否渾濁,渾濁說明菌種復(fù)蘇生長;若不渾濁,細(xì)菌應(yīng)延長培養(yǎng)時間至7天,真菌應(yīng)延長培養(yǎng)時間至14天,若仍未渾濁,滅菌處理。
h.黑曲霉的菌懸液先室溫待菌懸液融化后用無菌吸管吸取管內(nèi)液體1~2滴滴在改良馬丁瓊脂斜面上,用吸管涂布均勻,置23~28℃培養(yǎng)5~7天,斜面正面為黑褐色厚絨狀,色澤均一,不應(yīng)有雜色,斜面?zhèn)让鏌o色,接近菌層培養(yǎng)基略帶黃色。確認(rèn)后用含有0.05%(ml/ml)的吐溫-80的0.9%無菌氯化鈉溶液洗脫到無菌試管中。
i.取經(jīng)復(fù)蘇后的上述細(xì)菌菌液8-10ml至液體培養(yǎng)基中按g項操作對菌種進(jìn)行復(fù)壯。以無菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入100ml20%的無菌甘油混勻,1-2ml/管分裝于凍存管。每個菌種制備10支,按順序進(jìn)行編號,最后一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制,即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲備管。黑曲霉的h項下洗脫液按h項下方法進(jìn)行復(fù)壯,制成復(fù)壯后的孢子懸液20ml。以無菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入20ml、30%的無菌甘油混勻,1-2ml/管封存于凍存管。制備10支,按順序進(jìn)行編號,最后一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制,即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲備管。將上述制備好的凍存管逐支粘貼標(biāo)簽。內(nèi)容包括:菌種名稱、菌種代號、編號、代次、制備日期、制備人、貯存條件、有效期至等。
j.儲備菌種管制備成功,儲存于-20℃,有效期為三年。
3.4菌種確認(rèn)
用無菌接種環(huán)從質(zhì)控管中取細(xì)菌培養(yǎng)物接種到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上,或相應(yīng)的宜于該細(xì)菌生長的鑒別平板上,劃線分離出單個菌落。然后在30~35℃下培養(yǎng)2~3天;同樣的方法取真菌到玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平板,并在23~28℃下培養(yǎng)7天;培養(yǎng)后,觀察其菌落形態(tài),應(yīng)符合該菌種形態(tài)特征。
3.5污染處理
假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長,則說明或操作有污染或菌種不純。將此被污染了的培養(yǎng)物滅菌處理。可尋找原因重新分離挑選純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為第四代。并重新制備儲備菌種管
3.6菌種的傳代與保藏
將菌種接種至一新鮮培養(yǎng)基上,每萌發(fā)一次即稱為一代,因此,當(dāng)原始菌種復(fù)溶并轉(zhuǎn)至新培養(yǎng)基內(nèi)生長,即認(rèn)為已傳代一次,從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代,冷凍干燥的原始菌種開啟后轉(zhuǎn)種后為第1代,直到第3代為工作菌種。菌種的傳代次數(shù)(自原始菌種凍干粉起)不得超過5代。
菌種的傳代保藏過程
3.3項下標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇為傳第一代,復(fù)壯為第二代。傳第三代時取1支凍存管自然解凍,將其轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時,工作用菌種為第3代。工作用菌種,分為兩類:一類用于定期傳代(W3),一類用于實(shí)驗用(S3)。
定期傳代用菌的傳代其操作步驟如下(斜面接種法):
(1)從冰箱冷藏室中取出菌種斜面后,應(yīng)在室溫放置約30分鐘。
(2)將裝有新鮮配制的培養(yǎng)基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期,和傳代菌種一并移入潔凈工作臺,打開紫外燈照射一小時。
(3)關(guān)閉紫外燈。點(diǎn)燃酒精燈,左手握住菌種斜面,將管口靠近火焰上方,右手拿接種棒后端,將接種環(huán)燒紅約30秒,隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過三次。
(4)右手用無名指、小指及掌部夾住管塞,左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼,右手再輕輕拔開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷后再至菌苔上,刮取少量菌苔,隨即取出接種棒并將菌種管口移至火焰上方。
(5)塞上管塞,左手將菌種管放下,取營養(yǎng)瓊脂斜面(或改良馬丁瓊脂斜面)一支,照上述操作打開管塞,將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的底部向上劃一條直線,然后從底部向上作連續(xù)曲線劃線,一直劃到斜面頂端,使細(xì)菌接種在斜面的表面上。
(6)取出接種環(huán),在火焰上方將培養(yǎng)基管蓋上塞子,然后將接種過細(xì)菌的接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。
(7)將已接種好的細(xì)菌管置30~35℃細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)22~24h,真菌管置23~28℃真菌培養(yǎng)箱最多培養(yǎng)7天。
當(dāng)工作用菌種傳代代數(shù)小于5時,可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種,如:(W3)可直接轉(zhuǎn)接為(W4)。按上述程序操作,直至(W4)轉(zhuǎn)為(W5)為止,需重新接種,舊的工作菌種進(jìn)行銷毀。
菌種斜面的培養(yǎng)、保藏條件及時間
菌種培養(yǎng)條件及時間培養(yǎng)基保存條件及時間
大腸埃希菌(CMCC(B)44102)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
金黃色葡萄球菌(CMCC(B)26003)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
枯草芽孢桿菌(CMCC(B)63501)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
銅綠假單胞菌(CMCC(B)10104)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
乙型副傷寒沙門菌(CMCC(B)50094)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
生孢梭菌(CMCC(B)64941)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
白色念珠菌(CMCC(F)98001)23~28℃最多7天改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
黑曲霉(CMCC(F)98003)23~28℃最多7天改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
短小芽孢桿菌(CMCC(B)63602)30~35℃22~24h營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃~8℃保存3個月
注:菌種斜面1次/周觀察狀態(tài)是否正常。
3.7菌種的使用及銷毀
每次進(jìn)行菌種復(fù)活時,只能復(fù)活一個菌種。如果要復(fù)活其他菌時,應(yīng)對所用物品重新消毒滅菌。
每次操作,都應(yīng)進(jìn)行記錄。菌種管上應(yīng)貼有牢固的標(biāo)簽。標(biāo)明菌種名稱、菌種代號、代次、傳代人、編號和傳代日期、貯存條件、有效期至等。
廢棄菌種及實(shí)驗用品廢棄物的處理:121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘。并對操作過程進(jìn)行記錄。極有趣味的語文游戲-適合語文課堂教學(xué)極有趣味的語文游戲玩法:第一輪:選拔題1、成語對對子(注意對仗要工整,意思要相對)。例:粗茶淡飯(山珍海味)答案:流芳百世(遺臭萬年)指鹿為馬(點(diǎn)石成金)精雕細(xì)刻(粗制濫造)雪中送炭(錦上添花)伶牙利齒(笨嘴拙舌)2、說出有“舌”字的成語,說得最多的勝出。答案:七嘴八舌、妄口八舌、閑嘴淡舌、唇槍舌劍、張口結(jié)舌、笨嘴笨舌、鸚鵡學(xué)舌等。3、各舉出以一、二、三、四、五、六、七、八、九、十開頭的俗語(包括成語、慣用語等)。例如:一是一,二是二答案:一不做,二不休一心一意二一添作五三心二意三下五除二三人同行,必有我?guī)熕耐ò诉_(dá)五花八門六六大順七上八下八九不離十八仙過海,各顯神通九九歸一九牛二虎之力十有八九十拿九穩(wěn)4、下面人名各取自什么成語?杜鵬程(鵬程萬里)陳殘云(風(fēng)卷殘云)王任重(任重道遠(yuǎn))劉海粟(滄海一粟)丁慧中(秀外慧中)焦若愚(大智若愚)5、成語填空第一組:(心)服(口)服(以)德(報)德(以)訛(傳)訛(以)牙(還)牙(倚)老(賣)老(將)計(就)計第二組:神(乎)(其)神精(益)(求)精痛(定)(思)痛欺(人)(自)欺日(復(fù))(一)日微(乎)(其)微8、怪體詩如何讀?龍虎虎望山山山湖湖湖湖湖海海海海會仙仙仙仙仙仙仙仙(一龍二虎望三山,五湖四海會八仙)第二輪:初級1、“大珠小珠落玉盤”所形容的是什么樂器的彈奏聲?A、琵琶B、古箏C、揚(yáng)琴2、《孔雀東南飛》里,劉蘭芝"十三能織素,十四學(xué)裁衣,十五彈箜篌,十六誦詩書”,請問,“箜篌”是什么樂器:A、撥弦樂器B、擊弦樂器(A)3、"有板有眼"的"板"是我國傳統(tǒng)音樂節(jié)奏中的:A、強(qiáng)拍B、弱拍(A)4、我們常說"隔著門縫看人”,當(dāng)我們隔著門縫看人時,看到的人:A、比原來扁了B、和原來一樣C、比原來寬了(B)5、在古代,“爵”是一種什么器皿?A、食器B、酒器(A)6、“白雪公主”這個形象最早來自于:A、格林童話B、安徒生童話C、伊索寓言(B)7、在“精衛(wèi)填?!钡墓适吕?"精衛(wèi)”是A、一個人B、一只鳥C、一只猴子D、一條龍(B)8、王昭君沒有得到漢元帝的召見而遠(yuǎn)嫁匈奴單于,是因為:A、王妃對她的陷害B、畫師歪曲她的形象C、大臣說她的壞話(B)9、安徒生童話《海的女兒》里,小美人魚變成人是為了見到誰?A、漁夫B、皇后C、王子(C)10“臥薪嘗膽”說的是:A、夫差B、范蠡C、管仲D、勾踐(D)第三輪:擂臺題從上面剩下的題目選。1、第一次搶答你知道下面的慣用語是什么嗎?把在團(tuán)體中起主導(dǎo)的人喻為(主心骨)把足智多謀的人喻為(智多星)把接待賓客的當(dāng)?shù)刂魅擞鳛椋|道主)把公堂臺階下受審的囚犯喻為(階下囚)把吝嗇錢財、一毛不拔的人喻為(鐵公雞)把混混噩噩、不明事理的人喻為(糊涂蟲)把世故圓滑的人喻為(老油條)把沒有專業(yè)知識的外行人喻為(門外漢)把技藝不精、勉強(qiáng)湊合的人喻為(三腳貓)2、第二次搶答數(shù)字猜成語(小黑板)12345609(七零八落)1256789(丟三落四)1+2+3(接二連三)333555(三五成群)3.5(不三不四)510(一五一十)9寸+1寸=1尺(得寸進(jìn)尺)3、第三次搶答說出歇后語的后半部分:矮子坐高凳--夠不著八月的核桃--擠滿了人(仁)稻草人救火--引火上身、同歸于盡擦脂粉進(jìn)棺材--死要面子炒咸菜放鹽巴--太閑(咸)了廁所里掛個鐘--有始有終外甥打燈籠--照舅豬鼻子插蔥--裝象一、成語對對子:(注意對仗要工整,意思要相對)井然有序(雜亂無章、混亂不堪)指鹿為馬(點(diǎn)石成金)固若金湯(危如朝露、不堪一擊)流芳百世(遺臭萬年)雪中送炭(錦上添花、火上澆油)伶牙利齒(笨嘴拙舌)精雕細(xì)刻(粗制濫造、粉妝玉砌)粗茶淡飯(錦衣玉食)二、成語不離“舌”形容信口胡說(枉口拔舌)形容驚詫無言(張口結(jié)舌、瞠目結(jié)舌)形容能說會道(唇槍舌劍、巧舌如簧)形容不善辭令(笨嘴拙舌)形容隨聲附和(鸚鵡學(xué)舌)形容人多嘴雜(七嘴八舌)形容說話輕?。ㄝp嘴薄舌、油嘴滑舌)三、數(shù)字俗語:表示實(shí)實(shí)在在,不可更改時用(一言為定)表示做事不考慮周到,干了再說時用(不管三七二十一)表示一樣?xùn)|西兩人平分時用(二一添作五)表示某人干事麻利時用(三下五除二)表示差不多時用(八九不離十)表示某人打小算盤時用(小九九)表示歸根到底時用(九九歸一)表示把握大時用(十拿九穩(wěn))表示很不容易時用(九牛二虎之力)表示信心十足時用(萬無一失)表示距離遠(yuǎn)時用(十萬八千里)四、下面人名各取自什么成語?杜鵬程(鵬程萬里)陳殘云(風(fēng)卷殘云)王任重(任重道遠(yuǎn))劉海粟(滄海一粟)丁慧中(秀外慧中)甘如飴(甘之如飴)焦若愚(大智若愚)五、成語填空:(心)服(口)服(以)德(報)德(以)訛(傳)訛(以)牙(還)牙(倚)老(賣)老(將)計(就)計神(乎)(其)神精(益)(求)精痛(定)(思)痛欺(人)(自)欺將(門)(有)將日(復(fù))(一)日微(乎)(其)微六、寶塔詩如何讀?開山滿桃山杏山好景好來山客看山里山僧山客山山中山路轉(zhuǎn)山崖(這首詩這樣讀的:山中山路轉(zhuǎn)山崖山客山僧山里來山客看山好景好山桃山杏滿山開)七、怪體詩如何讀?龍虎虎望山山山湖湖湖湖湖海海海海會仙仙仙仙仙仙仙仙萬國州州州州州州州州州掉川川川川(數(shù)一數(shù)龍虎山湖海仙州川便知一二:一龍二虎望三山,五湖四海會八仙,萬國九州掉四川。)八、下列對聯(lián)各詠的是誰?1、一門父子三詞客,千古文章四大家。(三蘇、韓愈、柳宗元、歐陽修、蘇軾)2、豪氣壓群雄,能使力士脫靴,貴妃捧硯;仙才媲美,不讓參軍俊逸,開府清新。(李白)3、玉帳深宵悲駿馬,楚歌四面促紅妝。(項羽)4、四面湖山歸眼底,萬家憂樂到心頭。(范仲淹)九、你知道下面的慣用語是什么嗎?1、把在團(tuán)體中起主導(dǎo)的人喻為(主心骨)2、把足智多謀的人喻為(智多星)3、把接待賓客的當(dāng)?shù)刂魅擞鳛椋|道主)4、把公堂臺階下受審的囚犯喻為(階下囚)5、把吝嗇錢財、一毛不拔的人喻為(鐵公雞)6、把混混噩噩、不明事理的人喻為(糊涂蟲)7、把世故圓滑的人喻為(老狐貍)8、把沒有專業(yè)知識的外行人喻為(門外漢)9、把技藝不精、勉強(qiáng)湊合的人喻為(南郭先生)十、數(shù)字猜成語:12345609(七零八落)1256789(丟三落四)1+2+3(接二連三)333555(三五成群)3.5(不三不四)510(一五一十)9寸+1寸=1尺(得寸進(jìn)尺)十一、巧用標(biāo)點(diǎn)有位書生到親戚家串門,頃刻間外面就下起雨來,這時天已將晚,他只得打算住下來。但這位親戚卻不樂意,于是就在紙上寫了-一句話:下雨天留客天留人不留書生看了,即刻明臼親戚的意思,卻又不好明說,就心想一不做、二不休,干脆加了幾個標(biāo)點(diǎn):下雨天,留客天,留人不?留!親戚一看,這句話的意思完全反了。也就無話可說,只好給書生安排了住宿。其實(shí),這句話除了書生標(biāo)點(diǎn)的這一種辦法外。還有三種標(biāo)法,可分別使它變成陳述、疑問、問答三種句式,請你加上標(biāo)
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