The Innovation (IF32.1) 葛均波院士團隊發(fā)現(xiàn)缺血性疾病新的靶點蛋白及作用機制

TheInnovation(IF:32.1):葛均波院士團隊發(fā)現(xiàn)缺血性疾病新的靶點蛋白及作用機制于卓缺血性疾病包括缺血性心臟病、缺血性腦疾病和外周動脈疾病，以組織器官缺血缺氧所致的血流限制或阻塞為特征。部分內(nèi)皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EndMT)是在生理性血管生成過程中觀察到的一種中間表型，內(nèi)皮細胞正在向間質(zhì)狀態(tài)轉(zhuǎn)變以支持新生血管形成。2024年1月8日Cell子刊TheInnovation雜志發(fā)表了來自復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院心臟病全國重點實驗室葛均波院士/李華研究員團隊的一項題名“GTF2H4regulatespartialEndMTviaNF-κBactivationthroughNCOA3phosphorylationinischemicdiseases”的研究論文。作者鑒定了EndMT過程中轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4可以與ERCC3協(xié)同發(fā)揮作用，并采用磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)聯(lián)合信號通路磷酸化抗體芯片（華盈生物提供此芯片檢測服務(wù)）檢測了關(guān)鍵信號通路上蛋白表達及其磷酸化變化，發(fā)現(xiàn)了GTF2H4參與了NCOA3蛋白的絲氨酸磷酸化，促進了NCOA3和p65之間的相互作用，導(dǎo)致了部分EndMT過程中NF-kB/Snail信號軸的轉(zhuǎn)錄激活，揭示了靶向GTF2H4在組織修復(fù)方面的前景，并為治療缺氧/缺血性疾病提供了潛在的機會。GTF2H4促進缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT研究首先發(fā)現(xiàn)了小鼠心肌梗死后梗死邊緣區(qū)內(nèi)皮細胞會逐漸表達間充質(zhì)標記物α-SMA，體外實驗中微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)缺氧處理后也表達α-SMA、Fibronectin等間充質(zhì)標記物，并且額內(nèi)皮細胞標記物CD31和VE-Cadherin部分丟失，表明缺血缺氧誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞發(fā)生了部分EndMT（圖1）。圖1缺血/缺氧誘導(dǎo)部分EndMT研究團隊基于前期轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)合GTEx數(shù)據(jù)庫的相關(guān)研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了對缺氧信號顯著響應(yīng)的一個轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4。證明了缺氧顯著減弱內(nèi)皮細胞中GTF2H4表達水平，rescue實驗證明了GTF2H4能夠緩解缺氧誘導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細胞損傷，并促進缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT。細胞實驗進一步驗證了GTF2H4可以促進細胞遷移并抑制體外血管生成（圖2）。圖2:GTF2H4促進缺氧誘導(dǎo)的部分EndMTGTF2H4和ERCC3協(xié)同調(diào)控部分EndMT為了揭示GTF2H4調(diào)控部分EndMT的分子機制，研究團隊通過蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)了GTF2H4可以調(diào)控ERCC3蛋白的表達。GTF2H4并沒有改變ERCC轉(zhuǎn)錄水平，說明了GTF2H4影響了ERCC蛋白的穩(wěn)定性。之前的研究表明了GTF2H4和ERCC是TFIIH轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的兩個關(guān)鍵組成蛋白，GTF2H4含有ERCC結(jié)合的序列。CO-IP實驗也證明了GTF2H4和ERCC相互作用。研究還發(fā)現(xiàn)了GTF2H4通過自噬介導(dǎo)的降解路徑調(diào)控ERCC3蛋白的穩(wěn)定性。功能實驗證明了部分EndMT的調(diào)控依賴于GTF2H4和ERCC之間的互作（圖3）。圖3:GTF2H4和ERCC3協(xié)同調(diào)控部分EndMT。GTF2H4通過NF-κB信號軸促進低氧誘導(dǎo)的部分EndMT為了研究GTF2H4調(diào)控部分EndMT下游相關(guān)的信號分子和通路，研究者首先通過磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)了差異磷酸化的多肽主要富含在絲裂原活化蛋白激酶的機制靶點Hippo、NF-κB和Notch信號通路中，所有這些都與EndMT相關(guān)。由于NF-κB信號通路對與內(nèi)皮細胞活性、血管生成非常重要，研究者利用了NF-κB信號通路磷酸化抗體芯片分析了GTF2H4是否通過NF-κB信號調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT。磷酸化抗體芯片分析發(fā)現(xiàn)了過表達GTF2H4顯著增加p65蛋白Ser536激活位點的磷酸化，而GTF2H4基因敲除降低了IκB和IKK的磷酸化（圖4）。隨后通過雙熒光素酶、EMA等試驗得出GTF2H4主要通過NF-κB信號通路調(diào)控部分EndMT。圖4:磷酸化抗體芯片發(fā)現(xiàn)了GTF2H4調(diào)控NF-κB信號關(guān)鍵的蛋白磷酸化最后研究者發(fā)現(xiàn)了GTF2H4能夠促進NCOA3上1330位點的絲氨酸發(fā)生磷酸化，進而結(jié)合p65以激活NF-κB/Snail通路，促進部分EndMT的作用機制。圖5:GTF2H4通過NCOA3S1330位點的磷酸化調(diào)控NF-κB激活的部分EndMT小結(jié)這篇文章使用了磷酸化抗體芯片和蛋白質(zhì)譜技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)GTF2H4通過NF-κB信號調(diào)節(jié)缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT的分子機制。揭示了部分內(nèi)皮間質(zhì)化在缺血性疾病血管新生中的關(guān)鍵作用，并首次在體內(nèi)外闡明轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4能夠通過NCOA3/NF-κB/Snail通路促進缺血缺氧誘導(dǎo)的部分內(nèi)皮間質(zhì)化，改善缺血后血運重建和組織修復(fù)，通過探索血管生成與部分EndMT之間的重疊生物學(xué)行為，以確定臨床促進血管生成的治療策略。｜華盈生物提供多通路和單通路多種類型的芯片檢測服務(wù)華盈生物提供近30款信號通路磷酸化抗體芯片，覆蓋大多數(shù)的經(jīng)典信號通路。這些芯片既包括能夠系統(tǒng)檢測單條通路的專業(yè)芯片，如：MAPK、Apoptosis、CREB通路芯片等，也包括能夠?qū)Χ鄺l信號通路進行廣泛篩選的PEX100和CSP100芯片等，能夠幫助大家快速高效的鎖定關(guān)鍵信號通路相關(guān)文獻FangZ,ZhaoG,ZhaoS,etal.GTF2H4regulatespartialEndMTviaNF-kappaBactivationthroughNCOA3phosphorylationinischemicdiseases.Innovation(Camb),2024,5(2):100565.相關(guān)閱讀2023年華盈客戶高分文章集錦CellReportsMedicine（IF=14.3）：磷酸化抗體芯片助力研究者發(fā)現(xiàn)急性髓性白血病耐藥的關(guān)鍵信號通路蛋白要聞快訊|上海第九人民醫(yī)院發(fā)布輔助生殖研究重要成果SciBull（IF=11.780）中國學(xué)者發(fā)現(xiàn)大豆飲食減少膽囊癌發(fā)生的科學(xué)證據(jù)NatCommun：