透射電鏡技術

透射電鏡技術

TransmissionElectronicMicroscopyTechnique小組成員李丹李琨郭靖王艷婷曹蕾指導老師吳巖教授2007級電子顯微鏡技術碩士研究生課程1一、概述電子顯微鏡是一種高精密度的電子光學儀器，它具有較高分辨本領和放大倍數(shù)，是觀察和研究物質微觀結構的重要工具。為人類認識世界開辟了更廣闊的天地。2二、透射電鏡的結構及原理

目前，主流的透射電鏡鏡筒是電子槍室和由6～8級成像透鏡以及觀察室等組成。陰極燈絲在燈絲加熱電流作用下發(fā)射電子束，該電子束在陽極加速高壓的加速下向下高速運動，經(jīng)過第一聚光鏡和第二聚光鏡的會聚作用使電子束聚焦在樣品上，透過樣品的電子束再經(jīng)過物鏡、第一中間鏡、第二中間鏡和投影鏡四級放大后在熒光屏上成像。電鏡總的放大倍數(shù)是這四級放大透鏡各級放大倍數(shù)的乘積，因此透射電鏡有著更高的放大范圍（200×～1000000×）。

3巨噬細胞吞噬細菌的電子顯微鏡圖像圖14三、透射電鏡技術的樣品制備1、超薄切片：將包埋塊中的生物樣品切成一定厚度的薄片，在透射電子顯微鏡下觀察細胞的細微結構。以了解不同結構形態(tài)、不同功能的細胞內(nèi)部結構和成分。2、冷凍復型：一種制備透射電子顯微鏡樣品的方法。也可稱為冷凍斷裂或冷凍蝕刻技術。在生物、化學科學等領域，是一項重要的實驗技術。5超薄切片技術主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步驟。6冷凍復型技術流程化學固定防凍保護

樣品冷凍和斷裂

冷凍蝕刻和冷凍復型復型膜剝離和撈膜圖27光學顯微鏡與電子顯微鏡的區(qū)別項目電子顯微鏡光學顯微鏡照明光源電子束可見光照明波長加速電壓80kV時，波長其中紫色光波長400nm

為0.0042nm

分辨率0.2nm0.2μm（肉眼分辨0.2mm）放大倍數(shù)100萬倍1000倍成像透鏡電磁透鏡玻璃透鏡照明介質1.33x10-4Pa以上真空度空氣、玻璃、油焦距調整調整物鏡電流，改變磁場改變物鏡與樣品之間距離

強度調整焦距

調焦樣品50～100nm超薄切片厚切片樣品載體具有支持膜載網(wǎng)載玻片8Thecomparisonpictureof

microscopeandtransmissionelectronmicroscope圖3圖49項目掃描電鏡透射電鏡分辨本領70～100?2?放大倍數(shù)20～40萬倍100萬倍加速電壓1～50kV幾十千伏～幾百千伏圖像特點景深長、三維立體結構景深小、兩維平面結構樣品制備固定－脫水－臨界點干燥固定－脫水－包埋－超薄切

－噴涂金屬片－重金屬染色樣品尺寸1cm2

50～100nm切片樣品損傷光斑直徑只有幾十埃的電大約1μm直徑電子束打到

子束在樣品上掃描，對樣樣品上，造成一定程度損傷

品損傷極小樣品成像信號

二次電子、背散射電子透射電子放大倍數(shù)調節(jié)用衰減器改變掃描線圈電調整中間鏡電流改變放大率

流，進行放大率調節(jié)

決定分辨率因素

入射電子束直徑?jīng)Q定圖像

分辨率。加速電壓、透鏡縮小率

掃描電鏡和透射電鏡的比較