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文檔簡介

考點2微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1.選擇培養(yǎng)基2.微生物的選擇培養(yǎng)——稀釋涂布平板法的操作步驟(1)系列稀釋操作:該操作常用在將細胞接種到培養(yǎng)基之前,通過[2]液體稀釋的方法分散細胞,隨著稀釋程度的增大,單位體積中的微生物細胞數(shù)量[3]減少,細胞得以分散。操作步驟:(2)涂布平板操作3.微生物的數(shù)量測定——兩種計數(shù)方法的比較活菌計數(shù)法項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個[7]單菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定的[8]細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板,在顯微鏡下觀察、計數(shù),然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量公式每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×M,其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)每毫升原液中所含的微生物數(shù)=每小格的平均微生物數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)缺點當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分死菌與活菌結果與實際值相比[9]偏小與實際值相比[10]偏大提醒血細胞計數(shù)板比細菌計數(shù)板厚,常用于相對較大的酵母菌細胞、霉菌孢子等的計數(shù)。用細菌計數(shù)板可對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù)。4.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)教材補遺[選必3P18“探究·實踐”]本活動只是初步篩選了能分解尿素的細菌,還需要借助生物化學的方法來鑒定所分離的菌種:分解尿素的細菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨,氨會使培養(yǎng)基的堿性增強,在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若指示劑變紅,可確定該細菌能夠分解尿素?;A自測1.平板劃線法和稀釋涂布平板法都用固體培養(yǎng)基,接種工具都為接種針,都能計數(shù)。(×)2.統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結果準確,一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進行統(tǒng)計。(×)3.用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時,只要稀釋度足夠高,就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。(√)4.分解尿素的細菌在分解尿素時,可以將尿素轉化為氨,使培養(yǎng)基的pH降低。(×)5.剛果紅可以與纖維素形成透明復合物,所以可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(×)6.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)[2023山東,T15A]。(×)7.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物[2023山東,T15D]。(√)8.血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定,也可用于細菌的數(shù)量測定[2023江蘇,T7D]。(×)深度思考1.請從主要步驟、接種工具、菌種獲取等方面比較分析平板劃線法和稀釋涂布平板法。提示平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較如表:項目平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線系列稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點可以觀察菌落特征、分離混合菌落可以計數(shù)、觀察菌落特征、分離混合菌落缺點不能計數(shù)操作復雜,平板不干燥則效果不好,容易蔓延共同點都要用固體培養(yǎng)基;都需進行無菌操作;都會在培養(yǎng)基表面形成單菌落;都可用于觀察菌落特征2.在進行菌落計數(shù)時為什么要選擇菌落數(shù)為30~300的平板?能否只選擇一個菌落數(shù)為30~300的平板進行計數(shù)?提示(1)因為若平板中的菌落數(shù)小于30,說明稀釋倍數(shù)太大,會造成誤差;若平板中的菌落數(shù)大于300,則菌落的生長受到抑制,并且難以區(qū)分各個菌落,也不能準確計數(shù),會造成誤差。(2)不能。根據(jù)實驗的重復性原則,為排除偶然因素對實驗結果的影響,同一稀釋度的菌液涂布后至少要選擇三個平板進行計數(shù)。3.利用稀釋涂布平板法純化分解尿素的細菌時,經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上出現(xiàn)多種菌落,可能的原因有哪些?提示出現(xiàn)多種菌落的可能原因:培養(yǎng)基制備過程中被雜菌污染;接種過程中,無菌操作不符合要求;系列稀釋時,無菌操作不符合要求等。4.為什么稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目低?提示因為當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。研透高考明確方向命題點1微生物的選擇培養(yǎng)1.[2023廣東]研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖所示)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷,下列最可能篩選到目標菌的條件組合是(D)A.a點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基解析由圖可知,隨著堆肥時間的延長,堆肥溫度先升高后保持穩(wěn)定,a點時堆肥溫度最低,c點時堆肥溫度最高。該實驗的目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌,應該用以角蛋白為唯一氮源的培養(yǎng)基進行篩選培養(yǎng),且應該在高溫條件下取樣,即c點時取樣,D符合題意。2.[2022江蘇]下列是某同學分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設計,不合理的是(D)A.選擇農田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌解析在細菌分解尿素的化學反應中,細菌合成的脲酶將尿素分解成氨,氨會使培養(yǎng)基的pH升高,酚紅指示劑將變紅,D錯誤。命題點2微生物的分離與計數(shù)3.[全國Ⅰ高考,15分]某種物質S(一種含有C、H、N的有機物)難以降解,會對環(huán)境造成污染,只有某些細菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基,甲的組分為無機鹽、水和S,乙的組分為無機鹽、水、S和Y?;卮鹣铝袉栴}:(1)實驗時,盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用高壓蒸汽滅菌的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質是瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均屬于選擇培養(yǎng)基。(2)實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2×107個/mL,若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液,且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個,則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋104倍。(3)在步驟⑤的篩選過程中,發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時,某菌株對S的降解量反而下降,其原因可能是S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長(答出1點即可)。(4)若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù),請寫出主要實驗步驟:取淤泥加入無菌水中,涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后計數(shù)。(5)上述實驗中,甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同,但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質,即水、碳源、氮源和無機鹽。解析(1)實驗過程中,對盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶進行滅菌時,常采用高壓蒸汽滅菌法。據(jù)題圖分析可知,乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,與甲培養(yǎng)基相比,其特有的組分Y物質應是凝固劑瓊脂。甲、乙培養(yǎng)基均只允許能利用物質S作為氮源和碳源的微生物生長,因此均為選擇培養(yǎng)基。(2)據(jù)題意,假設至少將搖瓶M中的菌液稀釋x倍,才能保證稀釋后的100μL菌液中細菌細胞數(shù)不超過200個,初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2×107個/mL,則有200÷(100×10-3)×x=2×107,得x=104,因此至少應將搖瓶M中的菌液稀釋104倍。(3)在篩選過程中,若培養(yǎng)基中S濃度過高,可能會導致細胞失水,進而抑制菌株

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