TCAICC 02-2023 生乳中百菌清的快速檢測(cè) 膠體金免疫層析法

ICS67.050Z備案號(hào)：全 聯(lián) 農(nóng) 業(yè) 產(chǎn) 業(yè) 商 會(huì) 標(biāo) 準(zhǔn)生乳中百菌清的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法Rapiddetectionofchlorothalonilinrawmilk—Colloidalgoldimmunochromatography送審稿2023-12-31發(fā)布 2024-01-01實(shí)施全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)發(fā)布PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次目 次 I前 言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)和定義 1原理 1試劑與材料 1儀器與設(shè)備 2分析步驟 2結(jié)果判定 3結(jié)果確認(rèn) 3性能指標(biāo) 4其他 4附 錄 A（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算 5前 言本文件按照GB/T1本文件由全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)提出。本文件起草單位：全聯(lián)農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)商會(huì)、西北農(nóng)林科技大學(xué)、北京勤邦科技股份有限公司、內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司、西北大學(xué)、北大荒研究院（北京）本文件為首次發(fā)布。PAGEPAGE1生乳中百菌清的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法范圍本文件規(guī)定了生乳中百菌清的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于生乳中百菌清的快速定性測(cè)定。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法國(guó)市監(jiān)食檢規(guī)〔2023〕1號(hào)市場(chǎng)監(jiān)管總局關(guān)于規(guī)范食品快速檢測(cè)使用的意見(jiàn)術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理（T線(xiàn)）試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。試劑甲醇（CH3OH）。CAS1，純度≥98%。表1 百菌清參考物質(zhì)的中文名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量中文名稱(chēng)英文名稱(chēng)CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量百菌清Chlorothalonil1897-45-6C8N2Cl4265.91注：或等同可溯源物質(zhì)。溶液配制百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱(chēng)取百菌清參考物質(zhì)（5.1.2）10mg（精確0.01mg）（5.1.1）10mL1.0mg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃避光保存，6個(gè)月。（10（1.00.1mL10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）10μg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)中間液。-201個(gè)月。（0.1（100.1mL10mL（5.1.1）0.1μg/mL的百菌清標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用新配。材料百菌清膠體金免疫層析試紙條，適用基質(zhì)為生乳。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。試紙條。儀器與設(shè)備0.01mg。6.2 移液器：10μL～200μL、100μL～1000μL。迷你金屬浴。膠體金讀數(shù)儀（可選）。分析步驟試樣制備取適量有代表性樣品充分混勻。試樣提取以生乳為基質(zhì)的樣品可直接上樣檢測(cè)或根據(jù)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)稀釋后檢測(cè)。測(cè)定步驟吸取200μ5..15103℃溫育5in，將檢測(cè)試紙條（5.3.2）樣品端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，35℃溫育5min，取出試紙條，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。注1：測(cè)定步驟建議按照試紙條說(shuō)明書(shū)。注2：結(jié)果判定可使用膠體金讀數(shù)儀，讀數(shù)儀的具體使用參照儀器使用說(shuō)明書(shū)。質(zhì)控試驗(yàn)每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)?？瞻自囼?yàn)稱(chēng)取空白試樣，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)準(zhǔn)確移取空白試樣1.94mL放入離心管中，加入0.06mL百菌清標(biāo)準(zhǔn)工作液（0.1μg/mL）（5.2.3），使試樣中百菌清濃度為3μg/L，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。結(jié)果判定目視判定通過(guò)對(duì)比質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）和檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖見(jiàn)圖1。陰性結(jié)果質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）顯色，檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）顏色深于質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)或與質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）顏色基本一致，表明樣品中百菌清含量低于方法檢出限，判定為陰性。陽(yáng)性結(jié)果（C線(xiàn)（T線(xiàn)（C線(xiàn)無(wú)效質(zhì)控線(xiàn)（C線(xiàn)）不顯色，無(wú)論檢測(cè)線(xiàn)（T線(xiàn)）是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失效，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。圖1 目視判定示意圖讀數(shù)儀測(cè)定按讀數(shù)儀說(shuō)明書(shū)要求操作，直接讀數(shù)并進(jìn)行結(jié)果判定。質(zhì)控試驗(yàn)要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。結(jié)果確認(rèn)當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，采用參比方法進(jìn)行確證。性能指標(biāo)檢出限：3μg/L。10.2 靈敏度：≥95%。10.3 特異性：≥90%。假陰性率：≤5%。假陽(yáng)性率：≤10%。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)附錄A。交叉反應(yīng)率：滴滴涕、三氯殺螨砜、氯丹<1%。其他本方法參比方法為SN/T2320-2009-（包括所有的修改單。附 錄 A（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算方法見(jiàn)表A.1。表A.1 快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算方法樣品情況a檢測(cè)結(jié)果b總數(shù)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性N11N12N1.＝N11＋N12陰性N21N22N2.＝N21＋N22總數(shù)N.1＝N11＋N21N.2＝N12＋N22N＝N1.＋N2.或N.1＋N.2顯著性差異2)2(12－21－1)2/(12＋21)，自由度(df)＝1靈敏度(p＋)/%p＋＝N11/N1.×100特異性(p－)/%p－＝N22/N2.×100假陰性率(pf－)/%pf－＝N12/N1.×100＝100－靈敏度假陽(yáng)性率(pf＋)/%pf＋＝N21/N2.×100＝100－特異性相對(duì)準(zhǔn)確度c/%(N11＋N22)/(N1.＋N2.)×100注：N為任何特定單元的結(jié)果數(shù)，第一個(gè)下標(biāo)指行，第二個(gè)下標(biāo)指列。例如，N11表示第一行，第一列；N1.表示所有的第一行，N.2