TNAIA 0256-2023 羊多動物鏈球菌病防治技術規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團 體 標 準T/NAIA0256-2023羊多動物鏈球菌病防治技術規(guī)程Technicalproceduresfordiagnosisandpreventionofmulti-animalstreptococcaldiseaseofsheep2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實施寧夏化學分析測試協(xié)會 發(fā)布T/NAIA0256-2023T/NAIA0256-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學分析測試協(xié)會提出并歸口。寧夏職業(yè)技術學院、寧夏農業(yè)學校、固原市農業(yè)綜合培訓服務中心、固原市職業(yè)技術學校。知新、費媛媛、趙娜、梁小軍、謝建亮、毛磊、施安、康曉冬、高?；?、張久盤、于有利。本文件為首次發(fā)布。羊多動物鏈球菌病防治技術規(guī)程范圍本文件規(guī)定了羊場多動物鏈球菌病防治技術的術語和定義、診斷、預防和治療、無害化處理。本文件適用于規(guī)模羊場多動物鏈球菌病的防治。其他羊場參照執(zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14926.42實驗動物細菌學檢測標本采集GB16548病害動物和病害動物產品生物安全處理規(guī)程GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標準術語和定義下列術語和定義適用于本文件。多動物鏈球菌病（Streptococcuspluranimalium）由多動物鏈球菌引發(fā)羊的一種呈現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)的傳染病。5%脫纖維羊血培養(yǎng)基由豆粉瓊脂培養(yǎng)基添加5%脫纖維羊血組成，主要用于多動物鏈球菌的分離。診斷流行病學多動物鏈球菌可造成羊、多個組織器官感染。長途運輸、飼養(yǎng)環(huán)境變化、氣候變化等因素可誘發(fā)多動物鏈球菌病的發(fā)生。可通過呼吸道和消化道等途徑傳播。臨床癥狀診斷體溫升高、四肢乏力、行動困難、呼吸急促、咳嗽。病理變化診斷全身多處可見水泡，肺組織、氣管等出現(xiàn)腫脹、表面淤血、出血。病原學診斷樣本采集爛 爛按照GB/T14926.42執(zhí)行。如果24h內不能送達實驗室，-20℃保存。樣品解凍時，置于38℃～40℃水浴解凍。病原分離及鏡檢將采集的肺臟組織表面消毒后，剪取肺臟深部組織一小塊，然后無菌操作條件下接種于脫纖維羊血固體培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，無菌操作條件下挑取單菌落接種在新的5%脫纖維羊血固體培養(yǎng)基上，5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h后，可觀察到散在的淡灰色、透明，小針狀菌落，菌落周圍呈現(xiàn)溶血現(xiàn)象；經(jīng)革蘭氏染色后，鏡檢觀察到呈鏈狀的革蘭氏陽性菌。PCR診斷Forward primer： 5'-GAATTCCGAGAGTTTGATCCTGGCT-3'，Reverse primer：5'-AAGCTTGAGGTAATCCATCCCCACGTTC-3'。PCR反應體系為50uL體系：模板2uL，上下游引物各1uL（10umol/L），2×TaqMasterMix25uL，ddH2O1uL。反應條件：95℃2min；95℃30s，53℃20s，72℃2min，30個循環(huán)；72℃延伸8min。PCR擴增產物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析，用凝膠回收試劑盒純化回收PCR產物，將PCR純化產物進行測序并NCBI進行BLAST分析。結果判定符合4.1、4.2和4.3的特征判斷為疑似病例。同時符合4.4的特征判斷為確診病例。預防和治療預防加強飼養(yǎng)及環(huán)境衛(wèi)生管理，定期消毒，定期監(jiān)測。不從疫區(qū)或發(fā)病區(qū)引進羊。羊只引進后應隔離觀察并采取應激預防措施，確保無病后方可混群。治療可使用青霉素類、喹諾酮類、磺胺類等藥物，使用劑量參照說明