腹瀉病相關病毒學課件

病毒性腹瀉研究進展1腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測意義臨床常見的腹瀉病原學檢測方法博暉免疫熒光分析系統(tǒng)簡介2Part1

腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測意義腹瀉病概述腹瀉病發(fā)病趨勢病毒等其它感染性腹瀉現(xiàn)狀病毒性腹瀉臨床診斷意義3腹瀉病概述腹瀉病是由多種病原體、多種因素引起的以大便次數(shù)增多和大便性狀改變?yōu)樘攸c的一組疾病，是兒童患病和死亡的主要原因，也是營養(yǎng)不良的重要原因[1]。我國每年有8.36億人次患腹瀉，其中5歲以下小兒占3億人次。2005年中國小兒因急性腹瀉死亡人數(shù)多達160萬[1]。[1]《兒童腹瀉病診治專家共識》中華醫(yī)學會兒科分會消化學組、中華醫(yī)學會兒科分會感染學組、中華兒科雜志通訊作者：陳潔浙江大學醫(yī)學院兒童醫(yī)院（杭州310003）4病名2010年2011年2012年2013年發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)霍亂1570240750531細菌性和阿米巴性痢疾25224836237930242074291318866913傷寒和副傷寒140413117981119983141363其它感染性腹瀉病746551438365912388567817101258920腹瀉病發(fā)病趨勢[2]全國法定傳染?。ǜ篂a類）發(fā)病數(shù)據(jù)（數(shù)據(jù)來源：衛(wèi)計委網站）腹瀉病發(fā)病趨勢2013年全年（2013年1月1日零時至12月31日24時），丙類傳染病共報告發(fā)病3358955例，死亡291人，報告發(fā)病率為248.07/10萬,病死率0.02/10萬，分別較2012年下降10.5%和51.25％。[3]報告中發(fā)病人數(shù)居前五位的病種依次為：手足口病、其它感染性腹瀉病、流行性腮腺炎、流行性感冒和急性出血性結膜炎，占丙類報告發(fā)病總數(shù)的99.29％。[3]報告中死亡數(shù)居前三位的是：手足口病、其它感染性腹瀉病和流行性感冒，占丙類傳染病報告死亡總數(shù)的98.28％。[3][3]《2013年度全國法定傳染病疫情情況》中華人民共和國國家衛(wèi)計委6病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀2006年中國共報告其它感染性腹瀉病例741809例，報告發(fā)病率為56.73/10萬。既往調查農村地區(qū)人群腹瀉發(fā)病率為1220/10萬-3360/10萬，就診率僅為6.3%-50%。在日本，2005年3046家兒科定點監(jiān)測的感染性腹瀉病例就達941572例，由此可見中國其它感染性腹瀉的報告病例數(shù)與實際發(fā)病水平相差甚大[4]。[4]《中國感染性腹瀉監(jiān)測策略的思考與建議》作者單位：中國疾病預防控制中心疾控處應急辦腸道傳染病防制辦公室，作者：張靜，副研究員，主要從事傳染病監(jiān)測與控制工作7病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀

中國2011年其它感染性腹瀉的流行病學及病原學特征：選取2011年1-52周“疾病監(jiān)測信息報告管理系統(tǒng)”中全國31個省報告的其他感染性腹瀉病例作為研究對象，共836591例；其中，具有明確病原學診斷的確診病例59929例。其它感染性腹瀉突發(fā)公共衛(wèi)生事件信息中，共30起暴發(fā)疫情[5]。

[5]《2011年中國其他感染性腹瀉監(jiān)測現(xiàn)狀分析》《中華預防醫(yī)學雜志》CASCSCD2013年第4期328-332頁,共5頁8病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀2011年報告的其它感染性腹瀉患者836591例，發(fā)病率為62.39/10萬。病例發(fā)病年齡主要集中在0-5歲組，發(fā)病率為447.06／10萬（436098例），占總數(shù)的52.3％（436098／836591），報告病例發(fā)病有2個高峰期，夏季（第23-35周），占34.33％（287231/836591）；冬季（第43-52周），占23.54％（196939／836591）。報告的30起疫情中，其中5起有明確病原學診斷結果。其中，4起由諾如病毒引起。2011年其它感染性腹瀉確診病例占報告病例數(shù)的7．16％（59929／836591），其中，病毒感染56687例。[5]《2011年中國其他感染性腹瀉監(jiān)測現(xiàn)狀分析》《中華預防醫(yī)學雜志》CASCSCD2013年第4期328-332頁,共5頁9病毒性腹瀉診斷臨床意義腹瀉病臨床癥狀相似，但病毒性腹瀉的治療方案與細菌等引起的腹瀉有很大不同。有報道發(fā)現(xiàn)雙重病毒或多重病毒感染的腹瀉，其癥狀更嚴重，病情進展快，致死率更高。由于腸道傳染病的臨床表現(xiàn)和常用的輔助檢查缺乏明顯的特異性，因此存在著疾病早期病原體診斷不明確的危險因素，從而存在著疾病早期濫用抗生素、生病期延長而增加患者痛苦和經濟負擔的客觀因素。

因此，針對由病毒引起的腹瀉研制快速準確的診斷技術，對指導臨床對癥治療和避免濫用抗生素有重要意義，特別是對嬰幼兒腹瀉在診斷上更有意義。[6]《病毒性腹瀉的研究進展》雷炳鈞，華西醫(yī)科大學；《臨床內科雜志》1998年第4期；10病毒性腹瀉診斷臨床意義為疾病診斷和鑒別診斷、臨床療效觀察和預后效果提供依據(jù)。符合循證醫(yī)學原則，提升醫(yī)療診治科學性。從癥狀學診治轉變?yōu)椴∫驅W診治。客觀上降低抗生素濫用，縮短不必要的病程。減少病患不必要的痛苦，降低不必要的經濟負擔。為不同的病因，不同的自然病史，不同的臨床相，不同的預后轉歸提供判斷依據(jù)?？焖贉蚀_的診斷方法11病毒性腹瀉診斷臨床意義為流行病學監(jiān)測及事件分析處理積累資料記錄在人群中的傳播規(guī)律為臨床醫(yī)生提供相對可靠的病原體感染譜，為經驗性診斷和治療提供科學依據(jù)。制定針對性的公共衛(wèi)生應對策略：隔離傳染源切斷傳播途徑，如搞好環(huán)境衛(wèi)生，個人衛(wèi)生，認真洗手等保護易感人群，如接種疫苗明確病因學診斷可以消除不必要的恐慌，尤其是暴發(fā)疫情12病毒性腹瀉診斷臨床意義為科學研究提供可靠數(shù)據(jù)為科研提供大量基礎數(shù)據(jù)的支持為臨床和流行病學積累資料，促進研究工作的深入開展為醫(yī)療單位、相關科室的科研提供可靠檢測工具、檢測方法學保證13病毒性腹瀉診斷臨床意義

目前最常見的引起腹瀉的病毒有4種，其中以輪狀病毒、腸道腺病毒最為常見。病毒性腹瀉中40%-60%由輪狀病毒感染引起，其次是腸道腺病毒、諾如病毒、星狀病毒感染[6]。[6]《病毒性腹瀉的研究進展》雷炳鈞，華西醫(yī)科大學；《臨床內科雜志》1998年第4期；14病毒性腹瀉診斷臨床意義輪狀病毒最常見的致腹瀉病毒，常溫穩(wěn)定，可在環(huán)境表面存活數(shù)日，糞便中可存活數(shù)月，55攝氏度30分鐘滅活。糞口途徑傳染秋冬季高發(fā)起病急，潛伏期1~2天，癥狀期3~8天發(fā)熱嘔吐腹痛，噴射性水樣腹瀉，易導致脫水病程自限，多數(shù)預后良好，嬰幼兒較重，少數(shù)脫水死亡首次感染后可減少再次感染幾率，并減輕再次感染的嚴重性，各型無交叉免疫，可多次感染15病毒性腹瀉診斷臨床意義腸道腺病毒對溫度敏感，對含氯劑和脂溶劑不敏感，抗紫外線糞口途徑傳染終年可發(fā)病，冬春多發(fā)病程長，多超過一周腹瀉嘔吐，可多器官受累，心肌炎，CNS（中樞神經系統(tǒng)）病程自限，預后良好，腸道腺病毒是腸套疊的重要原因，40%的腸套疊與腸道腺病毒有關感染后可獲得持久免疫力，很少二次感染16病毒性腹瀉診斷臨床意義諾如病毒糞口途徑傳染，水源、食物污染易導致爆發(fā)流行潛伏期1~2天，癥狀持續(xù)1~2天惡心嘔吐腹部痙攣性腹瀉，普遍感到病情嚴重，一日內多次劇烈嘔吐預后良好抗體沒有免疫作用，可反復感染17病毒性腹瀉診斷臨床意義星狀病毒冬季多發(fā)潛伏期3~4天，癥狀期3~5天癥狀輕，少見脫水與遷延性腹瀉有關18Part2臨床常見的病原學檢測方法臨床常見的病原學檢測方法19方法學特點病毒分離培養(yǎng)技術特異性強，但檢測時間長，技術要求高，敏感性不強。電鏡檢測結果直觀、準確，但設備昂貴，專業(yè)性強，人員要求高，病毒滴度要求高不符合常規(guī)臨床檢測需求。免疫學方法靈敏度高、特異性強，應用面廣且易于普及，適合大樣本量篩查,試驗結果顯而易見，試驗條個體要求低，但自動化水平不高。分子生物學方法靈敏度、準確度高，但檢測時間長，設備和操作人員專業(yè)要求高，成本昂貴。免疫學方法，因檢測準確、速度快、應用面廣得到臨床門診的青睞！臨床常見的病原學檢測方法免疫學方法分很多種，臨床常用檢測方法包括：酶聯(lián)免疫法（ELISA）、膠體金法、免疫熒光法等。臨床常見的病原學檢測方法21臨床常見的病原學檢測方法酶聯(lián)免疫檢測方法技術特點：用酶來標記特定的抗體，在檢測過程中，如果樣本中有相應的病毒抗原，帶有酶標記的抗體就會與其結合，利用酶的催化作用，就可以檢測出病毒。優(yōu)點：靈敏度高，檢測準確缺點：操作相對復雜，一種試劑只能檢測一種病毒，檢測時間較長，尤其是對腹瀉病毒的檢測具有很大的缺點。因為，酶聯(lián)免疫檢測試劑一般一個檢測板上有96個試劑位，而這96個試劑位不能獨立使用，醫(yī)院為了降低檢測成本，一般都會積累樣本到一定數(shù)量才進行項目檢測，而對于腹瀉病人來說，需要快速進行檢測，因此，該方法不能夠適應臨床對腹瀉病毒快速檢測的要求。22臨床常見的病原學檢測方法膠體金方法技術特點：基于免疫金染色法技術開發(fā)的試劑盒技術特點是用特定直徑的膠體金顆粒來標記病毒抗體。在檢測過程中分，如果樣本中有病毒，就會與金標記的抗體進行結合，使其分子大小和分子量發(fā)生改變，同時顏色也會發(fā)生相應的變化，用肉眼觀察顏色來判斷病毒類型。優(yōu)點：簡便，迅速缺點：膠體金的技術缺點是自動化水平低，靈敏度相對較低，主要是肉眼判別檢測結果，因此檢測結果容易受到人為因素干擾，特別是低濃度樣本更容易產生誤判，同時結果穩(wěn)定時間過短，假陽性率高。23臨床常見的病原學檢測方法免疫熒光法技術特點：

利用免疫層析技術，采用雙抗體夾心法檢測腹瀉病毒。當待測樣本加入測試卡后，待測樣本中的病毒抗原與熒光標記的抗體形成反應復合物，在層析作用下，反應復合物沿硝酸纖維膜向前移動，分別被硝酸纖維膜檢測區(qū)上預先包被病毒克隆抗體捕獲，在檢測區(qū)上形成反應帶。使用熒光免疫分析儀檢測反應線上的熒光值，當熒光閾值等于或高于檢出限時，顯示為陽性，當熒光閾值低于檢出限時顯示為陰性，從而實現(xiàn)檢測腸道病毒的目的。優(yōu)點：半自動化，簡單、快速、多病毒聯(lián)合檢測；檢測結果半定量，避免人為肉眼主觀誤讀，穩(wěn)定時間比膠體金多一倍；方便連接醫(yī)院LIS等系統(tǒng)。24臨床常見的病原學檢測方法方法學免疫熒光法膠體金法酶免法檢測結果半定量（儀器）定性（肉眼）定量檢測時間10-15分鐘15-20分鐘2-3小時結果有效時段60min30min20min內靈敏度高低高檢測成本低低低自動化水平

高低低與LIS\HIS信息化可以不可以不可以檢測隨機性單個監(jiān)測單個監(jiān)測批量檢測臨床常見的病原學檢測方法綜合各種因素考慮，免疫熒光法是目前臨床快速診斷最佳技術。原因：多病毒聯(lián)合檢測、性價比最高，病因學覆蓋面最廣，結果準確，客觀，避免肉眼主觀判讀，可以連接醫(yī)院信息系統(tǒng)，極大方便醫(yī)院信息共享與傳遞。26Part3博暉免疫熒光分析系統(tǒng)簡介產品簡介產品特點27產品簡介博暉免疫熒光分析系統(tǒng)組成28檢測原理---雙抗體夾心法檢測原理-------免疫熒光法（雙抗體夾心法）產品簡介【檢驗過程】用樣本取樣勺（在樣本稀釋液瓶中）取適量糞便樣本放入樣本管中，震蕩混勻，靜置1分